肿瘤坏死因子α和β对电离辐射诱导细胞凋亡的效应

为探讨肿瘤坏死因子(tumor necrosis foctor)α和β(TNFα和β)对电离辐射诱发细胞凋亡的效应及其机理,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和FACS分析等方法,观察了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)和β(hTNFβ)对^(60)Co-γ射线诱发细胞凋亡的形态学,生化学变化。结果显示:hTNFα或hTNFβ均可明显抑制^(60)Co-γ射线诱发正常人胚肺二倍体细胞(2BS)的凋亡,而相同剂量的hTNFα能促进^(60)Co-γ射线诱发的人体肺腺癌细胞系A549细胞凋亡,而对另一株人体肺癌SPC细胞的效应比A549降低1倍;hTNFβ能分别增强A549和SPC的细胞凋亡频率。由此认为,hTNFα和hTNFβ均可通过调节细胞的生理生化反应来改变细胞对电离辐射的敏感性,可保护正常细胞免受辐射损伤,而增加某些肿瘤细胞对辐射的敏感性。

应用带HSV－TK基因的重组腺病毒的肺癌基因治疗的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用。本文报道在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ，ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到回１００％。四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９，ＬＡＸ，ＳＰＣ，ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔＫ）的杀伤作用表现不同的敏感性。另外，Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔＫ的细胞都有一定杀伤作用，但杀伤效果有很大差别；就Ａ５４９而言，ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７—８倍。此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”，即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后，后者也明显地遭到杀伤。

甲型肝炎减毒活疫苗(L-A-1株)扩大人群的反应及效果观察

为进一步研究甲肝减毒活疫苗的安全性及免疫原性,在小量人体观察(30名志愿者)获得满意结果的基础上,进行了扩大人群的再观察。选350名8～11岁健康学龄儿童,随机分成5个组,对不同接种剂量、不同接种途径及不同滴度的疫苗接种后的反应及效果进行了观察。结果表明,所有受试者均无局部和全身反应,亦无肝酶的异常升高。免后4周,不同剂量、不同途径的抗体阳转率为70～100%,免后8周为98～100%,进一步证实该实验性疫苗是安全的,其免疫原性是良好的。

生物制品中支原体污染的快速检测

用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈｓｔ阳性检出率为１９％。这些结果表明ＰＣＲ法较Ｈｏｅｃｈｓｔ染色法更敏感。

表达人γ-干扰素的重组腺病毒的制备及检测

Ｅ１区缺失的腺病毒载体插入人γ干扰素ｃＤＮＡ序列，与ｐＪＭ１７质粒通过磷酸钙沉淀法共转染２９３细胞，经同源重组，共获得６个病毒噬斑。经ＰＣＲ共扩增检测，证实这６个噬斑均为带有人γ干扰素ｃＤＮＡ的重组腺病毒；受其感染的２９３细胞的上清中，都能测到γ干扰素的活性，且这种活性可被一定稀释度的兔抗人γ干扰素多克隆抗体所中和。其中的１号重组病毒纯化后，按不同的ＭＯＩ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）值感染复制缺陷型腺病毒不能在其中增殖的Ｂ１６Ｆ１０细胞，未出现细胞病变效应（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｅｃｔ，ＣＰＥ），而上清中的γ干扰素活性却随ＭＯＩ值增大而升高。

带HSV-tk基因的重组腺病毒基因治疗小鼠B16黑色素瘤的实验研究

我们成功开展了携带单纯疱疹Ⅰ型病毒胸腺嘧啶激酶基因(Herpes simplex virus thy-midine kinase,HSV-tk)的复制缺陷型重组腺病毒Ad(HSV-tk)结合使用GCV治疗C 57 BL/6小鼠B 16黑色素瘤的离体及动物试验。导入了HSV-tk基因的B16细胞对GCV的杀伤作用高度敏感,IC_(50)约为0.1μg/ml;感染与未感染Ad(HSV-tk)的B 16细胞混合后,可观察到显著的细胞毒杀伤作用——“旁观者效应”。Ad(HSV-tk)直接注入C57BL/6小鼠已建成的B16黑色素瘤内,结合连续6 d腹腔给予GCV,肿瘤结节出现萎缩坏死现象,大小仅为对照组的1/25。灵敏的RT-PCR检测结果表明:瘤内注射Ad(HSV-tk)后,腺病毒的扩散范围是有限的,HSV-tk基因的表达局限于肿瘤组织内。因此,Ad(HSV-tk)/GCV疗法可能为黑色素瘤等恶性实体瘤的治疗提供了一种较为有效、安全的选择方案。

表达人白细胞介素-2的重组腺病毒的制备

携带人白细胞介素-2（interleukin－2，IL－2）cDNA序列的E1区缺陷的腺病毒载体pAdl2／RSV－IL2－bpA与pJM17质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞，经同源重组，获得了一个腺病毒噬斑。抽提腺病毒DNA，运用PCR扩增及XbaI酶切检测，证实这一噬斑为带有人IL－2cNDA序列的重组腺病毒。受其感染的293细胞和人黑素瘤A375细胞上清中，都能够测出IL－2的活性，表明制备的重组腺病毒是能表达人IL－2的，可进一步用于恶性肿瘤的基因治疗。

小鼠腹腔内腺病毒介导的基因表达和分布

本文报道了重组腺病毒——带有报道基因1acZ的Ad/RSV-β-gal注入小鼠腹腔后,在胃、小肠、大肠、子宫、肝、脾、膀胱、体壁、膈和睾丸的腹膜面均出现被X-gal染成蓝色的细胞,腹膜面下未见染色细胞。结果表明重组腺病毒可广泛感染腹腔内的组织并使外源基因表达,但不扩散出体腔。另一带有单钝疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)的重组腺病毒Ad/RSV- tk,注入小鼠腹腔后并给以药物ACV,未发现急性毒性反应。在此基础上,讨论了TK/ACV 系统对腹腔内肿瘤作基因治疗的可行性。

哺乳动物基因功能研究正引发国际生命科学和生物医药产业的新一轮竞争

人具有46条染色体，包含了约2．4万个编码不同蛋白质的基因以及大量miRNA和基因调控序列。这些基因蕴含的遗传信息不仅决定了人的体貌、代谢、寿命等生理特征，而且对疾病的发生发展具有重要作用。现代生物医学研究表明，基因突变和基因功能异常不仅可以直接导致肿瘤、

带HSV-tk基因的重组腺病毒治疗小鼠实体瘤的研究

在完成一系列离体实验川的基础上进一步进行了活体研究，离体实验表明，小鼠肉瘤细胞5180在感染重组腺病毒ADV／RSV－tk后对GCV的处理显示出致死敏感性。因4L以S180肿瘤细胞进行活体实验，小鼠腋下接种3×106S180细胞，当能触摸到瘤块时在瘤内注入ADV／RSV－tk，并腹腔注射GCV连续五天；种瘤后10天杀死小鼠剥离瘤块称重，治疗组瘤重为对照组的1／14。实验结果表明，以腺病毒为载体介导HSV－tk基因结合GCV作用对肿瘤细胞有强杀伤性，是有应用前景的肿瘤基因治疗的一种疗法。

耶鲁大学BBS项目简介

为了培养未来生命科学研究的领袖,耶鲁大学对研究生培养方式做出了相应调整,建立了一个跨越传统学系边界的联合项目--"生物学和生物医学科学项目"(Biological & Biomedical Sciences,简称BBS).

不同干燥方法对莲蓬中原花青素量的影响

本研究旨在考察不同干燥方法对莲蓬中原花青素量的影响,确定其适宜的干燥方法。方法:采集金华武义莲蓬,用不同的干燥法进行干燥,测原花青素量,比较差异。结果:莲蓬中的原花青素含量受干燥方法影响较大,其中晒干法影响最大,阴干法次之,烘干法最小。结论:提取前的干燥处理宜采用烘干法或阴干法,而不宜直接于日光下暴晒。

压力蒸气对蚶体内HAV灭活效果观察

压力蒸气对蚶体内ＨＡＶ灭活效果观察上海市卫生防疫站２０００３１应蓓蓓，陆显新采用模拟污染甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的手段，将多次（或称反复）受到污染的毛蚶，制成罐头食品，经１２１℃／６０分钟或１２６℃／３０分钟压力蒸气对甲型肝炎病毒灭活（以下简称＂灭菌＂...

浅谈工程其他费用财务管理之实践

工程其他费用财务管理是工程项目管理的重要内容，根据其弹性空间大的特点，可作为向管理要效益的重要突破口。在国家电网公司强化工程财务全过程管控和推行工程成本精益化管理的背景下，笔者根据电网企业工程项目多年的财务管理经验，坚持理论联系实际，对工程其他费用包括项目法人管理费、政策处理费、职工培训费、提前进场费、工器具购置费等从精细化管理、流程化管理、闭环管理等方面深入浅出地阐述观点，认为其财务管理应当从预算管理、费用控制、财务分析、信息化管理、绩效考核等几方面开展工作，以保障其财务管理效果，控制工程造价，提升投入产出效果。

酶联免疫吸附试验检测甲型肝炎抗原

自从应用免疫电镜法(IEM)检测甲型肝炎抗原以来,其他灵敏检测技术如免疫粘附血凝试验(IAHA)、固相放射免疫试验(SPRIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等也相继建立,其中以ELISA检测甲型和乙型肝炎抗原和抗体较为简便、特异、灵敏。本文介绍ELISA检测甲型肝炎抗原,并与IEM和SPRIA进行比较。

二氧化氯灭活毛蚶体内HAV的实验研究

二氧化氯灭活毛蚶体内ＨＡＶ的实验研究上海市卫生防疫站２００３３５蒋家，姜培珍，郑春阳，应蓓蓓，诸文浩１９８８年受污染ＨＡＶ的毛蚶曾引起上海３０余万人罹患甲肝，为此，市政府明令禁止毛蚶上市。随着时间的推移，市民对其危害性的认识越来越淡漠，希望毛蚶重返餐...

生物制品中支原体污染的快速检测

用两步PCR法（NestedPCR）及DNA荧光染色技术（HoechstStaining），检测了国内部分生物制品研究所生产的81份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较．PCR阳性检出率为38．3％，Hoechst阳性检出率为19％．这些结果表明PCR法较Hoechst染色法更敏感，同时亦提示必须重视检测与控制国内生物制品的支原体污染问题．

腺病毒同源重组子的鉴定

携带入ＩＦＮ－γｃＤＮＡ序列的Ｅ１区缺失的腺病毒载体ｐＡｄ１２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ｐＪＭ１７质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染２９３细胞，经同源重组，共获得６个病毒噬斑．病毒噬斑感染２９３细胞，至出现完全细胞病变效应（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ，ＣＰＥ）后，抽提细胞内的病毒ＤＮＡ，经ＸｈｏⅠ酶切后走凝胶电泳，出现重组腺病毒特有的３．５ｋｂ大小的ＤＮＡ条带．３２Ｐ标记的探针ｐＡｄ１２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ＸｈｏⅠ酶切过的病毒ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交，显示出与预期相符的重组腺病毒特有的三条ＤＮＡ片段的杂交信号，大小分别约为３００ｂＰ、５００ｂＰ和３·５ｋｂ；同时，病毒感染人的２９３细胞培养液上清作ＰＣＲ检测，都扩增出ＩＦＮ－γｃＤＮＡ和腺病毒ＤＮＡＥ２Ｂ区特异的两条ＤＮＡ条带，证实这６个病毒噬斑均为带有ＩＦＮ－γ的重组腺病毒．

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ，ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９，ＬＡＸ，ＳＰＣ，ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用，但杀伤效果有很大差别；就Ａ５４９而言，ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”，即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后，后者也明显地遭到杀伤．

人新基因ADAM29功能的初步分析

ＡＤＡＭ家族是一类具有去整合素域和金属蛋白酶域的Ⅰ型跨膜蛋白，广泛参与各种重要的生理过程，如精卵结合、神经系统发育、成肌细胞融合以及炎症反应等．ＡＤＡＭ２９是一个新发现的人类基因，它特异性地表达于人睾丸组织中，包含一段潜在的融合蛋白域．用ＰＣＲ方法克隆了其全长ｃＤＮＡ，并比较分析了在哺乳动物睾丸组织中专一表达的ＡＤＡＭ家族成员的氨基酸顺序．此外，以ＡＤＡＭ２９的一个肽段（Ｌｅｎ２６８～Ａｓｐ３７４）制成融合蛋白后作为抗原制备多克隆抗体．人睾丸组织切片免疫组织化学的检测结果表明，ＡＤＡＭ２９分布于多种细胞内，但主要集中于间质细胞，因而推测ＡＤＡＭ２９可能与信号传导有关．