小反刍兽疫和山羊痘二联灭活疫苗的制备及其免疫原性

为了研制小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)和山羊痘(Goat pox,GTP)二联油剂灭活疫苗,以Vero细胞增殖小反刍兽疫病毒Nigeria75/1 Clone 9株和山羊痘病毒CVCC AV41株,通过细胞病变观察、间接免疫荧光试验和荧光定量PCR确定接种方式、接毒剂量和收毒时间对病毒增殖的影响。采用细胞病变观察、SDS-PAGE和Western-blot比较甲醛、二乙烯亚胺和β-丙内酯灭活病毒的效果。随后在灭活的病毒悬液中加入等体积的油佐剂进行乳化,制备PPRV-GTPV二联油剂灭活疫苗,并参照《中国兽药典》检测疫苗理化性状。为评价疫苗的免疫原性,将24只2月龄临床健康的雷州山羊随机分为3组(每组8只),分别肌肉注射生理盐水、PPRV-GTPV二联灭活疫苗、商品化PPRV-GTPV弱毒疫苗。免疫后14 d和28 d分别检测试验山羊血清PPRV和GTPV中和抗体。结果表明,PPRV和GTPV以100 TCID50/mL的剂量共感染Vero细胞84 h后的病毒滴度较高。用终浓度为0.025%的β-丙内酯4℃处理24 h,能有效灭活PPRV和GTPV;制备的灭活疫苗符合《中国兽药典》相关要求。PPRV和GTPV二联灭活疫苗免疫14 d后,山羊血清PPRV和GTPV中和抗体水平与商品化弱毒疫苗相仿;免疫28 d后,山羊血清PPRV中和抗体显著高于商品化弱毒疫苗,GTPV抗体呈上升趋势,但显著低于商品化弱毒疫苗。试验山羊均未见明显不良反应。综上说明,PPRV-GTPV二联灭活疫苗安全、有效,有望在小反刍兽疫和山羊痘的防制中发挥重要作用。