基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和LXRα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3-h FXR和EcRETK-Luc、p CMX-FLAG-h LXRα和p GL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果 1根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞;2根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,最终分别选择1∶1、2∶1和2∶1;3模型中,报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长;4仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z'值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

海红豆油的理化性质及脂肪酸组成分析

采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对海红豆油脂肪酸组成进行分析和鉴定,并对海红豆油的理化性质进行分析研究。结果表明:从海红豆油中共分离出24个峰,鉴识出其中16种脂肪酸,主要为亚油酸(40.61%)、油酸(23.36%)、山嵛酸(11.50%)和花生酸(5.68%),其中不饱和脂肪酸相对含量为67.38%;海红豆油得率为17.4%;海红豆油的酸值(KOH)、碘值(I)、皂化值(KOH)、过氧化值分别为1.31 mg/g、157.4 g/100 g、161.1 mg/g、0.78 mmol/kg。海红豆油具有较高的应用潜力和开发价值。