基于PiggyBac转座子优化稳定表达细胞系的新型瞬时受体电位M2通道抑制剂筛选

目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用系统携带的荧光与膜片钳鉴定TRPM2基因表达,通过Z'因子评估细胞模型是否适用于钙成像法的高通量筛选。利用钙成像法和膜片钳对11个先导化合物分子进行初步活性评价,测定化合物分子对TRPM2通道的抑制活性。利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤模型和细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法验证筛选得到的化合物分子对损伤细胞的保护作用。利用流式细胞术检测细胞活性氧水平。利用小鼠短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型评价化合物的神经保护作用。结果:成功构建pPB-hTRPM2真核表达载体,构建出可高效表达TRPM2基因的HEK293T细胞系,并同时表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。在筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中,所有细胞荧光明亮可见,诱导后细胞表现出经典的TRPM2通道电流特征,TRPM2通道电流值与瞬时转染对照组差异无统计学意义(P>0.05)。该筛选系统进行钙成像实验的Z'因子为0.5416,表明其适用于高通量筛选。通过钙成像法结合膜片钳筛选出化合物6,其具有显著的TRPM2通道抑制作用,且1.0μmol/L的化合物6能够显著提高OGD/R后SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),降低活性氧水平(P<0.05),0.3、1.0 mg/kg的化合物6能降低tMCAO小鼠脑梗死体积百分比(均P<0.05)。结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建了TRPM2基因稳定表达细胞系,利用钙成像法和膜片钳在候选化合物中成功筛选出一个高亲和力的新的TRPM2通道抑制剂。该抑制剂可以通过降低细胞活性氧水平缓解OGD/R后细胞损伤,并对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

邀请式裂变营销对新兴App新用户使用意愿影响

邀请式裂变营销作为获取新用户的重要手段,已经在拼多多、瑞幸咖啡等营销案例中取得重大成功。但对于缺乏基础用户群体和影响力的新兴App来说,邀请式裂变营销的适用性仍有待研究。本文研究表明,新兴App的感知易用性、感知有用性对邀请式裂变营销效果有正向影响,但影响并不显著,新用户在其他App上的成功经验也不会明显提高该用户对新兴App的使用意愿,但周边朋友的推荐可以明显提高新用户使用意愿。

大学生参与废旧手机回收行为的影响因素分析

随着时代的发展,手机变得不可或缺,人们对手机的需要也在不断增长。手机更新迭代的速度十分快,导致生活中废旧手机的数量逐渐增多,废旧手机的回收成了亟待解决的问题。文章为分析大学生参与废旧手机回收的行为意向,基于计划行为理论从行为态度、知觉行为控制、回收服务、行为动机、感知风险、外部情境因素对收集到的调查数据进行实证分析,提出相应的建议,以期望提高高校大学生在废旧手机回收的参与程度,促进手机行业的绿色健康发展。