奶牛α_s-酪蛋白多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

本试验旨在制备高纯度和特异性的奶牛αs-酪蛋白多克隆抗体,为鉴定奶牛乳腺合成的αs-酪蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,每2周免疫1次奶牛αs-酪蛋白,待血清达到抗体效价后,对兔进行颈动脉放血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。结果表明,经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高的抗体,同时可以特异性结合奶牛αs-酪蛋白。本试验制得的抗体可以用于鉴定奶牛乳腺合成的αs-酪蛋白,为进一步研究奶牛αs-酪蛋白合成的调控提供了有效的科研材料。

奶牛α-酪蛋白抗体纯化方法的比较及其优化

本研究比较了盐析法和亲和层析法以及两种方法相结合纯化兔抗奶牛α-酪蛋白抗体的效果。试验以兔抗奶牛α-酪蛋白血清为材料,先分别用饱和硫酸铵盐析、蛋白A树脂亲和层析及两种方法相结合进行纯化,然后通过SDS-PAGE检测纯化后的抗体纯度。结果表明,蛋白A树脂纯化抗体的效果优于饱和硫酸铵法,两种方法相结合的纯化效果最佳且延长了蛋白A树脂的使用寿命,Western Blot检测发现纯化后的抗体能够特异性结合奶牛α-酪蛋白。

生长激素和胰岛素样生长因子Ⅰ对奶牛乳蛋白合成关键激酶及调节因子mRNA表达量的影响

本试验旨在探讨生长激素(GH)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞内调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子mRNA表达量的影响。试验对纯化后的荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行4种处理,对照组采用无血清生长培养基,试验组在对照组的基础上分别添加GH(100 ng/mL)、IGF-Ⅰ(100 ng/mL)和GH(100 ng/mL)+IGF-Ⅰ(100 ng/mL)。培养24 h后,采用实时定量PCR(RT-qPCR)法测定κ-酪蛋白基因以及调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子的mRNA表达量,并测定生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)mRNA表达量。结果表明:体外培养的奶牛乳腺上皮细胞可以表达GHR和IGF-ⅠRmRNA,各试验组均能显著提高κ-酪蛋白(CSN3)mRNA表达量(P<0.05),但未发现GH和IGF-Ⅰ复合存在累积效应;与对照组相比,GH组有提高E74-样转录因子5(ELF5)mRNA表达量的趋势(P<0.10),而IGF-Ⅰ组显著提高了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核糖体蛋白S6激酶1(rpS6K1)mRNA表达量(P<0.05),GH+IGF-Ⅰ组未呈现加强作用。结果提示,GH和IGF-Ⅰ可能单独通过影响调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子mRNA表达来调节κ-酪蛋白的合成。

胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成调节机理的研究

本文旨在通过在培养液中添加不同浓度胰岛素(INS),研究其对奶牛乳腺上皮细胞中αs1-酪蛋白(CSN1S1)基因、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路及Janus激酶-信号传导和转录活化因子(JAK-STAT)信号通路相关基因表达的影响。试验选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在无血清无激素的培养基中分别添加0(对照)、2.5、25.0、250.0、5 000.0ng/mL INS,利用实时荧光定量PCR方法检测CSN1S1基因、mTOR和JAK-STAT信号通路中相关基因表达量。结果表明:与0ng/mL组相比,添加不同浓度的INS后均能提高CSN1S1、短型催乳素受体(S-PRLR)及mTOR信号通路中上游蛋白激酶B(PKB)、mTOR和下游真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)基因表达量,并且能够增加JAK-STAT信号通路中Janus激酶2(JAK2)和信号转导和转录激活因子5A(STAT5 A)基因表达量,当INS浓度为25.0ng/mL时各正向调节基因表达量最高。此结果提示,添加外源INS能提高奶牛乳腺上皮细胞CSN1S1基因表达量,其作用机理:一是添加INS后能够促进激素受体基因的表达,进而促进转录的启动;二是促进乳蛋白合成的mTOR和JAK-STAT信号通路中各正向调节基因的表达,进而使CSN1S1等乳蛋白合成基因能高水平表达,为进一步通过翻译水平增加乳蛋白的合成奠定了物质基础。

胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白和胰岛素受体基因表达的影响

本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白(CSN3)和胰岛素受体(INSR)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在以无血清无激素的生长培养基为对照的基础上,分别添加胰岛素5、50、500和5 000 ng/mL,测定CSN3和INSR基因表达量以及CSN3相对含量的变化。结果表明:1)胰岛素能够促进乳腺上皮细胞的增殖,其中5～500 ng/mL的胰岛素促增殖作用较好。2)胰岛素能提高乳腺上皮细胞CSN3、INSR基因表达量和CSN3相对含量,50 ng/mL组CSN3基因表达量和CSN3相对含量均显著或极显著高于对照组(P<0.01)以及5(P<0.01)、500(P<0.01)和5 000 ng/mL组(P<0.05),INSR基因表达量显著或极显著高于对照组(P<0.05)以及500(P<0.05)和5 000 ng/mL组(P<0.01)。结果提示,随着胰岛素浓度的增加,CSN3和INSR基因的表达量及CSN3相对含量均呈先增加后下降的趋势,50 ng/mL时最高,而高浓度(5 000 ng/mL)的胰岛素不利于奶牛乳腺上皮细胞合成乳蛋白。

甜菜碱在反刍动物生产中的应用

本文就甜菜碱的生理功能及其对反刍动物生产性能、瘤胃发酵及能量代谢的影响作一综述。

沙棘的生物活性成分分析及在养鸡业中的应用

沙棘（Hippophaerhamnoides）为胡颓子科酸刺属的灌木或小乔木，又称为醋柳、黑刺等。沙棘的营养价值较高，含有丰富的蛋白质、矿物质、微量元素、维生素等营养物质，以及有机酸、黄酮类、多酚类以及萜类等生物活性化合物，具有天然药物的功能。且大量研究表明，饲料中添加沙棘叶或沙棘提取物可促进畜禽生长、提高畜禽生产性能和饲料利用率、促进免疫器官生长发育，同时沙棘提取物对动物无蓄积性毒害，长期饲喂安全可靠。此外，沙棘具有适应性强、产量高的特点，据估测，我国每年可利用沙棘枝、叶总产量为40万吨，因此，沙棘是一种值得开发的植物性绿色添加剂。

甜菜碱在反刍动物生产中的应用

甜菜碱作为一种饲料添加剂,因具有促进动物生长、调节脂肪代谢、改善胴体品质、提高饲料适口性等功效,目前已被广泛应用于猪、禽类及鱼类养殖生产中。虽然目前甜菜粕或甜菜渣已被广泛应用于反刍动物饲料中,但直接饲喂其活性物质甜菜碱的相关研究较少,使用效果尚不明确。因此,本文对甜菜碱在反刍动物生产中的应用效果及作用机制加以综述,以期促进甜菜碱在反刍动物生产中的开发利用。

挤奶频率对奶牛生产性能的影响

文章介绍了挤奶频率对奶牛泌乳性能、繁殖性能、健康与福利等方面的影响。

葎草饲料资源的开发及在畜牧生产中的应用

葎草是一种丰富的植物资源，富合律草多糖、黄酮类、生物碱类等多种生物活性成分。这些活性成分会对动物的生长性能、免疫机能及产品品质产生很大的影响，且獐草具有产量高、适应性强、营养价值高等特点，适合作为新型饲料资源。因此本文就律草的生物活性成分、捧草在动物生产中的应用及其开发利用作一综述，以期促进新型饲料资源的开发，节约现有饲料资源。

牛奶和婴儿配方奶粉中三聚氰胺筛选和定量方法——ELISA,HPLC-UV,GC-MS和LC-MS/MS的验证和测定效果(三)

3．1.2HPLC—UV法工作特性 学者们提出了几种用HPLC—UV定量测定三聚氰胺的方法（lshiwata，

牛奶和婴儿配方奶粉中三聚氰胺筛选和定量方法——ELISA,HPLC-UV,GC-MS和LC-MS/MS的验证和测定效果(四)

3．4LC—MS／MS法工作特性 一个简单样本的前处理限用于权衡在乙腈／水介质中的样本含量，然后通过蛋白质沉淀，用单一容器进行进一步的稀释，

细节管理在冠心病介入诊疗工作中的作用

管理就是设计和维持一种环境,使集体工作的人们能够有效地完成既定目标的过程。管理由一个个细节组成,是细节在时间上的延伸和空间上的拓展。所以管理必须重视细节[1]。千里之堤毁于蚁穴,说的是不重视细节将酿成大祸,在医疗护理工作中尤是如此。一个科室,一个医院,

炙甘草汤加减联合耳穴压豆治疗气阴两虚型失眠的临床分析

目的探讨炙甘草汤加减联合耳穴压豆疗法对气阴两虚型失眠症患者的临床疗效。方法选取2020年7月—2021年11月该院收治的符合气阴两虚型失眠患者50例,随机分为治疗组和对照组。对照组予艾司唑仑片,治疗组在对照组基础上加用炙甘草汤加减联合耳穴压豆进行治疗,持续治疗4周,分析治疗前后及停药后2周患者的、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、焦虑抑郁量表(SAS)、生活质量问卷(SF-36)及中医症候积分、不良反应发生情况。结果治疗后、停药后2周,治疗组患者的PSQI各项评分及总分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者治疗总有效率[96.00%(24/25)]高于对照组[68.00%(17/25)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.878,P<0.05)。治疗后、停药后2周,治疗组患者的SAS评分、中医症候积分均低于对照组,SF-36评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组和对照组患者的不良反应发生率分别为4.00%(1/25)、20.00%(5/25),差异无统计学意义(χ^(2)=1.705,P>0.05)。结论气阴两虚型失眠治疗中炙甘草汤加减联合耳穴压豆治疗的临床效果好。

牛奶和婴儿配方奶粉中三聚氰胺筛选和定量方法的验证及测定效果(一)

近年来在中国发生了向宠物食物和婴儿配方奶粉中添加三聚氰胺这种富含氮的极性化合物的事件。这些事件促使了分析多种食品和原料中三聚氰胺及相关化合物的分析方法的建立。从高度精密的色谱质谱联用仪到选择性免疫试验,这些方法的建立主要集中在筛选和定量2个目的上。本问主要研究了2种筛选方法和2种定量方法。筛选方法是酶联免疫吸附测定(ELISA)和液相色谱法联合紫外线(HPLC-UV)检测,而定量方法是气相色谱质谱联用(GC-MS)和液相层析串联质谱(LC-MS/MS)分析技术。本文的试验得到了4种方法的效果和测定数据以及以国内和欧洲的测定效果为体系的结果,这些方法有助于牛奶及以牛奶为原料的婴儿配方奶粉中三聚氰胺及相关化合物的测定。

亮氨酸对乳蛋白合成影响及其机制的研究

该研究旨在探讨其他氨基酸缺乏条件下补充亮氨酸对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞κ-酪蛋白基因表达和κ-酪蛋白合成的影响以及细胞增殖的影响,并从m RNA水平探究了m TOR信号通路介导的乳腺上皮细胞内蛋白质合成的重要性。为创造细胞氨基酸缺乏环境,将DMEM/F12培养基稀释100倍作为对照组,处理组1在对照组的基础上补充亮氨酸,处理组2在处理组1的基础上添加对m TOR信号通路上游PI3K起抑制作用的LY294002抑制剂,分别采用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫法测定基因的相对表达量和蛋白合成量,采用CCK-8法测定细胞增殖。结果发现,在其他氨基酸缺乏的条件下,单独的亮氨酸显著促进了κ-酪蛋白基因表达和κ-酪蛋白合成,而添加抑制剂极显著降低了亮氨酸的这种作用;蛋白质合成信号通路相关的基因m TOR、S6K1、e IF4E、e EF2相对表达量均以处理组1最高,处理组2最低,但除了e EF2基因外,其他基因在各组间差异不显著;4EBP1的基因以处理组1最高,对照组最低;补充亮氨酸没有显著促进乳腺上皮细胞增殖,但添加抑制剂可显著抑制细胞增殖。结果表明,在其他氨基酸缺乏的条件下给奶牛乳腺上皮细胞单一补充亮氨酸能显著促进κ-酪蛋白的合成,这种作用可能与m TOR信号通路介导蛋白质合成有关,此外,研究也表明m TOR信号通路可调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖。

牛奶和婴儿配方奶粉中三聚氰胺筛选和定量方法的验证及测定效果(二)

▲接本刊2012年第4期2.6LC-MS/MS前人已对LC-MS/MS的样本前处理、仪器条件以及定量方法有过描述（Desmarchelier,Guillamon Cuadra,Delatour＆Mottier,2009）。这种同位素稀释的LC-MS/MS法是通过同时测定CM和MBPIF中的三聚氰胺和三聚氰酸来加以验证的,并通过这种方法来进行效果检测。

活血化瘀法治疗顽固性咳嗽53例

[目的]观察活血化瘀法治疗顽固性咳嗽疗效。[方法]将105例分为两组,治疗组53例,以血府逐瘀汤合止咳散治疗;对照组52例,以止咳散为基本方。[结果]治疗组痊愈17例,显效28例,有效7例,无效1例;对照组痊愈10例,显效23例,有效19例,无效0例。[结论]治疗组明显优于对照组。

亮氨酸对κ-酪蛋白合成的影响及相关信号通路的研究

本研究旨在探讨其他氨基酸缺乏条件下补充亮氨酸对奶牛乳腺上皮细胞κ-酪蛋白基因表达和蛋白合成以及细胞增殖的影响,并从mRNA水平探究mTOR信号通路介导的蛋白质合成的重要性。处理组1在对照组(稀释100倍的培养基)的基础上补充亮氨酸,处理组2在处理组1的基础上添加mTOR信号通路上游抑制剂,分别采用RT-qPCR技术和ELISA法测定基因的相对表达量和蛋白合成量,CCK-8法测定细胞增殖。结果表明:亮氨酸显著促进了κ-酪蛋白基因表达和蛋白合成(P<0.05),而添加抑制剂极显著降低了这种作用(P<0.01);各处理对蛋白质合成信号通路相关基因mTOR、S6K1、4EBP1、eIF4E、eEF2相对表达量均有一定影响;抑制剂能显著抑制细胞增殖(P<0.05)。结果提示,补充亮氨酸能显著促进κ-酪蛋白的合成,这可能与mTOR信号通路介导蛋白质合成有关,此外,mTOR信号通路也可调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖。

广西茉莉花叶总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究

利用茉莉花叶植物资源,避免资源浪费,探讨茉莉花总黄酮的提取,鉴别以及对羟自由基的清除作用。采用超声波乙醇回流提取法从广西茉莉花叶中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类的物质进行鉴别,并采用分光光度法测定含量,用茉莉花叶总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。测得样品中总黄酮的含量C=0.5450mg/mL,回收率为102.5%,其纯度及产率均高。该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取茉莉花叶黄酮类物质的有效途径,茉莉花叶总黄酮提取液对Fenton体系产生的羟自由基有很好的清除作用。