内皮素-3对羊驼黑色素细胞特征及细胞内毛色基因表达的影响

为了研究内皮素-3(Endothelin-3,EDN3)对羊驼皮肤黑色素细胞内毛色形成相关基因的影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度(0、10-9、10-8、10-7 mol·L-1)的EDN3,通过MTT法、紫外分光光度法、qRT-PCR和Western blotting技术分别检测黑色素细胞活力、黑色素产量、相关基因和蛋白(包括内皮素受体B(Endothelin receptor B,EDNRB)、KIT、小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcriptionfactor,MITF)和酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR))的表达情况。结果表明,在羊驼皮肤黑色素细胞添加EDN3 72h后,黑色素细胞呈双树突或三树突状,且细胞数量明显增加;在添加适当浓度10-8 mol·L-1时,细胞具有明显的增殖,细胞内EDNRB、KIT、MITF和TRY在转录水平和蛋白水平的表达量被上调,黑色素细胞产生黑色素的量也被上调,且与对照组相比,差异显著(P<0.05)。EDN3对羊驼黑色素细胞内黑色素的产生具有重要的调节作用。

Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达与定位

【目的】研究生长分化因子9(growth differentiation facter9,GDF9)的潜在靶蛋白Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达与定位,探索Claudin-11对促进卵泡发育、调节排卵的作用机理。【方法】以成年雌性羊驼为研究对象,用RT-PCR技术分析潜在靶蛋白Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达,并使用实时荧光定量PCR技术分析其相对表达量,采用免疫组织化学法和western blotting法对Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达进行定位分析。【结果】荧光定量PCR结果显示,Claudin-11在羊驼卵巢的初级卵泡中弱表达于次级卵泡;westernblotting结果显示,多克隆兔抗Claudin-11抗体与成年羊驼卵巢组织粗提取物可以发生特异性的免疫反应;免疫组织化学试验结果显示,Claudin-11在羊驼卵巢的原始卵泡和次级卵泡中弱表达于卵泡细胞周围的扁平或立方形卵泡细胞的胞质,而在次级卵泡中Claudin-11在最内层颗粒细胞的胞质中进行表达。【结论】Claudin-11在成年羊驼卵巢组织中表达且存在特异性的细胞定位。

内皮素-2促进体外培养的绵羊皮肤黑色素细胞增殖及黑色素生成

内皮素(endothelin,ET)及其受体在黑色素细胞成熟分化时起着有效的促进作用.然而,内皮素-2(ET-2)在黑色素生成的作用方面,还处于争论中或报道不一致.在此,我们研究ET-2对体外培养的绵羊皮肤黑色素细胞增殖和黑色素生成的影响.比较实验组ET-2(1,10,100 nmol/L)与空白对照组,通过MTT法和Ando等的方法检测出黑色素细胞的增殖率和黑色素含量显著增加.荧光定量PCR和Western印迹分别检测出内皮素受体B(Bdnrb);酪氨酸激酶受体(Kit);酪氨酸酶(Tyr);酪氨酸相关蛋白-1(Tyrp-1)基因的mRNA水平及蛋白水平的相对表达量显著增加.这些数据表明,ET-2可能促进绵羊的皮肤黑色素细胞增殖和黑色素生成.