妊娠早期滋养层组织人绒毛膜促性腺激素分泌的调节

为了探讨人早孕滋养层组织中人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）分泌的自分泌和旁分泌调节机制。将人工流产获得的正常绒毛组织剪成１ｍｍ３小块接种在涂有胶原的培养瓶中，每瓶加入２ｍｌ含有１．７５ｎｍｏｌ／ＬＮ－２－羟乙基哌嗪－Ｎ＇－２乙烷磺酸（ＨＥＰＥＳ）、２ｎｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺、１０５ＩＵ／Ｌ青霉素和１００ｍｇ／Ｌ链霉素的ＭｃＣｏｙ５ａ培养液，绒毛组织先培养在３７℃的ＣＯ２孵箱中（ＣＯ２：空气＝５％：９５％）４８ｈ，以排除其内源的激素，然后加入各种激素或作用物，每天采集并更换一次培养液，收集的培养液存于－２０℃留待放射免疫测定用。实验结束时以１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ裂解组织块供蛋白质测定用。结果表明ＧｎＲＨ对ｈＣＧ分泌呈现双相的作用：低剂量刺激而高剂量抑制ｈＣＧ分泌，而ＴＲＨ对滋养层未见效应。去甲肾上腺素亦具有促进ｈＣＧ分泌的作用，并呈现剂量依赖反应，随去甲肾上腺素处理时间的增长，其刺激效应亦更为明显。阻断内源孕酮的转化和代谢，或加入外源孕酮或其前体，均不影响ｈＣＧ的分泌。此外，睾酮、雌二醇、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）和前列腺素Ｆ２α（ＰＧＦ２α）等激素对ｈＣＧ的分泌也无直接影响。

米非司酮对离体大鼠垂体细胞促黄体激素分泌的影响及其机制

本实验应用垂体细胞体外培养模型 ,观察了米非司酮 (MP)对GnRH、高浓度细胞外K+([K+]e)和蛋白激酶C激活剂PMA诱导的LH分泌的影响。结果证实MP可以剂量和时间依赖方式抑制GnRH诱导的LH分泌 ,并可拮抗P调节GnRH诱导的LH分泌效应。同时发现 10 -7mol/LMP短时间处理 4h能抑制 6 0mmol/LKCl和 10 -8mol/LPMA诱导的LH分泌 ,而 10 -7mol/LP短时间处理则起促进作用。当处理时间延长为 5 2h时 ,P对 6 0mmol/LKCl和 10 -8mol/LPMA诱导的LH分泌无明显作用 ,P也仅对 6 0mmol/LKCl刺激的LH分泌起抑制作用 ,但不影响 10 -8mol/LPMA诱导的LH分泌。当P和MP同时处理时 ,则MP可逆转P对高 [K+]e和PMA诱导的LH分泌的调节作用 ,表明MP影响GnRH诱导的LH分泌的机制可能与MP影响电压依赖性钙离子通道和PKC的活性有关。

促性腺激素释放激素受体及其基因表达调控

促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ，ＬＨＲＨ）在体内的重要功能是由ＧｎＲＨ受体介导的。ＧｎＲＨ受体是近年神经内分泌和生殖生物学研究的热点之一。本文从ＧｎＲＨ受体的分子结构，ＧｎＲＨ受体基因表达调控，ＧｎＲＨ受体分布及表达，调节ＧｎＲＨ受体的因素以及ＧｎＲＨ受体介导的细胞信号转导等几个方面对ＧｎＲＨ受体近年来的研究进展进行了综述。对ＧｎＲＨ受体的研究。

干扰素-γ对妊娠小鼠黄体细胞孕酮分泌的影响

采用妊娠小鼠黄体细胞离体培养的方法，研究了外源的干扰素－γ（ＩＮＦ－γ）对妊娠小鼠黄体细胞孕酮分泌的影响．结果表明：ＩＦＮ－γ对妊娠小鼠黄体细胞分泌孕酮有显著作用，在一定剂量范围内，ＩＦＮ－γ有促黄体作用，但当ＩＦＮ－γ大量存在时，对孕酮分泌又有一定的抑制作用．

催乳素调节绵羊睾丸间质细胞睾酮分泌机制的研究

本实验利用睾丸间质细胞体外培养方法，研究了催乳素（ＰＲＳ）对睾酮分泌调节的机制。结果表明，体外培养的绵羊睾丸间质细胞对激素的刺激在培养的前四天较敏感。ｈＣＧ依剂量关系刺激睾酮的分泌。ＰＲＬ对于ｈＣＧ的刺激作用起着双相调节作用：低剂量的ＰＲＬ（１～３０ｎ／ｍｌ）可以增加ｈＣＧ的刺激强度３５～７１％，而高剂量的ＰＲＬ（１０００ｎｇ／ｍｌ）则抑制ｈＣＧ的活性４０％。当培养液中加入不同剂量的睾酮合成前体物（孕酮、雄烯二酮），ＰＲＬ可以调节前体物向睾酮的转化。低剂量的ＰＲＬ促进孕酮的转化，而高剂量的ＰＲＬ则抑制其转化。ＰＲＬ对雄烯二酮的转化则均呈现抑制性。用放射受体测定表明：低剂量ＰＲＬ（３～１０ｎｇ／ｍｌ）可以增加绵羊睾丸间质细胞膜上ＬＨ／ｈＣＧ受体的数量。但当ＰＲＬ剂量增加到３０～１０００ｎｇ／ｍｌ时，细胞膜上的ＬＨ／ｈＣＧ受体数量没有明显变化。这些结果表明：ＰＲＬ可以直接作用于绵羊性腺调节睾酮的分泌。这种调节作用是通过诱导细胞膜上ＬＨ／ｈＣＧ受体的数量和调节前体物转化为睾酮的某些步骤实现的。

天花粉蛋白对体外无血清培养的人早期绒毛细胞滋养层细胞hCG，孕酮分泌的影响

本研究以体外无血清培养的人早期绒毛细胞滋养层细胞和绒毛组织培养为模型，测定了天花粉蛋白对滋养层细胞ｈＣＧ、孕酮分泌的影响，发现体外无血清培养的细胞滋养层细胞分泌的ｈＣＧ在天花粉蛋白浓度为０．１μｇ／ｍｌ即下降５０％，而后下降缓慢，８μｇ／ｍｌ以上方降为零，而绒毛组织培养在天花粉蛋白浓度为０．１μｇ／ｍｌ时ｈＣＧ下降近９０％，而后下降缓慢，至８μｇ／ｍｌ以上降到零，说明体外培养的细胞滋养层细胞中有两个群体，其中一个对天花粉蛋白敏感，另一个不敏感，尽管在形态上很难区别。孕酮的反应则不同，在细胞滋养层细胞和绒毛组织培养中，随天花粉蛋白浓度升高，孕酮分泌均缓慢下降，未出现两阶段下降过程。

人蜕膜细胞培养作为抗早孕药物筛选模型的研究

目的建立分散的人蜕膜质细胞培养模型以用于抗生育药物的筛选研究。方法早孕６～９周的正常人蜕膜组织经胶原酶（１５０ｕ／ｍｌ）和透明质酸酶（５０ｕ／ｍｌ））于３５℃恒温水浴中振荡消化１００ｍｉｎ，并经２１６μｍ不锈钢网过滤后得到分离的人蜕膜基质细胞；该细胞培养于无血清培养液（以下简称培液）中，通过变换培液中添加生长因子及抗生育药物的浓度观察其生长变化情形。结果人蜕膜细胞在无血清ＦＤ＋８Ｆ培液中，可维持贴壁生长３周以上。上皮生长因子、胰岛素、转铁蛋白、硒、氢化可的松及小剂量的孕酮（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）和雌二醇（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）有维持蜕膜细胞生长的作用；抗生育物质芫花酯甲（０．５μｇ／ｍｌ）、米非司酮（Ｒｕ４８６，１０μｇ／ｍｌ）、他莫西芬（１０μｇ／ｍｌ）、土槿皮乙酸（５０μｇ／ｍｌ）和双炔失碳酯（６０μｇ／ｍｌ）对于培养的人蜕膜细胞均有杀伤作用，而天花粉（１００μｇ／ｍｌ）无明显作用。米非司酮与他莫西芬、双炔失碳酯分别合并使用，对蜕膜细胞的损伤有协同作用。结论人蜕膜细胞培养作为抗生育药物初筛模型有较多优点，有待进一步发展推广。

激活素A和抑制素A对人绒毛膜上皮癌细胞系的增殖及分泌孕酮的影响

通过比较两种肽类激素（激活素和抑制素）对细胞增殖与激素分泌的作用，了解它们作用方式的差异。以来源于人胎盘的绒毛膜上皮癌细胞系Ｊａｒ细胞为实验材料，利用ＭＴＴ法测定细胞增殖，利用放射免疫法测定培养液中的孕酮含量，研究了激活素Ａ和抑制素Ａ对Ｊａｒ细胞的增殖和孕酮分泌的影响。结果表明，激活素Ａ（１～１００μｇ／Ｌ）对细胞增殖有明显的促进作用，且呈现浓度依赖性，浓度为３０μｇ／Ｌ时作用最强。与之相对比，抑制素Ａ对Ｊａｒ细胞的增殖无显著作用。同时，激活素Ａ能刺激Ｊａｒ细胞分泌孕酮，最大作用浓度为１０μｇ／Ｌ。抑制素Ａ对Ｊａｒ细胞分泌孕酮则没有明显的影响，以上结果提示，激活素Ａ对人绒毛膜上皮癌细胞的增殖和激素分泌起着较明显的调节作用，而抑制素Ａ则未见直接作用。

催乳素对大鼠前列腺细胞合成酸性磷酸酶的作用及其机制的研究

本文利用无血清培养的末成年大鼠前列腺上皮细胞模型研究了催乳素(PRL)和性激素对前列腺细胞分泌前列腺特异的酸性磷酸酶(PAP)功能的作用,并对其作用途径进行了探讨。结果表明:PRL 显著促进前列腺细胞PAP的合成和分泌,但与双氢睾酮(DHT)或雌二醇(E_2)无协同作用,单独的DHT 或E_2对PAP 的合成和分泌也无显著作用。在PRL 的作用过程中,腺苷酸环化酶未活化;PRL 和前列腺素E_2或F_(2α)有协同作用,消炎痛能阻断PRL 的作用。综合实验结果,本实验证明了PRL 对前列腺细胞的分泌功能有直接的刺激作用,在PRL 的作用过程中,可能有前列腺素的参与。

大鼠前列腺上皮细胞在无血清培养液中增殖的调节

本文报道了未成年大鼠前列腺上皮细胞的无血清培养模型的建立方法，并利用该模型研究了生长因子、催乳素及性激素对前列腺细胞增殖功能的作用。结果表明：胰岛素、表皮生长因子、转铁蛋白、霍乱毒素和牛垂体提取物对前列腺细胞的增殖有直接的促进作用，糖皮质激素对细胞的增殖无明显影响。催乳素刺激细胞的增殖，但与双氢睾酮或雌二醇无协同作用。单独的双氧睾酮或雌二醇对细胞的增殖无显著作用。

催乳素对大鼠前列腺上皮细胞自身受体的作用

本实验采用乳过氧化物酶催化下碘标记的羊催乳素（ＰＲＬ），测定无血清培养的未成年大鼠前列腺上皮细胞上ＰＲＬ受体。结果表明，利用该法标记的１２５Ｉ－ＰＲＬ可用于ＰＲＬ受体的测定，ＰＲＬ对其自身的受体具有调节作用。

猪垂体细胞单层培养

本研究建立了猪垂体前叶细胞单层培养模型 ,并进行了免疫细胞化学研究。结果显示 ,用 0 2 5 %胶原酶 ,0 0 5 %透明质酸酶和 0 0 1%DNA酶消化垂体前叶 2次 ,每个垂体可获 5× 10 8个细胞 ,细胞活率在 90 %以上。用含 10 %小牛血清的McCoy’s 5A培养液培养 2 0h ,细胞贴壁 ,4 0h左右形成单层 ,形成单层后换无血清培养液仍维持生长。抗LH和FSH免疫细胞化学染色表明 ,大多数LH阳性细胞同时也是FSH阳性细胞。在单层细胞中 ,LH和FSH阳性细胞占细胞总数的比例不足 10 %。

催乳素对大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体和5α－还原酶活性的影响

本实验建立了无血清培养的大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体（ＡＲ）的测定方法，并研究了催乳素（ＰＲＬ）对细胞内ＡＲ数量和５α－还原酶活性的影响。结果表明：ＰＲＬ使前列腺上皮细胞内ＡＲ数量显著增加，其中１０ｎｇ／ｍｌＰＲＬ的作用最强，但高剂量的ＰＲＬ则失去对ＡＲ的刺激作用。ＰＲＬ还能拮抗雄激素引起的其自身受体的下调作用，使受体的数量回升至对照组水平。对５α－还原酶的催化产物双氢睾酮（ＤＨＴ）的测定结果显示ＰＲＬ对ＤＨＴ的产生无明显影响，提示ＰＲＬ对５α－还原酶的活性无显著影响。

初情期前母猪垂体细胞LH和FSH的释放及其对GnRH类似物的反应

利用垂体细胞单层培养模型研究了 30 ,60 ,90 ,12 0和 15 0日龄北京黑猪母猪垂体细胞LH和FSH的释放及其对LRH -A3反应能力。结果表明 ,猪垂体细胞LH和FSH释放对LRH -A3的反应呈S形剂量依赖型曲线。LH基础释放量和LRH -A3刺激的最大释放量在不同日龄间没有显著差异 ,说明初情期前母猪垂体细胞已达最大LH释放和对GnRH反应的能力。FSH的基础释放量和LRH -A3刺激的最大释放量在 30日龄与 60日龄之间无差异 ,但 90日龄以后垂体细胞FSH的释放量随日龄增大而降低 。

高剂量LH-RH对妊娠早期人滋养层组织蛋白分泌的影响

本研究分析了妊娠早期不同周龄人胎盘绒毛滋养层组织培液中蛋白含量的变化。可知6、7、8、10周组织培养液,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,测得12种主要蛋白质,此12种蛋白的相对百分含量不同,其中有三种是随周龄增加而增加;有一种是随周龄增加而减少;另有七种蛋白在6周后,它们的百分含量维持在稳定状态;仅有一种蛋白从6周至10周几乎一直保持在稳定水平。有可能这些蛋白质在妊娠过程中起着不同生理作用,所以在不同周龄中的合成量亦有变化。本研究同时证明高剂量LH-RH对胎盘绒毛滋养层组织中分子量大约为50,000和6,000左右的蛋白有抑制作用。由此,讨论了这两种蛋白的消失是否与LH-RH终止妊娠的作用有密切关系。

恒河猴睾丸内激素调控的离体研究Ⅲ——雌激素对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响

目的 采用体外无血清培养方法 ,研究雌激素 (E2 )对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响。方法 恒河猴睾丸活体组织 ,经胶原酶消化 ,BSA密度梯度重力沉降分离细胞 ,得到的Leydig细胞置二氧化碳培养箱培养 ,收集培养液 ,应用放射免疫测定法测定培养液中的睾酮含量。结果 不同剂量的睾酮前身物 :孕烯醇酮、孕酮和 17α 羟孕烯醇酮都能促进睾酮的含量升高 ,其中以 17α 羟孕烯醇酮的作用最为显著 ;当孕烯醇酮、孕酮和 17α 羟孕烯醇酮分别与E2 合并应用时 ,有明显地抑制作用 ,同样以 17α 羟孕烯醇酮的抑制作用最为显著。结论 E2 抑制恒河猴Leydig细胞睾酮的分泌是由于影响了 3β 羟类固醇脱氢酶、17α 羟化酶以及 17,2 0

不同日龄北京黑猪卵巢发育的研究

对30～180日龄北京黑猪母猪卵巢形态学和组织学的研究结果表明,在60日龄以前卵巢体积缓慢增长,60日龄以后直到120日龄迅速增长,150～180日龄之间增长速度减慢。90日龄卵巢切片上,首先观察到有腔卵泡。卵泡总数随日龄增加而减少,闭锁率增高。一半180日龄母猪卵巢上有成熟黄体。根据实验结果,提出北京黑猪母猪初情期在170日龄左右。

LRH－A_3诱导初情期前母猪发情排卵的效果和机理研究

本研究探讨了ＬＲＨ－Ａ３诱导初情期前北京黑猪发情排卵的效果及其内分泌机理。对６头１５０日龄母猪肌注ＬＲＨ－Ａ３，７５μｇ／头。在注射后０，１，２，３和４ｈ及注射后１，２，３和４ｄ采血测定ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２和Ｐ４浓度。注射后１０ｄ取卵巢，根据卵巢上黄体数计算排卵率。结果表明：注射ＬＲＨ－Ａ３后，出现排卵和卵巢囊肿的母猪分别为４头（６６．７％）和２头（３３．７％）。４头排卵母猪中的３头和２头卵巢囊肿母猪中的１头有发情表现。排卵的母猪，分别在注射后１ｈ和３ｈ出现ＬＨ和ＦＳＨ峰；注射后２ｄＥ２浓度最高，３ｄ和４ｄＰ４浓度上升。发生卵巢囊肿的母猪，注射后１ｈ出现明显低于排卵母猪的ＬＨ峰，而ＦＳＨ浓度没有上升，Ｅ２和Ｐ４在３ｄ和４ｄ都增加。通过试验认为，初情期前母猪的卵巢对ＬＲＨ－Ａ３至少有两种反应，即排卵或卵巢囊肿。