辅酶Q_(10)菌种选育及高通量筛选研究进展

辅酶Q10在预防和治疗人体疾病上起到非常重要的作用,广泛应用于化妆品和保健品领域,其市场需求和工业产量均持续扩大。微生物发酵法制备辅酶Q10是目前最经济且有前景的方法,而选育获得高产菌株是微生物发酵生产的关键。通常,采用传统或现代遗传改造技术处理菌株,产生大量突变后代,然后从中筛选出增幅最大的高产菌株。由于微生物突变是随机不定向的,因此高通量的筛选技术是实现突变库快速高效筛选和提高育种效率的保障。综述了近年来国内外在辅酶Q10高产菌株选育方面的技术和原理进展,以及显色定量法、紫外薄层色谱、HPLC,UPLC等技术在其高通量筛选方面的应用等相关研究进展。

黑曲霉原生质体诱变选育果胶酶高产菌株

通过UV和NTG诱变筛选获得了2株高产果胶酶突变株。以果胶酶产生菌黑曲霉EIM6为诱变材料,采用1.5%的溶壁酶和1.5%的纤维素酶处理其对数生长期菌丝体2 h获得高质量的原生质体。采用UV25S或50μg/mL NTG诱变30 min,构建原生质体突变库,经刚果红果胶平板筛选获得果胶酶突变株,通过液体深层培养复筛获得高产突变株EIM6-U11、EIM6-N5,酶活力分别从46 598.08、46 598.08 U/mL提高至68 596.57、68 879.56 U/mL,分别提高了47.21%、47.82%。连续8次传代经发酵测酶活力表明高产突变株EIM6-U11、EIM6-N5具有较高的遗传稳定性。

木聚糖酶高产菌株EIM-30的鉴定及其产酶条件的优化

通过对木聚糖酶高产菌株EIM-30基于形态学和18SrDNA序列的系统发育进化分析，鉴定为里氏木霉Trichoder撇reesei。在单因子实验确定EIM-30产木聚糖酶的最适碳源和氮源的基础上，通过Plackett—Burman实验对影响其产酶的相关因素进行评估并筛选出3个显著效应因子，然后应用最陡爬坡实验和响应面分析确定最适产酶培养基配方为：酵母浸膏1．50％，蛋白胨1．00％，NaC10．50％，PPG-20000．10％，MgS041．20％，CaC20．18％，（NH4）2S040．45％，甘油4．18％，乳糖3．05％，K2唧041．59％。优化后TrichodermareeseiEIM-30的液体发酵产木聚糖酶的活力可达9．857×105V／mL，较优化前提高1．98倍。

注重课堂提问,优化学生思维

教学提问是课堂教学中最常用的教学手段之一,它可以引起学生对教学内容的关注。使学生注意力与学习精神聚集于课堂,启发他们构建良好的思维方式,激发他们对学习内容的好奇心与探究欲望,提高他们学习的积极性与自觉性,有效地提高他们的综合素质与能力。