一个两次妊娠外生殖器畸形胎儿家系的临床遗传学分析

目的明确一个两次妊娠外生殖器畸形胎儿家系的遗传病因,为有效遗传咨询提供依据。方法对引产胎儿进行脐血染色体核型分析、超声检查、尸体解剖,以及CYP21A2基因突变检测并验证变异来源。结果脐血染色体核型为46,XX,inv(9)(p11q13),超声检查提示胎儿外生殖器畸形,肾上腺增大,尸检结果与超声检查一致,病检提示儿肾上腺皮质微囊性增生。CYP21A2基因突变检测结果提示引产胎儿存在30 kb大片段纯合缺失,其父母均为携带者。该基因同时检测到11个纯合变异,分别为c.92C>T(p.P31L),c.293-13C>G,c.332_339del8(p.G111Vfs*21),c.518T>A(p.I173N),c.710T>A(p.I237N),c.713T>A(p.V238E),c.719T>A(p.M240K),c.844G>T(p.V282L),c.923dupT(p.L308Ffs*6)、c.955C>T(p.Q319*)和c.1069C>T(p.R357W),这些变异遗传自胎儿的父亲和母亲,提示CYP21A2基因30 Kb纯合缺失形成CYP21A1P/CYP21A2嵌合基因,从而导致CYP21A2基因失活。结论CYP21A2基因突变是21-羟化酶缺乏症的致病原因,导致该家系两次妊娠外生殖器畸形胎儿。联合脐血染色体核型分析、产前超声检查以及尸体解剖验证,运用合适的遗传基因检测方案,明确了遗传病因,为该家系的遗传咨询和产前诊断提供了重要依据。

染色体微阵列用于胚胎停育及自然流产原因的筛查

孕早期胚胎停育及自然流产的发生率超过1%[1],严重影响患者的身心健康。辅助生殖技术(ART)虽然大大提高了妊娠率,但60%以上受术者发生自然流产和胚胎停育,查明原因对提高妊娠率及预防自然流产意义重要。尽管造成胚胎停育及自然流产的因素很多且存在诸多争议,但染色体异常是多数学者认可的最主要原因[2]。染色体异常检测常采用绒毛细胞培养染色体G显带核型分析技术,但分辨率和敏感度较低,漏检率和误检率较高。

Ⅲ型Bartter综合征一家系遗传学分析和产前诊断

目的联合运用多种遗传学技术对1例Ⅲ型Bartter综合征家系进行致病突变分析和产前诊断。方法应用高通量捕获测序技术、MLPA、PCR-Sanger测序法对先证者进行Bartter综合征相关致病基因的检测及家系分析;明确遗传学病因后对已妊娠4个月的先证者母亲抽取羊水应用MLPA、PCR-Sanger测序法进行产前诊断。结果先证者CLCNKB基因存在c.del1389(A)纯合突变合并1-18号外显子杂合性缺失。家系分析显示这两种突变分别源自父亲和母亲。产前诊断结果显示胎儿与先证者基因型一致。结论 CLCNKB基因的c.del1389(A)纯合突变合并1-18号外显子杂合性缺失为先证者的病因,产前诊断可以预防该家系Bartter综合征患儿的再次出生。

5号染色体三体、嵌合三体及单亲二体的临床特征综述

5号染色体属于亚中着丝粒染色体,通常可因亲代生殖细胞减数分裂后期同源染色体不分离,或减数分裂末期和有丝分裂后期姐妹染色单体不分离导致三体或嵌合型三体。完全型5号染色体三体、嵌合型三体及单亲二体[uniparental disomy 5,UPD(5)]无论是在产前胎儿还是活产儿中均是极罕见的。在胚胎发育的不同时期及活产儿生长发育过程中,5号染色体异常的发生时间、发生部位、发生率所导致的临床结局存在异质性,表型可从正常到严重异常。本综述结合既往的文献报道及本单位的数据,对完全型5号染色体三体、嵌合型5号染色体三体、5号染色体单亲二体的产生机制、发生率、临床表型、相关治疗、预后及再发风险等进行总结,以期对5号染色体产前遗传学诊断及遗传咨询提供帮助。

SNP array技术用于先天性心脏病胎儿产前诊断的研究

目的探讨单核苷酸多态性微阵列分析(SNP array)技术在先天性心脏病(CHD)胎儿产前诊断中的价值。方法收集2015年5月至2018年5月于湖南妇幼保健院就诊并通过超声诊断为CHD的胎儿679例。其母亲进行羊膜腔穿刺术或脐血穿刺术,进行常规染色体核型分析,并留取10 ml羊水或2 ml脐血,提取胎儿DNA进行全基因组SNP array检测。结果(1)677例检测成功的胎儿的全基因组SNP array结果显示,577例(85.2%,577/677)未发现基因拷贝数变异(CNV);32例(4.7%,32/677)为三体或单体;68例(10.0%,68/677)存在CNV,其中13例为良性CNV,24例为致病CNV,31例为临床意义不明确的CNV(VOUS)。(2)在完成染色体核型分析的492例胎儿中,SNP array检测对CNV的检出率为13.8%(68/492),显著高于染色体核型分析(3.0%,15/492)。结论SNP array检测可提高CHD胎儿遗传学病因的检出率。对于产前发现的CHD胎儿,建议进行遗传学检查,有助对不同综合征的CHD进行鉴别,从而可判断胎儿的预后。

单绒毛膜双羊膜囊双胎之一为45,X/46,XX嵌合体的产前诊断

目的探讨单绒毛膜双羊膜囊双胎的产前筛查及产前诊断,以及单绒毛膜双羊膜囊双胎之一为嵌合体的形成机理。方法对无创产前筛查提示性染色体异常单绒毛膜双羊膜囊双胎行羊膜腔穿刺,之后对未培养的羊水进行荧光原位杂交检测和单核苷酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism-array, SNP-array),对细胞培养的羊水行G显带核型分析。结果G显带核型胎儿1为46,XX,胎儿2为mos 45,X[11]/46,XX[26]。荧光原位杂交、SNP-array分析显示胎儿2为特纳氏综合征嵌合体,嵌合比约为30%。芯片SNP位点分析证实合子的性质为单绒毛膜双羊膜囊。结论单绒毛膜双羊膜囊双胎在无创性产前检测异常时,建议分别从两个羊膜腔中抽取羊水进行产前诊断,以发现双胎染色体核型不一致的情形。确定45,X/46,XX特纳氏综合征的嵌合比例可为产前遗传咨询提供有价值的信息。

神经发育障碍420例遗传病因学分析

目的探讨神经发育障碍(NDD)患儿的遗传学病因,为其遗传咨询、家庭的再发风险评估及产前诊断提供理论依据。方法根据NDD的诊断标准,收集2016年1月至2018年12月来湖南省妇幼保健院小儿康复科就诊的420例NDD患儿,行染色体核型分析和染色体微阵列(CMA)分析。结果420例NDD患儿中,14例(3.33%,14/420例)染色体异常,均为全面性发育迟缓/智力障碍(GDD/ID),其中13例通过进一步CMA明确了染色体断裂点位置和缺失或重复的片段范围;共在61例(14.52%,61/420例)患儿中发现致病性拷贝数变异(CNVs)。在这些致病性CNVs中,包括已知的综合征31例(50.82%,30/61例),涉及Angelman/Prader-Will综合征(8例)、Williams综合征(3例)、Phelan-McDermid综合征(3例)等16种综合征以及30例具有临床意义的致病性CNVs。另外还结合荧光原位杂交技术(FISH)诊断了1个因10q26与12p13隐匿性重排引起的智力低下家系。结论染色体异常和基因组相关的微缺失重复是NDD患儿重要的遗传学病因,联合应用核型分析、CMA和FISH技术可为NDD患儿提供明确的病因诊断,对患儿的治疗及其父母再生育指导具有重要临床意义。

一个MECP2重复综合征家系的遗传学病因分析

目的对1个以智力发育落后、肌张力低下为主要表现的家系进行遗传学分析,明确其遗传学病因。方法抽取该家系两例男性患者及其家系成员的外周血,提取基因组DNA;先对1例患儿行拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq),然后用荧光定量PCR验证重复片段;随后对另1例患者及其家系成员行CNV-seq或单核苷酸多态性徽阵列(single nucleotide polymorphism array,SNP array)检测。结果2例男性患者均表现为严重肌张力低下,运动、智力发育落后,特别是语言发育障碍。CNV seq及SNP array分析结果提示2例男性患者存在染色体Xq28重复,片段大小分别为0.26 Mb及0.42 Mb,重复区间内包含MECP2基因,确诊为MECP2重复综合征,CNV seq验证显示先证者母亲及一姐均存在Xq28区域重复,为MECP2重复女性携带者,1名正常男性家系成员不携带Xq28区域重复。结论染色体Xq28区域重复可能为该家系智力发育落后、肌张力低下患者的遗传学病因,确诊为MECP2重复综合征。

一例智力低下伴尿道下裂患儿的遗传学分析

目的对1例智力低下患儿进行遗传学诊断,明确其病因并为家系的遗传咨询和产前诊断提供依据.方法应用单核苷酸多态微阵列芯片(single nucleotide polymorphism-based arrays,SNP-array)对患儿及其父母行基因组DNA扫描分析,结合G显带核型分析及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)确诊患儿染色体异常片段的来源.结果SNP-array芯片检测显示患儿在2q33.3q36.3区间存在25.7Mb的重复,综合G显带核型分析和FISH检测提示患儿母亲核型为46,XX,ish ins(11;2)(p15;q33q36),患儿携带1条由母亲近2q和11p末端插入易位形成的11号衍生染色体,核型为46,XY,ish der(11)ins(11;2)(p15;q33q36)mat.结论通过SNP-array、G显带和FISH技术诊断本家系的插入易位,明确了患儿病因,为家系的遗传咨询和产前诊断提供了依据.

羊水细胞胎儿性染色体异常387例分析

目的分析产前诊断羊水细胞中胎儿性染色体异常的构成情况。方法回顾2017年1月到2020年12月在湖南省妇幼保健院行孕中期羊膜腔穿刺术的12164例孕妇的临床资料,对其中确诊为性染色体异常胎儿的染色体核型和染色体微阵列分析等遗传学检测结果进行描述性统计分析。结果(1)在12164例孕妇中,检出387例(3.2%)胎儿性染色体异常,包括351例染色体核型异常和36例性染色体微缺失/微重复。(2)以无创产前检测性染色体高风险为指征的性染色体异常占比最高(74.2%,287/387),之后依次为其他超声异常(8.5%,33/387)、唐氏综合征筛查高风险(7.0%,27/387)、高龄(4.7%,18/387)、不良孕产史(3.3%,13/387)和颈项透明层增厚或颈部淋巴水囊瘤(2.3%,9/387)。(3)351例染色体核型异常包括数目异常(257例,73.2%)、嵌合体(66例,18.8%)和结构异常(28例,8.0%)。染色体数目异常以47,XXY[46.7%(120/257)]最多,嵌合体以45,X/46,XX[48.5%(32/66)]最多,结构异常以X染色体缺失[39.3%(11/28)]最多。36例性染色体微缺失/微重复中,15例(41.7%)为致病性,7例(19.4%)为良性,14例(38.9%)临床意义未明。15例致病性拷贝数变异的片段大小[M(min~max)]为1.68 Mb(0.37~9.20 Mb),其中14例为X染色体微缺失/微重复。9例微缺失中的7例为Xp22.31区域缺失。结论羊水性染色体异常主要为性染色体数目异常,另有部分为嵌合体和染色体结构异常。

复杂先天性心脏病、多指/趾畸形综合征家系的遗传学分析

目的对1例两次超声提示胎儿复杂先天性心脏病、多指/趾的病例进行遗传学诊断,探讨其发病机制,为遗传咨询及指导生育提供依据。方法应用全外显子测序及Sanger测序验证对该家系进行遗传学诊断。结果单核苷酸多态性微阵列分析未发现致病性拷贝数变异。全外显子测序及Sanger测序验证证实胎儿携带WDPCP基因c.552_553del和c.76-2A>C复合杂合变异,分别来自其父亲和母亲。结论全外显子测序技术在产前超声异常胎儿的诊断中具有重要的临床价值,可为遗传咨询及指导生育提供依据。

利用尿液细胞诱导建立血友病A患者特异性多潜能干细胞

目的通过逆转录病毒方法诱导建立两例血友病A（hemophiliaA，HA）患者特异性诱导多潜能干细胞（induciblepluripotentstemceils，iPSCs）并定向分化为内皮细胞，为HA的发病机制以及细胞和基因治疗研究提供理想的细胞来源。方法收集培养血友病A患者尿液细胞，使用携带Oct4、Sox2、c—Myc和Klf4等4种因子的逆转录病毒感染尿液细胞，诱导出HA患者特异性的诱导多潜能干细胞；通过形态学、干细胞多潜能表面标志物免疫荧光检测，成畸胎瘤实验鉴定iPSCs；iPSCs与0P9细胞共培养分化为内皮细胞。结果成功建立了HA患者特异性iPSCs，其形态与人胚胎干细胞相似，细胞表面标志物免疫荧光检测均符合干细胞基因表达特征，成畸胎瘤实验显示其可在体内随机分化为三胚层组织；将iPSCs定向分化为内皮细胞，细胞表面标志物CD144、CD31、vWF免疫荧光均为阳性。结论尿液细胞可以重编程得到血友病A患者特异性iPSCs，并能定向分化为内皮细胞，为血友病A研究提供细胞模型，也为后续基因修正后的细胞治疗提供了自体化的细胞来源。

一例新发21q22.12q22.13微缺失智力障碍患儿的分子遗传学研究

目的明确1例智力障碍、癫痫患儿分子遗传学病因,为该家系成员提供遗传咨询及产前诊断。方法应用染色体G显带核型分析、单核苷酸多态性微阵列及荧光实时定量PCR对患儿及家系成员进行遗传学检查。结果患儿外周血染色体核型显示为46,XX;单核苷酸多态性微阵列显示为arr[19]21q22.12q22.13(36 860 195~38 801 482)×1 dn,杂合缺失约1.9 Mb,包含DYRK1A、PIGP、HLCS、CLDN14四个致病基因;定量PCR检测结果显示:患儿DYRK1A基因第1外显子杂合缺失;父母及胎儿检测结果均未发现异常。结论应用单核苷酸多态性微阵列技术,明确了1例21q22微缺失患儿遗传学诊断,并为该家系成员提供了准确的产前诊断;为DYRK1A基因单倍体剂量不足可导致一种新的可被识别的综合征提供了新的依据;PIGP基因可能是导致早发性难治性癫痫的重要因素,但具体的致病机制仍需进一步的探究。

4例胎儿心脏多发横纹肌瘤表型基因型及文献回顾

目的初步研究本地区心脏多发横纹肌瘤胎儿的疾病表型与基因型,指导该类出生缺陷防控。方法收集4例胎儿心脏多发横纹肌瘤临床表型,对胎儿进行高通量测序检测及其他相关检查,明确致病基因型。结果 4例心脏多发横纹肌瘤胎儿均为TSC2基因致病或可疑致病突变所致:1例胎儿为已报道错义新生突变; 1例胎儿为已报道三碱基缺失整码突变,遗传自无明显表型父亲; 1例为新发单碱基缺失移码致病新生突变; 1例为新发错义可疑致病新生突变。结论导致胎儿发生心脏多发横纹肌瘤的主要病因为结节性硬化症,而TSC2基因是最常见的致病基因。