CD4^+CD25^+调节性T细胞与乙型肝炎病毒感染的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Tregulatory cells,Tregs)是近年来发现的一群具有免疫抑制功能的细胞亚群,其独特的作用方式及功能特征使其在自身免疫性疾病、移植免疫、肿瘤免疫和感染免疫中发挥着重要作用.近年的研究表明,Tregs细胞与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染后耐受、发病和转归相关.

乙型肝炎患者治疗前后外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析

目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;磁珠分选法分选CD4^+CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计一条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析研究对象TRBV家族CDR3谱系特征;采用配对t检验(paired-sample t test)检测AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后TRBV家族谱系漂移率差异。结果:3例AHB患者急性期呈现普遍谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,AHB患者恢复期外周血CD4^+CD25^+Tregs TRBV家族CDR3谱型漂移率显著低于急性期(t=9.456,P=0.011);TRBV8、11、13.2、15、16、18、20在3例CHB患者抗HBV治疗前出现克隆增生,TRBV1、5.2、6、12、14、24在3例CHB患者抗HBV治疗后出现克隆增生。CHB患者抗病毒治疗后TRBV家族CDR3谱型漂移率高于治疗前(t=-0.666,P=0.553)。结论:AHB患者急性期呈现谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,推测这种转变可能与HBsAg、HBeAg转阴相关。CHB患者在治疗前TRBV8、11、13.2、15、16、18、20家族克隆增生的Tregs可能通过下调机体的细胞免疫应答,阻碍病毒清除;随着药物导致病毒载量的显著下降,TRBV1、5.2、6、12、14、24家族克隆增生的Tregs可能更有助于诱导机体出现免疫耐受,导致HBV不能彻底清除。

抗病毒治疗对CHB患者外周血TCRβ链CDR3谱系的影响

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗前后T淋巴细胞受体(TCR)β链各家族互补决定区3(CDR3)谱系的变化,了解抗病毒治疗前后T细胞应答的变化。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线法对11例CHB患者抗病毒治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)T淋巴细胞受体β链可变区(TCR BV)基因各家族CDR3谱系进行分析,了解抗病毒治疗前后T细胞应答的变化。分析TCR CDR3谱系与CHB患者血清病毒载量的关系。结果:11例CHB患者抗病毒治疗后多个TCR CDR3谱系均出现了不同程度偏移。低病毒载量组(HBV DNA≤104拷贝/ml)治疗后谱型偏移率显著高于高病毒载量组(HBV DNA≥105拷贝/ml)。结论:CHB患者抗病毒治疗后单寡谱型偏移率与治疗前血清HBV DNA的水平相关。

外周血CD4^+CD25^+ Treg细胞与HBV携带者相关性的Meta分析

目的:探讨CD4+CD25+Treg细胞在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)携带者及相关感染状态中分布特征,以期揭示其与HBV携带者的相关性,为临床干预提供依据.方法:计算机检索Pubmed、SCI、Embase、CNKI、万方及维普等数据库,依据NewcastleOttawa Scale(NOS)标准评价文献质量,按照PICOS原则提取资料,采用RevMan5.1软件进行Meta分析.结果:纳入文献24篇.HBV携带者外周血Treg细胞含量较健康对照高(P=0.01);与HBV携带者比较,慢性乙型肝炎Treg细胞含量较高(P=0.12),急性乙型肝炎较低(P=0.15);慢性HBV携带者Treg细胞高于非活动性HBsAg携带者(P=0.01).Treg细胞含量与HBV DNA、丙氨酸转氨酶是否存在相关性,因研究一致性差,结论尚不能确定.结论:CD4+CD25+Treg细胞可能成为影响HBV携带者预后及转归的重要因素.

核苷(酸)类似物抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响

我国是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的高流行区,大样本的调查显示我国慢性HBV感染者高达1.2亿人之多.由于持续HBV感染及复制激发的免疫应答失调是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者病情进展的根本原因,要阻止疾病进展,应进行有效的抗病毒治疗.核苷(酸)类似物是目前公认有效的抗HBV的药物之一,被广泛应用于临床,主要通过抑制DNA聚合酶的复制从而发挥抗HBV作用.其在有效抗病毒治疗的同时对机体细胞免疫功能有何影响.本文就近年来此方面的研究进展进行综述.

不同HBV感染状态患者外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析

目的探讨慢性HBV携带者、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)及急性乙型肝炎(acute hepatitis B,AHB)这3种不同HBV感染状态下患者外周血中CD4^+ CD25^+调节性T细胞(T regulatory cells,Tregs)T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链各家族互补决定区3(complementarity-determining region 3,CDR3)谱系漂移特征。方法采集3例正常人、5例慢性HBV携带者、12例CHB及5例AHB患者外周抗凝静脉血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC);磁珠分选法分选CD4^+ CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计1条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析TRBV家族CDR3谱系特征。结果不同HBV感染状态下24个TRBV家族CDR3谱系图均呈现一个或者多个形态不一、数量不等的单峰、寡峰、偏峰谱型,其中一些家族表达极低或缺失,在1.5%琼脂糖凝胶电泳图上多数家族于预测范围大小处呈现1条模糊条带,部分家族出现清晰条带或无条带;对不同HBV感染者间各TRBV家族CDR3谱系偏移率进行比较发现:慢性HBV携带者中BV7谱系偏移率明显高于CHB及AHB患者(P均<0.05),CHB患者中BV15谱系偏移率明显高于慢性HBV携带者及AHB患者(P均<0.05),AHB患者中BV23谱系偏移率明显高于CHB及慢性HBV携带者(P均<0.05)。CHB患者外周血CD4^+ CD25^+Tregs TRBV家族CDR3克隆增生总体异常率与HBV DNA载量呈正相关关系(r=0.576 5,P=0.049 8)。结论部分优势利用的TRBV家族可能在感染HBV后免疫耐受以及清除病毒中发挥重要作用。

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞受体CDR3谱系的特征分析

本研究采用T淋巴细胞受体β链V区基因各家族（BV）互补决定区3（complementarity determiningregion3，CDR3）长度分析的方法（免疫谱系分析技术）监测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（Tregs）TCRp链CDR3谱系漂移情况，并对特征性的谱系漂移家族进行基因测序鉴定其分子特征，探讨T细胞免疫在抗病毒应答中发挥的作用，以期为HBV感染后特异性T细胞免疫应答变化提供新的研究方法。

CD4＋CD25＋Treg细胞和Th17细胞及白细胞介6与HBV相关慢加急性肝衰竭预后关系的Meta分析

目的 探讨CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞（Tregs）、辅助性T17细胞（Th17）、白细胞介素6 （IL-6）在HBV相关慢加急性肝衰竭（ACLF）疾病进展及预后中的价值. 方法 检索CNKI、万方、维普、PubMed、Embase、SCI数据库中Treg细胞与ACLF相关研究文献,按照纳入及排除标准筛选文献,选择NOS标准评价文献质量,按照PICOS原则提取资料,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析. 结果 共纳入9个病例对照研究,Meta分析显示：ACLF患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞频率高于慢性乙型肝炎（CHB）组患者[MD=0.59,95％可信区间（CI）为（1.68 ～ 2.85）]及健康对照组（HC） [MD=1.12,95％ CI为（1.42 ～ 3.66）],但差异无统计学意义（P值均＞0.05）;而ACLF患者外周血Th17细胞频率高于CHB患者[MD=1.73,95％ CI为（0.21 ～ 3.26）]及HC[MD=1.62,95％ CI为（0.52 ～ 2.72）],差异有统计学意义（P值均＜0.05）.ACLF患者外周血IL-6含量高于CHB患者[MD=11.69,95％ CI为（1.98 ～ 21.40）]及HC[MD=13.17,95％ CI为（1.38 ～ 24.95）],差异有统计学意义（P值均＜0.05）. 结论 CD4＋CD25＋Treg细胞可能为影响ACLF疾病进展及预后的重要保护因素;而Th17细胞及IL-6为影响ACLF疾病进展及预后的危险因素.

COVID-19患者病毒核酸阳性持续时间与临床转归的相关研究

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者不同部位的新型冠状病毒核酸阳性持续时间与临床转归的关系及可能的致病机理。方法选取2020年1-2月汕头大学医学院第一附属医院COVID-19确诊病例13例为研究对象。全病程中连续采集患者的口咽拭子和痰液、肛拭子和粪便、眼结膜拭子、尿液和血清样本,采用实时荧光PCR方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸,收集并分析临床资料。结果所有患者痰液和口咽拭子的SARS-CoV-2核酸检测阳性,11例患者粪便伴8例肛拭子病毒核酸阳性,2例危重患者的血液、眼结膜和尿液中检出了病毒核酸。呼吸道病毒核酸检出阳性持续时间在轻型、普通型和重型之间差异无统计学意义(P>0.05),与呼吸道症状及胸部CT炎症持续时间差异无统计学意义(P>0.05)。粪便病毒核酸阳性的患者中有7例出现腹泻,持续1~6 d。1例危重型患者病程第6~17天血液中连续检出病毒核酸,第7天出现了重度的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。结论 COVID-19患者呼吸道病毒核酸阳性持续时间可能与病情的转归和严重程度无明显的关联性。消化道病毒核酸阳性的患者,可无或表现轻微消化道症状。病毒血症可能是激发炎症风暴导致ARDS的重要因素。