大黄鱼碱性磷酸酶基因的克隆及表达特征分析

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)是一种广泛分布的单脂磷酸水解酶,是动物生物代谢过程中重要的调控酶。实验首次克隆了大黄鱼ALP基因cDNA全序列,命名为LcALP,其全长为2 345 bp,开放阅读框为1 629 bp,编码543个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现,LcALP在大黄鱼雌雄各组织中均有表达,其中在眼和头肾的表达量最高,雌性鳃和脑中LcALP表达量显著高于雄性,而在性腺和脾脏中的表达量则显著低于雄性;胚胎发育过程中,多细胞期、囊胚期和原肠期LcALP基因表达水平相对较低,在卵黄栓形成期明显提高,至孵出期达到峰值,而初孵仔鱼期则显著下调;大黄鱼肌肉细胞系经LPS处理后6 h LcALP表达量降低,12 h显著下调,而poly I:C处理后表达水平持续上升,24 h显著上调至峰值。研究表明,LcALP在大黄鱼胚胎发育调控以及机体免疫防御中发挥重要作用。

欧洲鳗鲡Anguilla anguilla尾鳍细胞系的建立以及不同生长因子对其增殖的影响

取欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)尾鳍进行体外培养,最终获得可连续传代的类纤维状的细胞系(欧洲鳗鲡尾鳍细胞系,European eel fin cell line,EEF)。探索不同传代比例对其生长增殖的影响。同时,以MTT法分析不同生长因子[碱性成纤维生长因子(FGF-basic)、肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)]对其增殖、形态的影响。结果显示:EEF增殖受上述生长因子调节作用很小,但是其形态却与FGF-basic的添加与否及其来源有很大关系。EEF细胞系的生长周期较目前所报道的欧洲鳗鲡细胞系快。染色体数目分析得出EEF的特征染色体数目为38条,这是首次基于体外培养细胞系的欧洲鳗鲡染色体数目分析。EEF的增殖、生长特性使之适宜于进一步开展鳗鲡病毒学、细胞生物学、基因组学、遗传学以及资源保护等方面的研究。