大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶检测及其耐药基因分析

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率,分析及研究其耐药性和耐药基因分型。方法用药敏纸片法对142株大肠埃希菌和79株肺炎克雷伯菌进行抗生素药物敏感试验,并对这2种菌株做ESBLs初筛和确证试验。对其中60株ESBLs阳性菌（大肠埃希菌29株,肺炎克雷伯菌31株）用聚合酶链反应（PCR）检测TEM、SHV、CTX-M3种基因并进行测序分型。结果142株大肠埃希菌和79株肺炎克雷伯菌中确证试验阳性率分别为56.3%和41.8%。产ESBLs菌对头孢类抗生素高度耐药,对庆大霉素、环内沙星的耐药率为71.3%-88.5%,对亚胺培南高度敏感（100.0%）,对头孢西丁、头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦等的敏感性在63.8%-92.0%。60株ESBLs阳性菌中,TEM、SHV、CTX-M3种基因检出率分别为58.3%、33.3%、66.7%。其中29株大肠埃希菌中,TEM基因检出率为75.8%,SHV基因检出率为0,CTX-M基因检出率为86.2%。31株肺炎克雷伯菌中,TEM基因检出率为41.9%,SHV基因检出率为64.5%,CTX-M基因检出率为48.4%。有35株（58.3%）菌株同时检测到2种以上基因型。序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM-1基因,CTX-M扩增产物均属于CTX-M-3基因,而SHV扩增产物则分别属于SHV-1、SHV-5、SHV-11、SHV-12、SHV-28。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高,CTX-M-3、SHV-11和SHV-12是我院产ESBLs菌株的主要基因型。

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的 了解临床分离 12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法 收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌 12株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC) ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分析其同源性 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测分析其耐药基因。结果 12株细菌均为多重耐药株 ,有 9株对亚胺培南耐药 ,6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲唑均耐药 ,对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。 12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2 ) 2型 ,以A型为主要流行株 (9株 ) ,主要集中在重症监护病房 (ICU)。PCR检出 12株菌株均携带OXA 2 3基因 ,未能检出OXA 2 4基因。结论 本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致 ,该流行株呈多重耐药 ,12株菌株均产OXA 2 3型碳青霉烯酶。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的了解我院分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)耐药机制及同源性分型情况。方法收集临床分离耐亚胺培南PA,用K-B法检测28株耐亚胺培南PA对12种抗菌药的敏感性,用肠杆菌科细菌基因间重复序列(ERIC)进行同源性分析,并用PCR法检测外膜孔蛋白OprD2和金属β内酰胺酶(IMP、VIM)基因。结果28株耐亚胺培南PA对其他12种抗菌药的耐药率在14.8%~42.3%。经ERIC-PCR分析后共有11个基因型。其中A型为11株:A1型9株,A2型2株;B型为5株:B1型2株,B2型2株,B3型1株;C型3株;D型2株;E^K型各1株。PCR检测到OprD2基因仅4株,其缺失率为85.7%,28株PA中检测到1株VIM基因,经测序证实为VIM-2型。结论本院耐亚胺培南PA的主要耐药机制为外膜孔蛋白缺失。在外科和高干病房中出现多种基因型的耐亚胺培南PA传播。

鲍曼不动杆菌整合子相关耐药基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌整合子流行情况,证实整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系,建立一种快速简便的整合酶聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法收集我院2005年9月至2006年2月临床分离的鲍曼不动杆菌共52株,用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌耐药性及用整合酶PCR检测其整合子基因。结果在52株鲍曼不动杆菌中,整合酶PCR检测出Ⅰ类整合子33株(63%),未检测出Ⅱ类整合子。统计学分析结果显示,整合子阴性和阳性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药率存在明显差异,前者仅对几种抗生素耐药而后者对多种抗生素耐药。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中主要为Ⅰ类整合子,整合酶PCR是一种快速、简便、易在临床开展的检测方法,同时也是控制医院感染的有效检测手段。

上海3所妇产科医院白念珠菌基因同源性分析

目的了解上海地区白念珠菌主要基因型,为监测和诊治临床白念珠菌感染提供实验依据。方法收集2013年11月—2014年1月复旦大学附属妇产科医院、国际和平妇幼保健院和上海市第一妇婴保健院3所医院阴道炎患者阴道分泌物分离的白念珠菌共115株,随机扩增多态性DNA检测其基因型,ATB FUNGUS 3试剂盒检测5种抗真菌药物最低抑菌浓度。结果随机扩增多态性DNA结果显示,115株菌分为A、B、C3型,其中A型89株(占77.4%)又分5个亚型,B型22株(占19.1%)分为2个亚型。C型4株(占3.5%)。115株白念珠菌对5-氟胞嘧啶敏感率为96.5%;对两性霉素B敏感率为100%;对氟康唑敏感率为85.2%;对伊曲康唑敏感率为55.7%;对伏立康唑敏感率为84.3%。结论上海地区3所医院分离的白念珠菌基因型没有明显区别,同源性分型主要以A型为主。药敏试验显示,该地区白念珠菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伏立康唑敏感率较高。

奇异变形杆菌产超广谱β内酰胺酶基因检测

目的了解我院2007年1月—2008年6月临床分离119株奇异变形杆菌产ESBLs检出率,并分析研究其耐药性和耐药基因分型。方法用药敏纸片法(K-B法)对119株奇异变形杆菌进行抗菌药敏试验,并作ESBLs初筛和确证试验。对其中产ESBLs菌用PCR方法检测TEM、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-9组和SHV5种基因并对其进行测序。结果119株奇异变形杆菌ESBLs确证试验阳性率为20.2%,产ESBLs菌株对头孢呋辛、头孢唑林、头孢克洛和哌拉西林等耐药率均为100%,对头孢噻肟、庆大霉素和环丙沙星耐药率分别为95.5%、95.2%和86.4%。24株表型确证试验产ESBLs菌中,TEM基因检出率为70.8%,CTX-M-1组基因检出率为54.2%,CTX-M-2组基因检出率为33.3%,未检测到CTX-M-9组和SHV基因。经DNA测序,17株产TEM型ESBLs奇异变形杆菌均属于TEM-1型基因,13株CTX-M-1组和8株CTX-M-2组奇异变形杆菌分别为CTX-M-3型和CTX-M-2型基因,未检测到TEM型ESBLs菌株。结论奇异变形杆菌中产ESBLs菌株检出率较高,产ESBLs菌对头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和氨基糖苷类等抗菌药物呈多重耐药性。

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)在结核分枝杆菌检测中的价值。方法收集患者痰液、灌洗液、胸水和尿液等标本,分别作涂片检测(萋纳染色和荧光染色)和FQ-PCR检测,比较两者的阳性率。结果169例标本中,萋纳染色阳性共7例(4.1%),38例疑似标本中荧光染色阳性共15例,FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性共17例(10.1%),FQ-PCR与荧光染色符合率为88.2%。结论涂片检查结核分枝杆菌阳性率较低,FQ-PCR法检测结核分枝杆菌DNA阳性率高于涂片法,可列入结核分枝杆菌实验诊断的常规项目。

耐万古霉素肠球菌表型检测及基因分型

目的 研究对万古霉素耐药或中介的肠球菌株的表型和基因型 ,以了解本院耐万古霉素肠球菌 (VRE)的流行状况 ,指导临床合理用药。方法 收集 2 0 0株临床分离的肠球菌株 ,用琼脂筛选法筛选VRE ,并分别用Etest和多重PCR检测和分析对万古霉素耐药或中介肠球菌株的表型和基因型。结果 共检出 10株对万古霉素耐药或中介的肠球菌株 ,其中 5株为天然耐万古霉素肠球菌。基因型分析的结果为 1株vanA型 ,4株vanC1型 ,3株vanC2型 ,2株基因型不明。结论 已发现 5株VRE(1株VANA型 ) ,提示临床上须合理使用抗生素 ,以防止VRE等多重耐药细菌的爆发流行。

214株鲍曼不动杆菌最低抑菌浓度及耐药性

目的 了解我院和威尔斯亲王医院鲍曼不动杆菌对16种抗生素的耐药性.方法 收集我院和香港威尔斯亲王医院临床分离的鲍曼不动杆菌共214株,用琼脂稀释法检测鲍曼不动杆菌对16种抗生素的最低抑菌浓度.结果 214株鲍曼不动杆菌对16种抗菌药物的耐药率中以头孢哌酮-舒巴坦、亚胺培南和美罗培南耐药率最低,其他抗菌药物耐药率达49.5%～73.4%.上海菌株对替卡西林、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、替卡西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方磺胺甲( )唑的耐药率均高于香港菌株.其他抗生素耐药率相似.结论 本院鲍曼不动杆菌耐药性高于香港威尔斯亲王医院,需提醒临床医生慎用抗生素,避免多重耐药鲍曼不动杆菌在院内传播.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。

双纸片法检测葡萄球菌中可诱导的克林霉素耐药

目的了解我院葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性及可诱导克林霉素耐药发生率。方法KirbyBauer法检测2004年5—7月我院268株葡萄球菌对14种抗菌药物的耐药性,双纸片法检测可诱导克林霉素耐药。结果替考拉宁和万古霉素抗菌活性最强,136株金黄色葡萄球菌中有124株为红霉素耐药,其中115株为持续性克林霉素耐药,7株为可诱导性克林霉素耐药。132株凝固酶阴性葡萄球菌中有106株为红霉素耐药,其中67株为持续性耐药,16株为可诱导性克林霉素耐药。结论临床微生物实验室须加强可诱导克林霉素耐药的检测,以指导临床合理使用抗生素。

科玛嘉念珠菌显色培养基在酵母菌鉴定中的应用评价

目的评价科玛嘉念珠菌显色培养基在酵母菌鉴定中的应用。方法用科玛嘉念珠菌显色培养基和Vitek32 - YBC卡鉴定 5 2株酵母菌。结果 5 2株酵母菌中 ,科玛嘉显色基鉴定出 33株白色念珠菌 ,13株热带念珠菌 ,2株光滑念珠菌 ,4株其他念珠菌。YBC卡鉴定出 32株白色念珠菌 ,12株热带念珠菌。结论显色法需时短 ,价格适中 ,可鉴定 92 %左右的致病酵母菌。 YBC卡鉴定菌种较显色法多 ,但鉴定时间长 。

微量稀释法检测酵母菌最低抑菌浓度

目的 了解临床常见酵母菌对抗真菌剂的体外药敏试验,以指导临床医生合理使用抗生素。方法 收集2001年2～3月临床分离酵母菌共54株,应用微量稀释法测定54株酵母菌对两性霉素、酮康唑和氟康唑的最低抑菌浓度(MIC)。结果 酵母菌对两性霉素的MIC值在0.25～1.0μg/ml之间,氟康唑的MIC值在2.0～8.0μg/ml之间。酮康唑的MIC值>16μg/ml。结论 酵母菌对两性霉素的耐药率最低(0％),其次为氟康唑(18.5％),酮康唑耐药率最高(79.6％)。微量稀释法方法简便,结果较可靠,可用于常规检测酵母菌的药敏试验。

TALENs技术在基因功能研究中的应用

基因敲除技术广泛应用于研究各类细胞和生物的基因功能。转录激活子样效应因子核酸酶技术(TALENs)是近年发展起来的一种新型基因敲除方法,其利用TALEs蛋白核酸结合域氨基酸序列与其靶位点核酸序列之间存在着恒定对应关系,从而组装出能特异性结合任意DNA序列的模块化蛋白。TALENs技术以其快速、高效的优势对生物基因研究领域产生深远影响,为遗传疾病的治疗提供了新的策略。

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌基因的研究

目的了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌耐药性、同源性及产 β -内酰胺酶基因型。方法收集我院和香港威尔斯亲王医院临床分离鲍曼不动杆菌共 2 14株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度 (MICs)。用脉冲场凝胶电泳 (PFGE)和REP PCR分析 12株对碳青霉烯类耐药菌株基因同源性 ,等电聚焦电泳检测其 β-内酰胺酶和聚合酶链反应 (PCR)检测 β -内酰胺酶基因。结果2 14株鲍曼不动杆菌中有 12株对替卡西林、哌拉西林、替卡西林 /克拉维酸 (MICs≥ 12 8μg/mL)、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮(MICs,32～ >6 4 μg/mL)、亚胺配南、美罗培南 (MICs ,8～ >6 4 μg/mL)和阿米卡星 /舒巴坦 (MICs,16～ 6 4 μg/mL)耐药 ,只有哌拉西林 /他唑巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、利氟沙星和环丙沙星对 12株鲍曼不动杆菌有 5 0 %以上的抑菌效果 (MICs分别为 6 4～ >12 8μg/mL、8～ 32 μg/mL、0 .12～ 8μg/mL和 0 .5～6 4 μg/mL)。PFGE分型 9株菌株为A型 ,3株为B型 ,REP PCR结果与PFGE结果一致。12株碳青霉烯类耐药菌株均携带pIs 5 .8、6 .9和 7.2三种 β -内酰胺酶和OXA 2 3基因 ,11株上海菌株中检测出PER 1型基因和3株菌株检测到TEM -相似基因。 12株菌株中未能检测到OXA 2 4基因。结论本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院?

E试验测定50株淋病奈瑟球菌的药物敏感性

目的 :检测 8种抗菌药物对 5 0株淋病奈瑟球菌的最低抑菌浓度 (MIC) ,分析和研究淋病奈瑟球菌对不同抗菌药物的耐药性。方法 :用E试验检测不同抗菌药物对 5 0株淋病奈瑟球菌的MIC。结果 :5 0株淋病奈瑟球菌对大观霉素、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢曲松、青霉素、四环素、曲伐沙星和环丙沙星耐药率分别为 0、2 %、8%、1 0 %、5 0 %、2 2 %、1 4 %和 74 %。其中β内酰胺酶阳性 1 7株 ,阳性率 34%。结论 :淋病奈瑟球菌对大观霉素耐药率最低 ,其次为头孢菌素类抗生素 。

肝移植病房MRSA分子流行病学研究

目的研究我院肝移植病房MRSA同源性分布情况。方法收集我院2005年3月—2006年11月肝移植病人中分离金葡菌共57株,用头孢西丁纸片法进行MRSA表型检测,筛选MRSA,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对MRSA菌株进行同源性检测。结果57株金葡菌中,46株为MRSA。MRSA经PFGE分为8个型(A^H型)。以A型(27株)、B型(10株)为主。在2005年3月—2006年11月发生了A1亚型的暴发流行。结论MRSA在肝移植病人间流行情况十分严重,及时检测MRSA并进行流行病学研究将有利于控制耐药菌的播散。

Phoenix-100全自动微生物鉴定/药敏系统检测肠球菌方法评估

目的用Phoen ix-100全自动微生物鉴定/药敏系统(简称Phoen ix-100系统)检测肠球菌并评估此检测系统。方法收集50株临床分离肠球菌,用Phoen ix-100系统进行鉴定及药敏试验,通过与API鉴定系统、药敏纸片法和E-test法[筛选耐万古霉素肠球菌(VRE)]比较,对Phoen ix-100系统进行评估。结果与API鉴定系统相比,Phoen ix-100系统鉴定肠球菌的一致率为90.0%。与药敏纸片法相比,Phoen ix-100系统检测肠球菌对庆大霉素(筛选耐高浓度氨基糖苷类抗生素肠球菌)、氨苄西林、环丙沙星、红霉素、呋喃妥因、万古霉素和肽可霉素药敏结果的完全符合率分别为94.0%、94.0%、88.0%、94.0%、70.8%、64.0%和92.0%。与E-test法相比,Phoen ix-100系统筛选VRE的完全符合率为84.0%;未出现极大错误,大错误率为12.0%,小错误率为4.0%。结论用Phoen ix-100系统检测肠球菌是一种简便、快速和比较准确可靠的方法。