三硝基甲苯在鼠肝线粒体中的还原活化及其对线粒体Ca^(2+)转运的影响

在无氧条件下,以560μmol/L TNT与1mmol/L NADPH和大鼠肝线粒体(2 mg蛋白/ml)在室温下温育,用ESR波谱直接观察到TNT还原活化后形成的硝基阴离子自由基信号,信号的出现取决于温育体系中的所有三种成分。若温育体系中通入氧气,则信号消失。在有氧条件下,不同浓度TNT(35～560μmol/L)与NADPH及鼠肝线粒体在37℃温育,可致线粒体氧耗明显增加,伴有超氧阴离子自由基的形成和NADPH的氧化,线粒体对^(45)Ca的摄取能力也有明显的下降,这些改变均呈明显的浓度效应关系。当560μmol/L TNT加入到^(45)Ca预负荷的线粒体中,线粒体中的^(45)Ca释放明显增加,提示线粒体对Ca^(2+)的隔离功能受损。研究中还发现,在温育体系中加入超氧化物歧化酶和/或过氧化氢酶,可减少TNT引起的线粒体氧耗增加及NADPH氧化。

倍半氧化乙基锗(Ge—132)抗脂质过氧化作用的初步观察

倍半氧化乙基锗(Ge—132)是60年代来由日本学者浅井首先合成的一种水溶性有机锗,随后的研究表明,Ge—132具有预防和治疗某些疾病,使机体功能恢复正常。动物实验证实。Ge—132可保护小鼠预防自由基氧化的最终产物淀粉样物质的沉积,也阻止溶液中半脱氨酸的氧化,提示有机锗具有抗氧化能力,但尚未在人体内得到证实。

三硝基甲苯对大鼠肝细胞质膜Ca(2+)-ATP酶和蛋白质巯基含量的影响

用两种实验模型观察三硝基甲苯(TNT)对大鼠肝细胞质膜Ca^(2+)-ATP酶和蛋白巯基含量的影响。结果表明:当TNT直接与Percoll密度梯度离心分离的质膜及NADPH在37℃温育30或60min后,上述两项指标均未见明显改变;但若将TNT与胶原灌注分离的肝细胞在37℃温育同样的时间,然后用Affi-Gel 731聚阳离子凝胶颗粒吸附法分离质膜,则质膜Ca^(2+)-ATP酶活性和蛋白巯基含量均见明显下降,且呈剂量时间效应关系,两项观察指标之间密切相关。若在肝细胞的温育介质中加入二硫苏糖醇或GSH,则前者对Ca^(2+)-ATP酶活性具有明显的保护作用,而GSH作用不明显。

细胞与分子生物学新技术在我国毒理学研究中的应用

近年来 ,随着一些先进的细胞和分子生物学技术的引进与建立 ,我国毒理学研究整体水平得以大大的提高。现介绍几种我国已开展的细胞和分子生物学新技术的原理及其在毒理学领域中的应用 ,包括 :差异显示技术、单细胞凝胶电泳技术、穿梭质粒 p Z189和 p Sp189转染技术、转基因动物和转基因细胞、荧光原位杂交和流式细胞技术。这些技术具有终点明确 ,敏感性高等特点 ,在检测各种不同类型的 DNA损伤和基因突变 。

分子生物标志物在职业医学中的应用

随着分子生物学理论的发展和技术的广泛应用，分子生物标志物（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ）的研究和利用作为一个崭新的领域引起了国内外预防医学界的共同关注。生物标志物（ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ）所反映的是生物体系与环境因子（化学的、物理的或生物学的...

三硝基甲苯对大鼠肝微粒体Ca^(2+)转运的影响

不同浓度的TNT与大鼠肝微粒体在NADPH存在时37℃温育30分钟和60分钟后,微粒体摄取^(45)Ca有不同程度的抑制,并显示明显的剂量-效应和时间-效应关系,微粒体蛋白巯基含量也降低,且与^(45)Ca摄取的抑制有明显相关。微粒体用^(45)Ca预先温育1小时后,TNT可加速^(45)Ca从微粒体的漏出,亦具有明显的剂量-效应和时间-效应关系。

三硝基甲苯与大鼠肝细胞大分子的共价结合及其阻断的研究

以１４Ｃ—ＴＮＴ与新分离的大鼠肝细胞体外连续孵育２ｈ．观察ＴＮＴ与肝细胞大分子的共价结合，并与其他肝损害指标（ＧＳＨ、ＭＤＡ和细胞死亡率）比较。发现ＴＮＴ与肝细胞大分子共价结合随着剂量和孵育时间的增加而增加，并分别与细胞死亡率和ＧＳＨ含量呈正相关和负相关．二流苏糖醇对共价结合具有明显的拮抗作用．而维生素Ｅ虽具有明显的抗脂质过氧化作用，但此种作用与其对共价结合的拮抗作用并不完全平行．

125I─后标记方法检测DNA─蛋白质交联物的实验与应用研究

１２５Ｉ─后标记方法检测ＤＮＡ─蛋白质交联物的实验与应用研究庄志雄，张桥，雷毅雄，任泽舫，刘移民（广州中山医科大学，分子毒理研究室５１００８９）我们最近建立了一种快速、敏感、简便的１２５Ⅰ─后标记方法，用于检测环境污染物和致癌物引起的ＤＮＡ─蛋白质交...

维生素E和去铁敏对三硝基甲苯(TNT)急性染毒大鼠红细胞毒性的影响

分别给摄食普通饲料和维生素E缺乏饲料的两组雄性Wistar大鼠用1000mg/kgTNT灌胃染毒,8小时和16小时后处死动物,取血观察红细胞高铁血红蛋白(MetHb)、还原形谷胱甘肽(GSH)及低渗溶血率的变化。结果表明,两组动物MetHb均在染后出现明显的升高,与饲料中的维生素E含量无明显关系。然而,仅在维生素E缺乏组动物观察红细胞GSH 的显著下降和低渗溶血率的明显升高。给该组动物补充维生素E或在染毒前注射去铁敏(desferrioxamine),虽未能减少MetHb的形成,却可保护大鼠红细胞对抗TNT的损害,如防止GSH的耗竭和溶血倾向的出现。

改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌

目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。

单细胞电泳检测接触苯、甲苯和二甲苯工人外周血细胞DNA损伤

单细胞电泳检测接触苯、甲苯和二甲苯工人外周血细胞ＤＮＡ损伤＊倪祖尧１逢兵２孟建峰３杨成峰４刘玉清１董奇男１李寿祺１赖洪飘５庄志雄６张桥单细胞电泳（ＳｉｎｇｌｅＣｅｌＧｅｌＡｓｓａｙ，ＳＣＧ）是一种灵敏检测单个细胞ＤＮＡ损伤的电泳技术。它将细胞核内ＤＮ...

Ce^(3+)对大白鼠肝细胞及器官中环核苷酸的影响

研究了Ｃｅ３＋对原代肝细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的影响，并测定了用Ｃｅ３＋长期喂养的大白鼠脏器肝、肾、脾、肾上腺中ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的含量。结果表明，Ｃｅ３＋能使原代肝细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ浓度显著增加。长期喂养Ｃｅ３＋的大白鼠肝、肾中ｃＡＭＰ含量上升，脾、肾上腺中ｃＡＭＰ含量降低；肝、肾中ｃＧＭＰ含量降低，脾、肾上腺中ｃＧＭＰ浓度上升。

实时RT-PCR基因表达相对定量REST~软件分析与2^((-ΔΔCT))法比较

目的利用实时RT-PCR技术建立一种简便、准确的基因表达相对定量方法。方法以正常的人支气管上皮细胞株(16HBE)cDNA为模板5倍系列稀释,分别作DNA聚合酶K(POLK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因标准曲线。以不同剂量反式二羟环氧笨并芘(anti-BPDE)诱导的16HBE、anti-BPDE转化的16HBE及肺癌细胞株(H1299)cDNA为模板,进行实时定量RT-PCR。以GAPDH基因作为内参照,进行POLK基因表达相对定量。实验数据分别采用2(-ΔΔCT)法及REST软件分析。结果5倍系列稀释法制作的标准曲线,呈现较好的线型关系(Rsq0.997)。POLK及GAPDH基因扩增效率分别为117.5%和103.5%。采用2(-ΔΔCT)法计算出的表达比值均比REST软件分析高。结论实时RT-PCR技术结合REST软件分析是一种简便、准确的基因表达相对定量分析手段。

铝致大鼠中枢神经系统病理形态学改变的研究

目的 观察不同剂量、不同染毒时间铝对脑神经细胞数和海马颗粒空泡变性 (GVD)的影响及神经细胞的结构变化 ,为探讨铝的神经毒作用机制提供依据。方法 14 4只大鼠分为腹腔注射AlCl3 剂量组 (分别为 5 0、15 0、2 5 0mg/kg/d)和生理盐水对照组 ,于染铝 4 ,8,12周处死动物 ,取各脑区标本进行光镜、电镜观察。 结果 与对照组比较 ,15 0mg/kg4周及 5 0mg/kg12周组 ,大脑顶叶锥体层锥体细胞、小脑浦肯野细胞和海马锥体细跑数显著减少 (P<0 0 5 ) :5 0mg/kg8周组、15 0mg/kg及 2 5 0mg/kg4周组的GVD细胞数即有明显增加 (P <0 0 5 ) ,且各剂量组细胞GVD阳性率与铝剂量有相关性 ;光镜下 5 0mg/kg8周组和 15 0mg/kg4周组即出现尼氏小体溶解消失、核固缩等现象 ;电镜下 2 5 0mg/kg12周组 ,出现核膜变形 ,核仁变小 ,核周空泡化 ,线粒体肿胀等 ;15 0mg/kg12周组海马神经细胞出现核涨大空化。结论 本实验结果进一步证实了铝的神经毒性 ,其中海马GVD可能起重要作用 。

稀土元素铈对细胞内活性氧的影响

运用显微荧光术研究了Ce3+ 对肝细胞和V79细胞中活性氧 (ROS)的影响。结果表明 ,低浓度的Ce3 + 能显著降低细胞内ROS浓度 ,而高浓度的Ce3+ 能显著提高细胞内ROS的浓度。结果提示 ,低浓度的Ce3 + 可能减少脂质过氧化损伤或DNA氧化损伤 ,高浓度的Ce3 + 可能增加脂质过氧化损伤或DNA氧化损伤。

矩类迁移比作为单细胞凝胶电泳指标的研究

目的 研究单细胞凝胶电泳新指标。方法 采用H2 O2 对人外周淋巴细胞急性染毒作为DNA损伤模型,应用新型图像分析系统分析矩迁移比与惯量迁移比等指标。结果 Olive尾矩、矩迁移比和惯量迁移比3个指标与H2 O2剂量之间存在良好的线性剂量 效应关系,而尾长指标则在H2 O2 的高剂量范围(>160 μmol L)内出现饱和平台现象,且显示矩迁移比和惯量迁移比的变异系数较Olive尾矩有较小。结论 矩迁移比和惯量迁移比既有矩类指标的优点,又有比值类指标的优点,值得推广应用。

三氯乙烯急性染毒对大鼠肝脂质过氧化的影响

用抗氧化剂维生素E预处理后 ,观察三氯乙烯(30 0 0mg/kgB .W .)一次性经口染毒 2 4小时大鼠肝脏的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活力及丙二醛含量的变化。结果表明 ,三氯乙烯染毒组肝脏中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力及血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力均高于对照组 (P <0 0 1) ,同时 ,肝细胞出现脂肪变与坏死 ;而维生素E干预组的丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力及血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力均分别低于三氯乙烯染毒组 (P <0 0 1) ,肝细胞脂肪变与坏死程度有所改善 ,说明三氯乙烯急性染毒可引起肝脏脂质过氧化反应及肝损害 ,肝脏超氧化物歧化酶活力升高可能是机体受自由基及脂质过氧化反应刺激而诱导产生的一种适应性反应 。