磁微粒化学发光法测定人尿液/血浆中儿茶酚胺类物质

目的建立血浆和尿液中游离儿茶酚胺类物质的化学发光免疫检测方法。方法将血浆或尿液标本进行提取、酰化、释放、甲基化处理,处理后的待测物分别与固相化的特异性抗体反应,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶(HRP),与待测抗原上的生物素结合,可以形成固相化的抗体-抗原-HRP免疫反应复合物,HRP催化底物发光。结果建立的肾上腺素(E)检测试剂的灵敏度为6.2 pg/mL,去甲肾上腺素(NE)检测试剂的灵敏度为11.9 pg/mL,多巴胺(DA)检测试剂的灵敏度为4.2 pg/mL,且与多种结构类似物均无明显的交叉反应;E、NE、DA检测试剂的变异系数分别为1.12%~1.77%、1.45%~3.65%、1.30%~1.96%;3种检测试剂的稳定性较好。结论本研究成功建立了检测尿液和血浆中游离E、NE、DA的化学发光免疫检测方法。

甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素化学发光免疫检测方法的建立及分析性能评估

目的构建甲氧基肾上腺素(MN)和甲氧基去甲肾上腺素(NMN)的化学发光免疫检测试剂。方法将MN、NMN的特异性抗体分别包被到磁微粒表面,通过标本前处理工艺将待测物生物素化,把与生物素特异性结合的亲和素用辣根过氧化物酶(HRP)标记,通过免疫反应,可以形成固相化的抗体-待测物-生物素-亲和素-HRP免疫反应产物。结果分别建立了MN、NMN的校准曲线,通过性能评估试验测得该检测试剂与多种结构类似物均无明显的交叉反应;MN检测试剂的分析灵敏度为10.21 ng/mL,NMN检测试剂的分析灵敏度为6.91 ng/mL;MN、NMN检测试剂变异系数分别为4.79%~5.25%、3.85%~4.73%;且两种检测试剂的稳定性评估结果显示试剂稳定性较好。结论该研究成功构建了MN、NMN化学发光免疫检测试剂。

血浆中游离甲氧基肾上腺素类物质化学发光免疫检测方法的建立及性能确认

目的建立血浆中游离甲氧基肾上腺素类物质的化学发光免疫检测方法并对检测方法部分性能进行确认。方法将待测样品(校准品、血浆或质控品)进行萃取、酰化,处理后的待测物分别与固相化甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)的特异性抗原竞争结合辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性抗体,通过免疫反应,形成固相化的抗原-抗体-HRP免疫反应复合物,HRP催化底物发光。用特异性、灵敏度、精密度、热加速稳定性和准确度进行性能确认。结果建立的MN、NMN检测方法检测多种结构类似物均无明显的交叉反应;MN检测试剂的空白限、检出限、功能灵敏度分别为10.51、21.15、25.76 ng/L,NMN检测试剂分别为11.54、28.43、31.29 ng/L;MN、NMN检测试剂变异系数分别为2.41%~5.38%,1.61%~3.22%;2种检测试剂的热加速稳定性试验显示检测试剂在2~8℃可以稳定存放1年,且该方法量值结果可溯源至质谱。结论本研究成功建立了检测血浆中游离MN、NMN的化学发光免疫检测方法。