聚-γ-谷氨酸合成酶复合体A的原核表达及其多克隆抗体的制备

以pgsBCA质粒为模板对已知的pgsA进行PCR扩增,得到长度为1 116 bp的片段。将获得的PgsA基因连接到pQE-30表达载体,转化大肠埃希菌后用IPTG诱导其表达,经SDS-PAGE和Westernblot分析,均可见约42 ku目的蛋白带。通过Ni-NTA agarose纯化,获得较高纯度的重组蛋白,经基因定量仪测定其浓度可达1.5 mg/mL;以其免疫新西兰兔获得免疫血清,Western blot分析证实,该重组蛋白具有良好的反应原性,用间接ELISA检测抗体效价可高达1∶12 800。结果表明,成功获得了pgsA的多克隆抗体。