基于TGF-β1/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后治疗糖尿病肾纤维化的作用机制

目的基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的作用与机制。方法随机选取8只SD雄性大鼠作为空白组,其余大鼠高脂饲料喂养联合腹腔注射1%链脲佐菌素(65 mg/kg)建立DN模型。DN模型大鼠随机分为模型组、二甲双胍阳性药组,女贞子低、高剂量组,酒女贞子低、高剂量组,每组8只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,1次/d,连续8周。血糖仪检测空腹血糖,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白量,ELISA法测定血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,Masson染色法观察大鼠肾组织病理变化,qRT-PCR法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、Smad 7 mRNA表达水平,Western blotting法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、磷酸化Smad 3(p-Smad 3)、Smad 7、磷酸化Smad 7(p-Smad 7)蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白及血清中Scr、BUN水平显著升高(P<0.01);肾组织可见肾小球周围有胶原纤维增生,中度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜增厚,肾小球萎缩;肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3和p-Smad 3蛋白表达明显上调(P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7、p-Smad 7蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组相比,女贞子酒蒸前后大鼠肾纤维化及肾损伤均有不同程度改善,血糖、24 h尿蛋白及血清BUN、SCr水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3、p-Smad 3蛋白表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7和p-Smad 7蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),且酒女贞子的改善效果优于女贞子。结论女贞子酒蒸后抗DN大鼠肾纤维化作用增强,可能是通过调控TGF-β1/Smads通路增强对DN大鼠肾纤维化的治疗作用。

蒸黄精粉末颜色与显微特征颜色及果糖含量的相关性研究

目的探究蒸黄精粉末颜色、显微特征颜色及果糖含量的相关性。方法基于10批蒸黄精饮片样本,利用色差法测定粉末颜色值,利用显微成像技术测定显微特征颜色信息,采用HPLC-ELSD法测定果糖含量,运用Pearson相关性分析法分析粉末颜色、显微特征颜色及果糖含量之间的相关性。结果蒸黄精粉末L^(*)值与表皮细胞和黏液细胞的L^(*)、E_(ab)^(*)值,导管的b^(*)、E_(ab)^(*)值及草酸钙针晶E_(ab)^(*)值呈显著正相关(P<0.05,P<0.01);蒸黄精粉末b^(*)值与草酸钙针晶b^(*)值呈显著正相关(P<0.01);蒸黄精粉末E_(ab)^(*)值与表皮细胞和黏液细胞的L^(*)、E_(ab)^(*)值和导管的b^(*)、E_(ab)^(*)值及草酸钙针晶E_(ab)^(*)值呈显著正相关(P<0.05,P<0.01);蒸黄精中果糖含量与其粉末、表皮细胞、黏液细胞的L^(*)、E_(ab)^(*)值及导管的b^(*)、E_(ab)^(*)值呈显著负相关(P<0.05,P<0.01)。结论蒸黄精粉末颜色和显微特征颜色及果糖含量之间存在一定的相关性,为蒸黄精饮片的质量评价提供了科学依据。

基于模拟炮制技术探究远志炮制前后皂苷类成分转化规律

目的:探讨远志甘草汁煮和水煮前后皂苷类成分转化机制和含量变化规律。方法:采用模拟炮制技术制备远志皂苷B、远志皂苷Z、远志皂苷F、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ单体模拟甘草汁煮品和模拟水煮品,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS)分析远志皂苷B、远志皂苷Z、远志皂苷F、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ单体模拟甘草汁煮品和模拟水煮品中的化学成分,采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法(UPLC-QQQ-MS/MS)测定远志、甘草汁煮远志、水煮远志中远志皂苷B、远志皂苷Z、远志皂苷F、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ、细叶远志皂苷的含量。结果:在甘草汁煮和水煮过程中,远志皂苷B可水解生成对甲氧基肉桂酸、desacylseneginⅢ、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ、细叶远志皂苷;远志皂苷Z可水解生成3,4,5-三甲氧基肉桂酸、远志皂苷TF、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ、细叶远志皂苷;远志皂苷F可水解生成3,4,5-三甲氧基肉桂酸、远志皂苷G、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ、细叶远志皂苷;瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ可水解生成细叶远志皂苷。远志经甘草汁煮和水煮后远志皂苷B含量明显降低(P<0.05,P<0.01),而远志皂苷Z、远志皂苷F、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ、细叶远志皂苷含量明显升高(P<0.05,P<0.01);甘草汁煮品中远志皂苷Z和细叶远志皂苷含量较水煮品明显升高(P<0.05,P<0.01),以细叶远志皂苷含量变化最为显著,而远志皂苷B、远志皂苷F、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ在水煮品和甘草汁煮品中的含量无统计学差异。结论:甘草汁煮和水煮均可使远志中远志皂苷B、远志皂苷Z、远志皂苷F、瓜子金皂苷ⅩⅩⅧ发生水解反应,通过脱糖生成次级苷和苷元(有机酸),从而导致远志炮制后皂苷类成分含量发生明显变化,且甘草汁可促进远志中某些皂苷水解为远志皂苷Z和细叶远志皂苷。本研究为揭示远志炮制机制提供了实验依据。