哺乳动物胚胎的活性氧来源及其抗氧化机制

活性氧(reactive oxygen species,ROS)与胚胎发育缺陷密切相关,胚胎或其培养的环境都有可能产生ROS,一些外源因子能够使胚胎的ROS产量增加,引起胚胎发育阻滞,这严重地限制了与胚胎相关的研究。胚胎存在着多种抗氧化机制,在实际操作中应结合胚胎发育各时期内部ROS的来源及其抗氧化机制,提高细胞内部抗氧化效率;控制培养条件,完善培养体系,降低外在因素对ROS的诱发作用,更高效地生产体外发育胚胎。

共培养对小鼠胚胎内部活性氧含量影响

文章旨在研究输卵管上皮细胞共培养对小鼠胚胎内部活性氧含量影响,探索共培养克服胚胎发育阻滞机理。用小鼠输卵管上皮细胞对合子进行共培养,DCFDA测定胚胎内部H2O2含量,以外源性H2O2对输卵管上皮细胞和胚胎进行阴性对照,用Hochest 33342和PI染色检测细胞凋亡情况,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力。结果表明,共培养能显著提高2-细胞发育率、降低胚胎内部H2O2含量(P<0.05),提高4-细胞率及降低胚胎内部H2O2含量(P>0.05)。外源性H2O2能够使合子凋亡甚至死亡,导致共培养细胞活力下降(P<0.05),未能显著地促进胚胎发育(P>0.05)。结果表明共培养能够降低胚胎细胞内部活性氧,克服胚胎发育阻滞,促进胚胎发育。

输卵管上皮细胞共培养对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响

研究输卵管上皮细胞共培养对小鼠早期胚胎发育的影响,探索输卵管上皮细胞共培养克服胚胎发育阻滞的机理。建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系,并与合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR检测CAT及GPX的转录状况。输卵管上皮细胞共培养能够显著提高2-细胞早期、4-细胞期胚胎发育率(P<0.05),囊胚率也有所提高(P>0.05)。输卵管上皮细胞共培养能够显著降低2-细胞早期胚胎内部的H2O2含量(P<0.05)。小鼠阻滞胚胎中有H2O2蓄积,输卵管上皮细胞共培养能够降低Ⅰ和Ⅱ型阻滞胚胎的比例(P>0.05),显著地提高Ⅲ型阻滞胚胎的比例(P<0.05)。当胚胎发育到2-细胞早期时共培养细胞活力上升(P>0.05),抗氧化基因CAT及GPX转录量增加(P>0.05)。以上结果表明,输卵管上皮细胞共培养通过细胞-细胞间的相互作用降低胚胎细胞内部的活性氧,克服胚胎发育阻滞,促进胚胎发育,提高胚胎质量。

中药成分对延边黄牛耳成纤维细胞氧化修复的作用

利用H2O2建立延边黄牛耳成纤维细胞氧化损伤模型,在耳成纤维细胞培养液中分别添加不同浓度的小蘗碱、川芎嗪和淫羊藿苷培养24、48、72和96 h,对延边黄牛耳成纤维细胞氧化损伤进行修复。结果表明,1μmol/L小蘗碱、50μg/mL川芎嗪及0.001μg/mL淫羊藿苷培养72 h后细胞活力均显著高于对照组,其对氧化损伤的修复作用显著高于自我修复组。

谷氨酰胺对延边黄牛卵母细胞成熟及重组胚发育的影响

为了提高卵母细胞的成熟率及重组胚胎的发育率,在体外成熟液中添加了不同浓度的谷氨酰胺,研究谷氨酰胺对延边黄牛卵母细胞成熟的影响,并观察它对重组胚胎后续发育的影响,从中筛选出最佳的体外培养条件。结果表明,1.0 mmol/L的谷氨酰胺能够显著提高卵母细胞的成熟率,同时也能提高囊胚发育率。说明谷氨酰胺能够提高延边黄牛卵母细胞的体外成熟率,并能促进囊胚发育。

谷氨酰胺对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚发育率，研究了在体外培养液中添加不同浓度的谷氨酰胺对克隆重组胚发育率的影响。试验中选择成熟培养20～22h的卵母细胞，脱颗粒细胞后选择排出第一极体的卵母细胞进行去核与注核操作，然后将融合、激活后的卵母细胞在添加不同浓度谷氨酰胺的体外培养液中进行培养。结果显示，体外培养液中添加浓度为1．0mmol／L的谷氨酰胺能够显著提高延边黄体细胞克隆牛重组胚的发育率，表明在体外培养中添加谷氨酰胺能提高延边黄牛体细胞克隆效率。

WY14643对附植前小鼠胚胎体外发育及活性氧的影响

为研究人工合成的过氧化物酶体增值物激活受体α特异性受体激活剂(WY14643)对附植前小鼠胚胎体外发育的影响,以及WY14643对附植前小鼠胚胎内部活性氧的影响,通过H2O2诱导建立胚胎氧化损伤模型,添加不同浓度WY14643对胚胎进行体外培养,利用2’7’二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)测定胚胎内部H2O2含量。结果表明:不同浓度WY14643处理2 h后,0.1μmol/L WY14643处理组4-细胞发育率、囊胚率显著高于其他各组(P<0.05);经0.1μmol/L WY14643和H2O2联合处理后,其胚胎发育率显著高于单独H2O2处理组和对照组(P<0.05);DCHFDA荧光检测发现,WY14643添加组胚胎内部各时期H2O2水平显著低于其他各组(P<0.05),并且胚胎内部H2O2呈一定的变化规律。说明适宜浓度的WY14643能够增加体外发育胚胎的发育率,减少胚胎内部活性氧水平,并且胚胎内部H2O2水平在4-细胞时期达到最高,囊胚时期显著下降。

5-aza-dc对延边奶山羊耳成纤维细胞生物学特性的影响

通过DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对延边奶山羊耳成纤维细胞进行不同处理后,利用MTT比色法选定5-aza-dc的最适作用浓度和时间,用Hochest33342/PI双染和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,通过核型分析检测5-aza-dc对细胞染色体的影响。结果表明,低浓度的5-aza-dc(≤0.010μmol/L)作用72 h对细胞影响不大;随其浓度的增加,细胞形态、活率、凋亡及染色体都受到显著影响。5-aza-dc对细胞的最佳处理时间为72 h,此时低浓度的5-aza-dc并未引起细胞凋亡和核型改变。

延边奶山羊耳成纤维细胞体外培养的研究

为了给延边奶山羊转基因核移植及乳腺生物反应器研究提供足够且状态良好的细胞,采取延边奶山羊耳部组织块,利用组织块贴壁法进行原代培养和传代培养,对于纯化了的成纤维细胞观察其生长状态,并对4代以后的成纤维进行生长曲线、核型分析,并对细胞进行冷冻复苏试验,检测细胞活力。结果表明,4～13代体外培养成纤维细胞的细胞形态及核型基本正常,13代以后,细胞染色体变异比例增加,15代以后,细胞生长速度减慢;冷冻复苏后的细胞除生长速度减慢外,其它细胞生物学特征均正常,基本符合体细胞克隆、转基因等试验的基本要求,可以用于试验研究。

新型圆螺母锁紧楔块防松结构的设计和应用研究

圆螺母防松是目前比较常用且非常可靠的一种防松方式,在长期使用过程中被挤压变形,造成防转片扭断导致防松失效,如何使防松效果更加可靠,故障率更低,通过一系列不断试验和研究,设计了一套圆螺母锁紧楔块防松结构,其结构简单,容易实现,且易操作,防松效果极佳,成功地解决了该项问题,避免了圆螺母松动问题的发生,获得了客户的认可,取得了良好的经济效应,本文主要围绕圆螺母楔块防松结构的设计和应用进行研究。

液压立式轴承拆卸工装的设计研究

针对矿用减速器、链轮轴组等设备,升井维修时如何快速、高效、低成本拆卸修复是保养过程中需要考虑的重点问题。轴承外圈与轴承座之间为过盈配合,如何快速拆卸轴承座及行星架中的轴承并保证轴承的拆卸质量成为修理的关键一环。本文主要围绕高效、安全、方便拆卸工装的设计和应用进行研究。

新型HDS耐磨钢板火焰气割工艺优化

耐磨钢板HDS是公司最新引进的耐磨材料,该材料火焰气割性能差。为了降低产品制造成本,提高生产效率,对新型HDS耐磨钢板(板厚30mm-60mm)氧—天然气火焰气割工艺进行了优化。结果表明:通过气割前预热(200℃以上)和使用前置预热方法的工艺优化可提高新型HDS耐磨钢板的氧—天然气火焰气割质量和火焰气割效率。

数学教学在区域活动教学中的思考与总结

区域活动是以个别化教育的形式，尊重幼儿的个体差异，满足幼儿个体发展的需要，培养幼儿的主动探索精神，发展幼儿能力的一种教学形式。

输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育机理的探索

为研究输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎发育质量及胚胎对共培养细胞活力和基因转录量的影响,探索输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育的机理,建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系并对合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR检测CAT及GPX的转录状况。结果表明:1)共培养能够提高2-细胞早期、4-细胞期胚胎发育率(0.951 3%VS 0.903 3%,0.857 6%VS0.700 5%,P<0.05)和囊胚发育率(0.537 9%VS 0.573 3%,P>0.05);2)2-细胞早期胚胎内部的H2O2含量显著降低(0.047 9VS 0.068 2,P<0.05);3)Ⅰ和Ⅱ型阻滞胚胎的比例降低(0.158 3%VS 0.192 6%,0.213 3%VS0.433 9%,P>0.05),Ⅲ型阻滞胚胎的比例提高(0.621 6%VS 0.373 3%,P<0.05);4)共培养细胞活性上升(0.216 7VS 0.195 7,P>0.05);5)CAT及GPX的转录量增加(1.202 0VS 0.984 9,1.310 1VS 0.998 3,P>0.05)。结果显示输卵管上皮细胞共培养通过增强自身的抗氧化能力,利用细胞-细胞间的相互作用降低胚胎细胞内部的活性氧,提高胚胎质量,促进胚胎发育。