TAIL-PCR方法快速分离Xcc致病相关基因序列

以mini Tn5gfp km转座子中nptII片段作为探针 ,对已获得的五株野油菜黄单胞菌野油菜黑腐病致病型(Xcc)非致病突变体进行了Southernblot分析 ,结果表明 ,这五株突变体确由mini Tn5gfp km转座子插入致病相关基因所致 ,且为单拷贝不同位点的插入。提取这五株突变体总DNA作为模板 ,采用改进的热不对称交错PCR (TAIL PCR)方法从其中克隆到了各自转座子插入区侧翼序列 ,对这些侧翼序列进行了序列测定并将分析结果与GenBankdatabase及Xcc全基因组序列做了比较 ,结果表明 ,五个侧翼序列所在的基因确与Xcc致病性有关。这种改进后的TAIL

表达流行性感冒病毒HA基因非复制型重组腺病毒的构建及免疫效果的研究

通过RT PCR扩增流行性感冒(流感)病毒HA基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack CMV,该重组质粒与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。PCR证实HA基因已整合至腺病毒基因组中,Westernblot结果检测到重组病毒感染293细胞中HA的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶10000和1∶1000。除血清IgG外,还在肺灌洗液中检测到分泌型IgA。滴鼻组的免疫效果强于灌胃组。经小剂量攻毒实验显示,重组腺病毒保护率为100%。该文成功构建了表达流感病毒HA基因的非复制型重组腺病毒,重组病毒免疫小鼠可产生较好的免疫效果。

表达流感病毒神经氨酸酶基因的重组腺病毒的构建

通过RT-PCR方法扩增流感病毒神经氨酸酶基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pTrackCMV,此重组质粒与腺病毒DNA共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。经PCR证实目的基因已整合至腺病毒基因组中,western blot检测到神经氨酸酶的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果表明2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答反应,滴鼻组的免疫效果优于灌胃组。

微型电动汽车覆盖件整体一次成型技术的研究

分析了冲压技术和吸塑技术的缺陷,介绍了滚塑成型的原理和优点。经过对滚塑工艺参数和滚塑过程的研究,利用四固定转臂滚塑设备,实现了微型电动汽车内、外覆盖件的整体一次成型。

一次成型轻量化车身的关键技术研究

以开发轻量化车身为目的,应用车身优化设计方法及理论设计了整体一次成型的塑料车身.有限元分析结果显示,该车身的振动频率偏低,为此从结构、材料等方面提出了一系列改进措施.通过多次滚塑试验与正交分析,获得了理想的主副轴转速比、加热时间与温度、冷却方式及时间等工艺参数.检测结果表明,在这种工艺条件下成型的车身轻量化效果显著,并能满足中低速行驶的使用要求.

整体成型轻量化车身及其滚塑工艺研究

基于滚塑工艺的原理,设计了两种不同结构的整体成型轻量化车身。根据振型分析和强度分析的数据,确定了性能更优的双层车身结构;选用流动性能好的轻质原料聚乙烯LLDPE,控制合理的加热温度、时间等参数,选择合适的冷却方式并配以保温、保压等措施,实现车身整体成型。经检测,该车身轻量化效果显著并能满足使用要求。

重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达人乳铁蛋白的研究

目的 在保持生物学活性的前提下 ,实现人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达。方法 从人外周血中分离中性粒细胞 ,提取总RNA ,RT PCR方法获得人乳铁蛋白前体全长cDNA序列 ,适当改造后克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPIC 3 5K上并转化酵母宿主KM71,双层滤膜法筛选高表达株进行补料分批发酵 ,对发酵产物的理化及生物学活性进行初步检测。结果 筛选到一株人乳铁蛋白表达量较高的重组巴氏毕赤酵母p3 5 k 7并对其进行了补料分批发酵。整个发酵历时约 9d ,菌浓吸光度A6 0 0 值最高达到 2 6 0以上 ,重组人乳铁蛋白最高表达量为 115mg L ,是摇瓶培养条件下的 7 6 7倍。结论 成功实现了人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达 ,并对发酵参数的优化进行了初步探索。

一次成型整体车身的轻量化

在采用复合材料HDPE的车身设计中,本文提出了一次成型轻量化车身设计及制造工艺技术,并运用CAE软件建立了车身的三维实体模型和有限元前处理模型,利用Abaqus软件对所设计的车身进行了强度分析和模态分析,验证了车身的强度和振动要求。通过多次滚塑成型试验,获得了适宜的加热温度与时间、冷却方式与时间和主副轴速比等工艺条件,车身检测符合设计要求。研究结果表明:采用滚塑成型工艺生产的车身轻量化效果明显,符合中低速汽车车身的使用要求。