人脐带血和骨髓来源间充质干细胞的体外分离、培养、分化及生物学特性比较

背景:间充质干细胞由于具有自我更新能力且在适宜微环境下具有多向分化潜能,近年来已成为细胞领域的研究热点。目的:对比观察脐带血与骨髓来源的间充质干细胞其体外分离、纯化及培养条件,并对其进行生物学特性比较。设计:体外细胞学对比观察。材料:新鲜脐带血在征得产妇同意后采集。骨髓由健康的成年志愿者捐赠。方法:取脐带血和成人骨髓分离、培养并纯化间充质干细胞,对获得的间充质干细胞进行形态学观察。主要观察指标:两种来源间充质干细胞的形态和生长特性;流式细胞仪检测脐带血间充质干细胞表面抗原的表达情况;对脐带血间充质干细胞多向分化的能力进行鉴定。结果:两种来源的单个核细胞经体外培养贴壁后均出现间充质样细胞,原代骨髓间充质干细胞的贴壁时间和培养时间均短于脐带血间充质干细胞,两种细胞传代生长呈共同特性:传代培养潜伏期为24～36h,传代培养对数增殖期为接种后3～7d,接种后八九天,生长进入平台期;脐带血来源的间充质干细胞表达相关抗原CD29、CD44、CD105;但不表达造血细胞抗原CD34、CD45;脐带血间充质干细胞可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞。结论:人脐带血和骨髓来源间充质干细胞均可在体外分离培养、扩增;脐带血的间充质干细胞原代贴壁时间、形成细胞克隆的时间、集落交错融合的时间均较骨髓间充质干细胞晚,传代培养的细胞形态,生长速度均无明显差异;两种来源的间充质干细胞具有相同的表面标志物;脐带血间充质干细胞有多项分化潜能,可诱导为脂肪细胞、成骨细胞。

p27和cyclinE在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的研究p27蛋白和cyclinE蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测60例宫颈癌组织标本中p27及cyclinE蛋白的表达情况,应用χ2检验方法,分析p27和cyclinE蛋白的表达与临床病理因素之间的关系以及两者表达之间的关系。结果p27的表达率为26.7%,在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级宫颈癌中表达率逐渐降低,有极显著性差异(P<0.01)。有淋巴结转移的宫颈癌中表达率低于无淋巴结转移的宫颈癌,有显著性差异(P<0.05)。cyclinE的表达率为71.7%,在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级宫颈癌中表达率逐渐增高,有极显著性差异(P<0.01)。p27与cyclinE的表达之间无明显关系(P>0.05)。结论p27在宫颈癌中的表达与病理分级有极显著关系,与有无淋巴结转移有显著关系。cyclinE在宫颈癌中的表达与病理分级有极显著关系。p27和cyclinE可联合作为评价宫颈癌恶性程度和预后的指标。

闭角型青光眼血液流变性及红细胞膜流动性改变的研究

对２５例闭角型青光眼患者血液流变学指标及红细胞膜流动性检测，并与对照组２５例比较。结果表明：闭角型青光眼患者红细胞压积、全血高、低切粘度均较对照组降低；血浆粘度、纤维蛋白原含量、血沉、血沉方程Ｋ值、红细胞刚性指数ＩＲ、聚集指数均较对照组增高，但均无统计学意义。闭角型青光眼患者的红细胞膜流动性下降，较对照组有极显著差异。

DCC基因与妇科肿瘤研究新进展

结直肠癌缺失基因——DCC基因是近年来发现的一个重要的肿瘤抑制基因,其失活和表达异常与大肠癌的诊断、治疗及预后关系密切。DCC基因在妇科肿瘤的发生发展中所起的作用已受到国内外诸多学者的关注。本文就此方面的研究现状作一简要综述。

Down's综合征产前筛查和产前诊断的研究进展

Down’s综合征是先天智力低下的最常见病因,又是最常见的染色体病。本文对Down’s综合征的产前筛查和诊断的研究进展作一综述。

百乐明TCP对卵巢癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的强内心百乐明(tranylcypromine,TCP)是在卵巢癌中最有效的LSD1抑制剂之一,被证明可以抑制卵巢癌细胞的增殖,但是其中更深入的分子生物学机制目前尚无研究。本研究的目的在于讨论TCP对卵巢癌生物学功能的影响。方法本研究采用了CCK-8法检测了细胞的增殖能力,流式细胞术检测了细胞的凋亡能力,western blot法检测了细胞中自噬的发生和mTOR通路的活性。结果我们的研究证明了在卵巢癌细胞中,应用浓度为100μM LSD1抑制剂TCP处理细胞48h可以诱发早期凋亡和晚期凋亡的发生,Bcl-2的表达上升,Bax的表达下降,这提示我们TCP可以诱发卵巢癌细胞凋亡的发生。当应用TCP处理SKOV3细胞12h后开始发生自噬,而在24h和48h后自噬效果最为明显。而TCP处理卵巢癌细胞24h和48h后p-mTOR、p-P70S6K蛋白的表达水平明显下降。结论 LSD1抑制剂TCP可以抑制SKOV3细胞的增殖,诱发细胞凋亡和自噬能力,同时抑制mTOR/p70S6K细胞信号转导通路的活性。

p53、nm23和c-erbB-2蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的 :研究 p5 3、nm2 3和c -erbB - 2蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法 :用LSAB免疫组化法检测 42例子宫内膜癌中p5 3、nm2 3和c-erbB - 2蛋白的表达。结果 :p5 3 ,nm2 3,c -erbB - 2在子宫内膜癌中的阳性率分别为 31.0 %、6 0 .0 %、47.6 % ,其阳性表达与年龄、不同组织学类型差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;p5 3与病理分级有关 ,随着细胞分级的增高 ,其阳性率逐步升高 ,差异有极显著性 ( χ2 =16 .3,P <0 .0 0 5 ) ;nm2 3与病理分级呈负相关 (P <0 .0 1) ,无淋巴结转移者阳性表达率明显高于有淋巴结转移者 ( 71.9%和 2 0 .0 % ,P <0 .0 5 ) ;c -erbB - 2的表达与癌细胞的分化程度、临床分期有关 ,分化程度高及早期癌中c -erbB - 2表达强。结论 :对子宫内膜癌进行p5 3、nm2 3和c -erbB - 2蛋白的检测 ,有助于预测子宫内膜癌的发生、演进、转移和预后。

DCC基因对卵巢上皮性癌细胞生长及其化疗敏感性的影响

目的研究 DCC 基因对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生长及其化疗敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将含有 DCC 基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DCC 质粒导入卵巢癌细胞系 HO8910细胞中(HO8910-DCC 组),以转染空载体 pcDNA3.1(+)质粒(HO8910-Neo 组)和脂质体(空白对照组)为对照。转染24 h 后,经氨基糖甙类抗生素 G418筛选,RT-PCR 技术以及免疫组化法检测3组细胞 DCC mRNA 及蛋白表达情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定3组细胞转染后1～7 d 的细胞生长情况及经梯度浓度[0.1、0.2、1.0、5.0、10.0血浆峰浓度(PPC)]化疗药物顺铂和紫杉醇处理后48 h 的细胞存活率,并绘制细胞生长曲线。结果转染 DCC 基因后,DCC 基因可在HO8910细胞中稳定表达。转染后1～7 d,HO8910-DCC 组细胞生长速度较其他两组细胞明显减慢,除转染后第1天外,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);空白对照组和 HO8910-Neo 组细胞生长速度比较,差异则无统计学意义(P>0.05)。HO8910-DCC 组细胞经0.1～5.0 PPC 的顺铂和紫杉醇处理后,细胞存活率显著低于空白对照组和 HO8910-Neo 组(P<0.01);经10.0 PPC 的顺铂处理后细胞存活率也明显低于空白对照组和 HO8910-Neo 组(P<0.05);但经10.0 PPC 的紫杉醇处理后细胞存活率与空白对照组和 HO8910-Neo 组相比,差异则无统计学意义(P>0.05)。空白对照组和HO8910-Neo 组细胞经各梯度浓度药物处理后的细胞存活率间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 DCC 基因可明显抑制卵巢癌细胞的生长,并增强卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。

DCC基因治疗对人卵巢癌细胞化疗增敏作用研究

目的研究DCC基因对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞在体外、体内化疗药物敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将含有DCC基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入人卵巢癌细胞系HO-8910中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及免疫组化法检测DCC基因表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定经梯度浓度紫杉醇处理后的细胞存活率。体内观察DCC基因转染后裸鼠移植瘤对紫杉醇化疗的反应。结果 DCC基因可在HO-8910细胞中稳定表达。转染DCC基因后的HO-8910细胞经梯度浓度紫杉醇处理后细胞存活率显著低于对照组。HO-8910-DCC裸鼠移植瘤化疗组重量抑瘤率和体积抑瘤率均明显高于对照组。结沦DCC基因可增强HO-8910细胞在体外和体内对化疗药物的敏感性。

人脐血间充质干细胞体外分离培养及基因载体特性研究

目的证实脐血中含有间充质干细胞,探讨其体外分离、培养条件,并进行生物学特性和表面抗原的鉴定,初步探索间充质干细胞作为基因治疗的载体携带目的基因的可能性及方法。方法无菌条件下取正常足月剖宫产的脐血分离、培养和纯化,获得间充质干细胞;对获得的间充质干细胞进行形态学观察;绘制生长曲线,分析间充质干细胞的增殖情况;用流式细胞仪检测间充质干细胞表面抗原的表达情况。采用脂质体转染法将pDNA316-IRES-EGFP质粒转入间充质干细胞中,观察绿色荧光的表达以及转染后细胞生长情况。结果自脐血中成功分离获得间充质干细胞,可传代培养,经表面标志检测,表达CD29、CD44、CD105,不表达CD45和HLA-DR。质粒pDNA316-IRES-EGFP通过脂质体介导转染间充质干细胞后,荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达。转染后的细胞生长受到一定影响。结论人脐血来源的间充质干细胞能在体外分离、培养、扩增,并且具有和骨髓源间充质干细胞类似的生物形态和抗原表型。EGFP基因可被成功转入间充质干细胞中并获表达。转基因间充质干细胞用于基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。

子宫内膜异位症发病机制的研究进展

子宫内膜异位症(内异症)仍是医学上的一个难题,给育龄期的妇女带来了极大的痛苦,可以引起继发性痛经、慢性盆腔痛、不孕等临床症状。内异症的具体发病机制仍不清楚,在经典的"经血逆流"学说提出以后,又出现了体腔上皮化生学说、苗勒管残迹学说等。近几年的研究又提出了一系列与内异症发病相关的因素,包括在位内膜的生物学特点、雌激素作用、免疫炎症反应、血管形成等,这些因素的提出对子宫内膜异位症的发病机制进行了补充和深入,也为现在子宫内膜异位症的诊治提供了新的思路和方向。文章对近年来子宫内膜异位症发病机制的相关研究进展进行了回顾与总结,作一综述。

妊娠期高血压疾病患者围产儿不良结局与脐动脉血流的关系探讨

【目的】研究妊娠期高血压疾病(hypertension disorder complicating pregnancy,HDCP)对围产儿结局的影响及胎儿脐动脉血流变化与围产儿不良结局的关系。【方法】对57例妊娠期高血压疾病孕产妇和59例正常妊娠孕产妇的妊娠结局进行观察,测量胎儿脐动脉血流指标并观察两组围产儿结局。【结果】HDCP组围产儿的不良结局在新生儿窒息、早产和低出生体重方面的发生率均高于正常组(P<0.05);两组在脐动脉血流搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩压最大血流速度与舒张末期最大血流速度比值(S/D)等三个指标上存在的差异有统计学意义(P<0.05)。胎儿脐动脉血流指标与围产儿出生结局呈负相关关系。【结论】HDCP患者更容易发生围产儿不良结局,胎儿脐动脉血流指标更易出现异常。脐动脉血流指标RI和S/D比值可以用来预测围产儿不良结局的发生。

siRNA特异性抑制卵巢癌细胞葡萄糖调节蛋白78表达及其意义的研究

目的研究利用小分子干扰技术(RNAi),构建Grp78靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类卵巢癌细胞SKOV3Grp78基因表达的抑制作用。初步探讨RNA干扰技术抑制Grp78的表达作为卵巢癌基因治疗的可行性。方法从GeneBank中选取人类卵巢癌细胞Grp78基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计Grp78基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体psiSTRIKETMU6的要求并与psiSTRIKETM质粒载体连接,采用脂质体转染法将含有特异性小分子干扰Grp78 mRNA的重组载体psiSTRIKETM/Grp78导入卵巢癌细胞系SKOV3中,分别在转染前、转染后24h、48h和72h通过RT-PCR和Western blot检测Grp78 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞经梯度浓度紫杉醇处理后的细胞存活率。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78 RNA干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78。将上述质粒转染到卵巢癌细胞后,观察到psiSTRIKETM/Grp78能够有效的抑制Grp78 mRNA及蛋白表达。转染psiSTRIKETM/Grp78基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制,出现凋亡征象,且对化疗药物的敏感性增加。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78 mRNA及蛋白的表达,增加卵巢癌细胞的化疗敏感性。RNAi技术抑制Grp78表达为卵巢癌的基因治疗开辟了新的思路。

人脐带血来源的间充质干细胞特性及对卵巢癌细胞趋化作用的研究

目的为人脐带血(HUCD)可成为间充质干细胞(MSCs)重要新来源提供依据,着重研究对人卵巢癌细胞的趋化作用,为临床靶向治疗卵巢癌提供新的载体。方法征求足月健康的自然产孕妇同意,获得脐带血,从中提取MSCs。获得稳定增殖传代的MSCs后,鉴定其生物特性和抗原表型,将其与人卵巢癌HO-8910细胞共培养,探讨其对卵巢癌细胞的趋化作用。结果成功从HUCD中提取MSCs,筛选出稳定传代的细胞系。其生物学特性与骨髓来源的MSCs一样具有多向细胞分化潜能,可诱导分化成脂肪细胞、成骨细胞;同时还具有相同的免疫表型,CD29、CD44、CD105阳性表达,CD13、CD14、CD34、CD45阴性表达,并且其免疫表型不随着细胞传代而改变。HUCD来源的MSCs与HO-8910细胞共培养时发现,MSCs对其有趋化作用。结论证实HUCD可以作为MSCs的新的重要来源。实验发现MSCs对人卵巢癌细胞株HO-8910有明显趋化作用,这一发现可能为卵巢肿瘤靶向治疗提供了新的有效载体。

妊娠期甲状腺生理功能指标参考区间的研究现状

甲状腺激素在妊娠期间会发生一系列生理变化,当变化超出正常范围,则会导致甲状腺功能异常。目前新型冠状病毒肺炎全球流行的形势,为妊娠期甲状腺功能的变化又增添了一不稳定因素。国内外依据妊娠期甲状腺功能的变化特点均制定了相应的诊治指南。根据指南,各国学者建立起了各单位、地区、国家的妊娠期甲状腺功能指标的参考区间,以使妊娠期甲状腺疾病能够得到正确的诊断及严密的监测。本文就妊娠期甲状腺生理功能指标参考区间建立的国内外研究现状作一综述,为该领域进一步研究以及最终应用到临床实践提供参考。