橡胶树AtCAB1同源基因的克隆及其在稳定与衰老期叶片中的差异分析

以一编码蛋白与拟南芥的CAB1高度相似的EST序列作为探针,通过同源搜索从橡胶树的转录组数据中电子克隆到一条长1 415 bp的cDNA,该序列包含一798 bp的ORF及47 bp的5′UTR和570 bp的3′UTR,命名为HbCAB1;在此基础上,采用PCR技术成功扩增了包括该ORF在内的915 bp的cDNA序列。序列分析表明,该基因预测编码265个氨基酸,理论分子量为28.15 ku,等电点为5.25;蛋白含有1个保守的捕光叶绿素a/b结合蛋白结构域,3个跨膜螺旋和1个C端螺旋,1个三聚化基序,以及多个叶绿素和类胡萝卜素结合位点;蛋白与蓖麻(Ricinus communis)、杨树(Populus trichocarpa)、橄榄(Canarium album)中同源蛋白的相似性都在95%以上,显示出基因进化的保守性。半定量RT-PCR分析显示,与稳定期叶片相比,HbCAB1在衰老期叶片中的转录水平显著下调。

橡胶树AtSAG12同源基因的克隆与表达特性分析

本研究以橡胶树为研究对象,采用PCR技术从其根组织中分离到一条长1048 bp的cDNA,并对其进行序列分析。结果表明,该序列包含一1023 bp的开放读码框(ORF),13 bp的5’UTR和12 bp的3’UTR;ORF预测编码340个氨基酸,理论分子量为37.41 kDa,等电点为5.09;蛋白含有1个Inhibitor_I29和1个Peptidase_C1A结构域,与拟南芥SAG12的相似性高达61%,将基因命名为HbSAG12H1。表达分析显示,与AtSAG12在衰老叶片中的特异表达不同,在分析的各种组织中,HbSAG12H1仅在根中被检测到,表现出明显的组织特异性。本研究为下一步的功能研究与利用奠定了基础。

橡胶树半胱氨酸蛋白酶基因HbCP2的克隆与表达特性分析

根据EST和基因组序列设计引物,应用RT-PCR技术从橡胶树的根组织中分离到1条长1056bp的cDNA,该序列包含了1 023 bp的开放读码框(ORF),17 bp的5’UTR和16 bp的3’UTR;ORF预测编码340个氨基酸,理论分子量为37.52 kD,等电点为5.25,属于液泡定位的分泌型蛋白;蛋白含有1个Inhibitor_I29和1个Peptidase_C1A结构域,隶属于木瓜蛋白酶C1家族;蛋白与蓖麻、杨树中同源蛋白的相似性均在80%以上,将基因命名为HbCP2。表达分析显示,在所分析的根、树皮、木质部、芽、叶片、叶柄和乳管等组织中,HbCP2仅在根中被检测到,表现出明显的组织特异性。