在纤维蛋白凝块上诱导脐血间充质干细胞向膀胱尿路上皮细胞的分化

背景:在纤维蛋白凝块上诱导脐血间充质干细胞分化为膀胱尿路上皮细胞,尚无明确方案。目的:探讨脐血来源间充质干细胞在纤维蛋白凝块上分化为膀胱尿路上皮细胞的可能性。方法:实验组将脐血间充质干细胞接种于人工制备的脐血来源的纤维蛋白凝块上与胎儿膀胱尿路上皮细胞共培养,对照组将脐血间充质干细胞接种于人工制备的脐血来源的纤维蛋白凝胶上仅用DMEM/F1培养基培养。结果与结论:实验组的脐血间充质干细胞逐渐伸展呈多角形,细胞扁平变大,透射电子显微镜下具有膀胱尿路上皮细胞的超微结构,抗广谱角蛋白(AE1/AE3)免疫组织化学染色阳性。对照组的脐血间充质干细胞呈长梭形,抗广谱角蛋白(CKAE1/AE3)免疫组织化学染色阴性。提示在纤维蛋白凝块上诱导脐血间充质干细胞有分化为膀胱尿路上皮细胞的能力。

人Sox2和Nanog基因的克隆及其对胎肺成纤维细胞分化的影响

目的克隆人Sox2、Nanog基因编码序列,构建pSG5-Sox2及pSG5-Nanog真核表达重组质粒,转染胎肺间质成纤维细胞,观察Sox2、Nanog基因表达并鉴定其功能。方法应用RT-PCR方法分别从4～6周龄流产胎儿脑组织和膀胱癌细胞中扩增出Sox2及Nanog基因编码全序列,将其连接至pSG5表达载体。经测序比对后,将重组质粒pSG5-Sox2及pSG5-Nanog转染胎肺成纤维细胞,采用免疫细胞化学法检测Sox2及Nanog基因表达情况,倒置显微镜观察转染前后细胞的形态学变化。结果人Sox2基因和Nanog基因编码序列全长957bp和934bp,重组质粒pSG5-Sox2、pSG5-Nanog测序成功,BLAST比对成功,转染胎肺成纤维细胞后,免疫细胞化学检测到Sox2、Nanog阳性表达。转染后胎肺成纤维细胞形态学先呈现干细胞样变化,进而分化为上皮样细胞,CK(广谱)染色阳性,并有向神经细胞分化的趋势,巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶染色阳性。结论克隆了人Sox2、Nanog基因,成功转染胎肺成纤维细胞并检测到基因阳性表达,胎肺间质成纤维细胞呈干细胞样生长并有向上皮及神经样细胞分化的趋势,为进一步研究Sox2和Nanog基因功能及重编程细胞分化奠定了基础。