自动化核酸扩增技术(NAT)在血液筛查中的应用研究

目的为了提高血液安全性,探讨自动化核酸扩增技术在血站血液筛查中应用的可行性。方法在酶联免疫试验(ELISA)常规筛查血液的基础上,应用STAR2000加样仪自编程序进行全自动血样汇集(8人份),在KHB-DP1000半自动核酸提取仪上自动化方法提取样本核酸,应用荧光PCR方法在AB I7300上进行扩增和检测分析结果,用临检中心室间质控品和澳大利亚室间质控品进行室间质评,用标准品考评检测限量。结果应用标准品考评检测限量,本法的95%的检出限量HBV DNA、HCV RNA和H IV RNA分别为100.9 IU/m l,155.1拷贝/m l和165拷贝/m l,95%可信限范围分别为(60.1、302.2),(98.9,398.6)和(105.2,425.8)。通过对16 744个样本共2093汇集池检测,初始检测HBV DNA阳性池2个,HCV RNA、H IV RNA未检出阳性池,进一步拆分检测,有2份献血者的血液HBV DNA阳性,HBV DNA阳性率为0.012%。结论随着国内相关技术的不断提高和相关制度的不断完善,可以考虑将国产自动化核酸扩增试剂纳入血站血液常规筛查。

无偿献血者血液筛查后传播HIV残余危险度的评估

目的了解深圳地区无偿献血者血液常规和核酸筛查后传播H IV的残余危险度,评价常规筛查措施的效果,并为进一步开展血液核酸筛查提供科学依据。方法收集2006年2月—2008年2月无偿献血者的资料,用数学模型法研究输血传播H IV的残余危险度。结果在重复无偿献血者中,H IV流行率为0.00489%(3/61363),首次无偿献血者中为0.00974%(4/41080)。经评估,抗-H IV筛选及核酸筛查后的阴性血传播H IV的残余危险度分别为1∶207125和1∶414250。结论无偿献血者血液经抗-H IV筛查后仍存在传播H IV的残余风险,需进一步采取措施(如核酸筛查),减少残余危险度。

Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应研究

目的研究Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应,为建立有区别的D亚型的输血规则提供参考。方法对RhD阴性孕妇进行基因分型,并检测是否有抗-D;总结分析孕妇妊娠次数以及胎儿红细胞的检出与产生抗-D之间的相关性。结果在122名RhD表型阴性的孕妇中,检出d/d基因型97例,Del型20例,弱D15型1例,RHD-CE(2—9)-D/d融合基因型3例,DⅥⅢ型1例。在97名RhD阴性(d/d)孕妇中,有38例产生抗-D;20名Del血型孕妇均未检出抗-D;3名RhD-CE(2—9)-D/d中有2例产生抗-D;1名弱D15型的孕妇未检出抗-D;1名DⅥⅢ型孕妇抗-D检出阳性。统计分析表明孕妇的妊娠次数以及外周血中检出胎儿红细胞的检出与抗-D的产生有相关性,这可以成为Rh阴性孕妇被D抗原免疫的证据。结论不同D亚型的个体可能会对D抗原有不同的免疫反应,我们认为在中国Del血型的受者可以接收D阳性血液。建立有区别的输血规则可以节约有限的Rh阴性血资源和提高输血安全。

流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针基因分型方法在血小板供者资料库建立中的应用

目的探讨高通量流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针（FLOWlSs0）技术在人类血小板抗原（HPA）基因分型中的应用。方法采用FLOW—SSO技术对1378例汉族血小板捐献者HPA1～6，15系统的基因型进行检测；并以10份国际输血协会（IsBT）第12届血小板免疫学术研讨会提供的质控样品对FLOW-SSO技术的可靠性进行考核。以3家供应商提供的不同聚合酶链反应一序列特异引物法（PCR—SSP）试剂，对50份血小板样品的基因分型结果进行比对试验。分型结果采用Y。检验考察HPA系统的基因型频率分布是否符合Hardy—Weinberg遗传平衡定律。结果通过FLOW-SSO方法获得的1379例血小板供者HPA等位基因频率如下，HPA—1a为0．9927，HPA-1b为0．0073，HPA-2a为0．9536，HPA-2b为0．0464，HPA-3a为0．5700，HPA-3b为0．4300，HPA-4a为0．9982，HPA-4b为0．0018，HPA-5a为0．9804，HPA-5b为0．0196，HPA-6a为0．9822，HPA-6b为0．0178，HPA-15a为0．5337及HPA-15b为0．4663。基因频率检测结果经Y。检验，其分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。ISBT提供的10份样品考核结果相符率为100％。50份血小板样本采用3种不同的PCR—SSP试剂测定的HPA1～6，15基因分型结果，与FLOW—SSO技术测定结果完全一致。结论FLOW—Ss0基因分型技术有便捷、重复性好及高通量等特点，适用于血小板供者资料库的血小板基因分型。