益气解毒方对12 Gy^(60)Coγ射线诱导的支持细胞铁死亡的防护作用及机制研究

目的研究12 Gy^(60)Coγ射线对睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)铁死亡的影响,并探究益气解毒方干预对支持细胞铁死亡的防护机制。方法支持细胞分为空白(NC)组,模型(IR)组、铁死亡激动剂(Erastin)组、铁死亡抑制剂(Lip-1)组、益气解毒方高剂量(YQJD-H)组、益气解毒方低剂量(YQJD-L)组,分别按照相应的条件培养,除NC组和Erastin组外,其余各组细胞均使用12 Gy^(60)Coγ射线进行一次性照射,建立支持细胞辐射损伤模型。照射后24 h,用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;铁离子比色法检测细胞内Fe^(2+)水平;ELISA法检测细胞上清液高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein box-1,HMGB1)水平;JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞GPX4、ACSL4、LPCAT3 mRNA的表达。结果照射后24 h,与NC组比较,Erastin组和IR组支持细胞活性及线粒体膜电位均显著下降(P<0.01),ROS、Fe^(2+)、HMGB1水平均明显升高(P<0.01),GPX4 mRNA表达水平下降(P<0.05);IR组ACSL4、LPCAT3 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与IR组比较,YQJD-H组、YQJD-L组、Lip-1组的细胞活性均显著升高(P<0.01),ROS、Fe^(2+)、HMGB1水平均明显降低(P<0.01);YQJD-H组GPX4 mRNA表达水平升高(P<0.05),ACSL4、LPCAT3 mRNA表达水平下降(P<0.05)。结论12 Gy^(60)Coγ射线诱导支持细胞发生铁死亡,而益气解毒方能减轻支持细胞铁死亡,起到辐射防护作用,其作用机制可能与GPX4/ACSL4/LPCAT3信号通路有关。

依据“阳化气,阴成形”理论探讨支持细胞支持功能与生精细胞精子发生

“阳化气,阴成形”概括了阴与阳的功能和特性:阳推动人体无形的功能活动,阴生成人体有形的形质。由此可阐释人体生理、病理情况及宏观、微观生命活动,即可应用“阳化气,阴成形”从中医学角度理解解剖定位的器官、组织、细胞的结构与功能。支持细胞与生精细胞共同存在于生精上皮,二者在结构和功能上具有紧密联系。支持细胞发挥无形的支持功能,归属于“阳化气”;生精细胞则通过精子发生形成有形的精子,归属于“阴成形”。支持细胞发挥营养支持、免疫保护等功能,推动、保障和维持生精细胞的精子发生,生精细胞也会对支持细胞的功能发挥一定调控作用,二者互根互用。该文将有助于理解支持细胞和生精细胞在生精过程中的互作关系,并为涉及支持细胞和生精细胞异常的男性不育症的辨证论治提供中医理论参考。

益气解毒方对6 Gy 60Co γ射线致小鼠血睾屏障损伤的防护效应

目的 观察6 Gy60Coγ射线一次性全身照射对C57BL/6J小鼠血睾屏障的损伤,以及益气解毒方的防护效应。方法 80只C57BL/6J雄性小鼠根据体质量随机分为空白组、模型组、安多霖组(0.54 g/kg)和益气解毒方组(16.58 g/kg),每组20只。预防性给药10 d后,除空白组外,其余各组小鼠均给予6 Gy60Coγ射线一次性全身照射,并于照射后第4天持续给药至第11天。分别于照射后第2、12天处死小鼠,称量睾丸和附睾质量,HE染色观察睾丸及附睾病理变化、测量睾丸生精小管直径和生精上皮厚度,ELISA法检测血清抑制素B(INH B)水平,Western blotting检测小鼠睾丸中紧密连接蛋白-11及闭锁蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组、安多霖组及益气解毒方组小鼠睾丸和附睾质量在照射后第2天差异无统计学意义,而照射后第12天均下降(P<0.01);模型组小鼠睾丸和附睾组织在照射后第2天即出现病理损伤,照射后第12天损伤加重,且在这2个时间点,生精小管直径和生精上皮厚度均较空白组下降(P<0.01)。益气解毒方组小鼠睾丸及附睾组织病理损伤均较模型组改善,且生精小管直径和生精上皮厚度较模型组均增加(P<0.01)。在照射后12 d,模型组小鼠血清INH B含量较空白组下降(P<0.05);益气解毒方组小鼠血清INH B含量较模型组上升(P<0.01)。照射后第2、12天,模型组小鼠睾丸中紧密连接蛋白-11、闭锁蛋白含量均较空白组下降(P<0.05,P<0.01),益气解毒方组小鼠睾丸中紧密连接蛋白-11、闭锁蛋白含量均较模型组上升(P<0.01)。结论 6 Gy60Coγ射线一次性全身照射导致雄性C57BL/6J小鼠血睾屏障严重损伤,益气解毒方能有效减轻该损伤,并促进生精功能的恢复,具有一定的防护效应。

益气解毒方对12 Gy^(60)Co γ射线辐射后Sertoli细胞分泌功能的防护作用及机制研究

目的 研究^(60)Coγ射线对睾丸支持细胞(Sertoli细胞)炎性因子分泌水平的影响,并探究益气解毒方治疗后Sertoli细胞分泌功能损伤的防护机制。方法 Sertoli细胞分为正常组(NC组)、模型组(IR组)、益气解毒高剂量组(YQJD-H组)、益气解毒中剂量组(YQJD组)、益气解毒低剂量组(YQJD-L组)、核因子激活的B细胞的k-轻链增强抑制剂组(Bay组)、中药+Bay组(Y+B组)。各组以相应条件培养24 h后,除NC组外,使用12 Gy^(60)Coγ射线进行一次性照射,建立Sertoli细胞辐射损伤模型。CCK8法检测细胞活力,Elisa法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)、转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β, TGF-β)的含量,WB法检测NF-κB/IκBα通路蛋白表达水平。结果 照射后24 h,与NC组比较,IR组Sertoli细胞增殖能力下降(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β的分泌量均明显升高(P<0.01);NF-κB、磷酸化NF-κB蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),IκBα蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与IR组比较,益气解毒方能够升高照射后Sertoli细胞的存活率(P<0.01),YQJD组、Bay组、Y+B组细胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β的量均明显降低(P<0.05);YQJD组、Bay组、Y+B组细胞的NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),YQJD组、Y+B组细胞的磷酸化NF-κB蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),YQJD组、Bay组、Y+B组细胞的IκBα蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论 12 Gy^(60)Coγ射线降低Sertoli细胞增殖能力,使其分泌功能紊乱,而益气解毒方能通过调节NF-κB/IκBα通路,减轻Sertoli细胞受到的辐射损伤,在一定程度上促进睾丸炎性微环境恢复稳定。