腺病毒载体纯化及在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒是一种线性无包膜的双链DNA病毒,用于载体构建的主要是人类2型和5型腺病毒。现在通过对腺病毒的改造,已经成功构建出第一代、第二代、第三代和条件复制型腺病毒载体。随着腺病毒载体在蛋白质表达中的广泛使用,对高产量、高纯度腺病毒载体的需求量逐渐增大,因此近年来在传统纯化腺病毒载体的基础上发展出各种纯化新方法。同时,由于腺病毒载体自身的一些优点,使其在疫苗和肿瘤基因治疗中也得到了较为广泛的应用。

人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定

目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达。结果Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×1010PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达。结论成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达。

人分化抑制因子3基因靶向微小分子RNA表达载体的构建及筛选

目的人分化抑制因子3(inhibitor of differentination 3,Id3)基因在A549细胞中的外源性表达能抑制细胞生长并诱导细胞凋亡。文中旨在构建靶向人Id3基因的微小分子RNA(miRNA)表达载体,观察miRNA对A549细胞中Id3表达的下调作用,为进一步探讨Id3基因在A549细胞生长调控中的作用机制提供一定实验依据。方法依据miRNA设计原则,针对人Id3基因的mRNA序列,设计并合成编码miRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体中,构建含靶向人Id3基因的miRNA表达质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3),DNA测序验证后,采用Lipofectamine2000TM脂质体转染技术将该质粒导入A549细胞。荧光倒置显微镜下观察miRNA干扰质粒转染A549细胞后EGFP的表达情况,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测miRNA干扰后Id3mRNA及蛋白水平的表达。结果DNA测序表明重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3构建正确,将其成功导入A549细胞后,在Id3mRNA水平和蛋白表达水平均有不同程度的抑制作用。结论成功构建了针对人Id3基因的4组pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3miRNA表达载体,其中,SRId3-1干扰组在mRNA水平和蛋白表达水平均能有效抑制A549细胞Id3的表达。

microRNA干扰Id3基因表达对A549细胞增殖和凋亡功能的影响

目的:研究微小RNA(miRNA)干扰细胞分化抑制因子3(Id3)基因表达对人肺腺癌细胞株A549细胞体外增殖和凋亡作用的影响。方法:构建含靶向Id3 mRNA的miRNA所对应寡核苷酸的重组干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGF-PmiRId3(pcDNA/miRId3),通过脂质体转染技术将miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3和含Id3基因的重组表达载体pEGFP/Id3共转染A549细胞。荧光显微镜观察EGFP表达情况;流式细胞术(FCM)分析转染24 h后A549细胞的EGFP表达效率;半定量RT-PCR和Western blot技术检测转染后A549细胞内Id3 mRNA及蛋白的表达;MTT法和Annexin V-FITC/7-AAD双染法结合FCM检测靶向Id3基因的miRNA转染A549细胞后对增殖和凋亡的影响。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,将pEGFP/Id3和pcDNA/miRId3共转染A549细胞24 h后,A549细胞中外源性Id3 mRNA和Id3蛋白质的表达量均明显受到抑制。MTT和Annexin V/7-AAD双染法结果表明,pEGFP/Id3转染A549细胞24 h后,对A549细胞增殖功能有明显抑制作用,细胞早期凋亡率明显增加,与pEGFP对照组相比均呈统计学差异(P<0.01),但pEGFP/Id3与pcD-NA/miRId3共转染A549细胞后,细胞增殖率和凋亡率均未发生明显变化。结论:外源性Id3基因在A549细胞中的表达能够抑制细胞增殖并诱导凋亡,同时导入靶向Id3 mRNA的miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3,可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用,重组MiRNA表达载体的构建及应用为研究Id3致A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制奠定了实验基础。

中美教育的思考——评《思考,在美国校园中》

《思考 ,在美国校园中》是柳柏濂教授在美学习和学术研究期间 ,通过在生活、教育、科学等领域的所见所闻 ,对中西方文化差异进行的比较分析 ,特别是对我国的教育改革进行了深思。其思考是感性的 ,也是理性的 ,而且两者统一。

优化识字策略 提高识字效率

《语文课程标准》对一、二年级的识字与写字教学进行了较大的改革,提出了“多认少写”的新理念。在第一学段（1～2年级）要求“认识常用汉字1600～1800个,其中800～1000个会写”。这样有利于学生尽早、尽快、尽可能多认字,以便及早进入阅读阶段。无论对培养阅读能力,还是对培养获取信息的能力,都有重要的意义。

生物教学中创新能力的培养

新时期的教育重在提高学生的素质，创新能力是素质能力的体现，本文探讨了在生物教学中培养学生的创新能力的问题。

Mn^(2+)对两种人工湿地植物冬季净化生活污水效果的影响

以风车草和蜘蛛兰为材料,采用水培的方法,研究冬季Mn2+胁迫对人工湿地植物净化生活污水效果的影响,为应用人工湿地修复重金属污染污水奠定基础。结果表明,在0～50mg/LMn2+胁迫条件下,两种植物对生活污水中CODcr的去除率较高,而在较高浓度(250mg/L)下,风车草对CODcr的净化效果大幅降低,蜘蛛兰甚至出现负值;两种植物均是在前期对污水中TP处理效果较好,且不同处理间较稳定,后期处理效果比前期降幅较大;两种植物在两个采样期均是在Mn2+中浓度(50mg/L)以下时对污水中的NH3-N的去除效果较好,高浓度(250mg/L)时对污水中NH3-N的去除率则急剧下降,风车草前期是负值,蜘蛛兰两个时期都是负值。说明风车草和蜘蛛兰比较适合处理浓度为50mg/L以下的含Mn2+污水。

微信公众平台在幼儿园管理中的运用与开发

微信公众平台是一个信息交流平台,具有门槛低、宣传快、零资费的特点,与新时期幼儿园管理工作有内在的适切性。幼儿园管理工作当中运用和开发微信公众平台具有非常积极的作用,能够有效提高管理工作的质量和效率。文章主要分析微信公众平台在幼儿园管理当中的具体应用和开发。

读记读讲写——小语新型教学模式的实践与思考

近几年来,对于如何在小学语文教学中实施素质教育,促进儿童整体发展的问题,我进行了认真的思考和探索.其具体做法是:牢固树立素质教育的学习观、人文观和发展观,坚持以课本范文为本,课外阅读为辅,指导学生把"读-记-读-讲-写"有机地结合起来,有效强化了听说读写训练.

护理干预对介入治疗子宫肌瘤的影响

目的:分析护理干预对介入治疗子宫肌瘤所产生的影响。方法:选取我院2017年5月~2018年8月进行子宫肌瘤介入治疗的患者80例进行分析,将患者分为试验组和对照组各40例,试验组进行综合护理干预,对照组仅进行常规护理,对比两组患者的焦虑、抑郁和疼痛评分。结果:试验组患者的焦虑、抑郁评分高,疼痛评分低,数据与对照组相比P<0.05。结论:对子宫肌瘤采用介入治疗的患者进行护理干预可减轻患者的焦虑、抑郁情绪,缓解疼痛,提高手术治疗效果,值得应用。

双特异性抗体介导的血液恶性肿瘤免疫治疗研究进展

癌症的免疫治疗研究近年来进展显著,通过将双特异性抗体(双抗)桥接、重定向并激活免疫效应细胞杀伤癌细胞,实现了令人瞩目的疗效。自2014年抗-CD19及抗-CD3的双抗blinatumomab获得美国FDA批准用于急性淋巴细胞白血病的治疗以来,重定向免疫效应细胞的双抗在血液恶性肿瘤的临床前和临床中的研究越来越活跃。本综述针对最常见的淋巴细胞瘤、多发性骨髓瘤和白血病3大血液恶性肿瘤,总结了B淋巴细胞、浆细胞和髓细胞不同的癌细胞抗原靶点双抗的科研和临床应用的进展。为了更好地使临床受益及降低毒副反应,寻找特异性更高的癌细胞抗原,优化抗原抗体结合的亲和力,延长双抗分子的体内半衰期,以及重定向不同种类的免疫效应细胞等研究还在持续地拓展,预期双抗介导的免疫疗法将会不断给血液恶性肿瘤带来突破和契机。

肩袖肌腱损伤诱导性动物模型构建评价及研究进展

肩袖(rotator cuff,RC)肌腱损伤是肩关节急慢性疼痛、活动度受限的主要原因,急性损伤全层撕裂时通常需要进行外科手术的及时干预。临床上RC损伤的修复难点在于骨-肌腱界面的重建,虽然目前已经建立了多种手术创伤诱导性肩袖损伤动物模型,但仍缺乏合适的动物模型以及确切的治疗方法。本文将对国内外RC肌腱损伤诱导性动物模型的建立方法及适用范围进行总结归纳,探讨动物模型的选择及功能评估方法,以期为RC损伤的基础科研提供相应的理论依据。

维持性血液透析自体动静脉内瘘失功的主要因素分析

目的探讨维持性血液透析(MHD)患者自体动静脉内瘘(AVF)失功的主要危险因素。方法行MHD治疗的患者96例,其中发生AVF失功21例(失功组)和未发生AVF失功75例(正常组),对可能影响AVF失功的因素进行单因素及多因素logistic非条件回归分析。结果单因素分析结果显示,年龄≥60岁、前臂动静脉内径<2 mm、止血压迫时间≥30 min、低血压、高凝倾向、血肿发生与AVF失功有关(P<0.05);logistic多因素回归分析显示年龄≥60岁、低血压、前臂动静脉内径<2 mm、高凝倾向是AVF失功的主要危险因素(P<0.05)。结论患者高龄、有低血压、前臂动静脉内径小、有高凝倾向均是AVF失功的危险因素,早期对危险因素进行干预有助于减少AVF失功的发生。

研究房屋建筑防水渗漏影响因素及其设计思考

本文针对建筑防水渗漏相关影响因素进行了深入分析,并且针对不同的渗漏问题提出针对性的设计解决方案,全面提高房屋建筑的防水性能,为人们的日常生活安全和居住舒适度打下良好的基础。

综合疗法救治重型蜂蜇伤36例临床分析

目的观察综合疗法对重型蜂蜇伤的临床效果。方法对36例重型蜂蜇伤患者入院后给予局部处理、抗过敏、糖皮质激素、血液透析或血液灌流、抗感染等综合治疗。结果通过综合疗法救治,痊愈31例(存活率86.11%),死亡3例,放弃治疗2例。结论蜂蛰伤可导致人体多脏器功能损害,其中以肾脏损害最常见。目前尚无特异性治疗,综合疗法可挽救患者生命。

冶金级氧化铝颗粒磨损指数分析

为了保证冶金级氧化铝的高效输送和加料,对氧化铝的粒径分布和抗磨损性能提出一定要求,研究和探讨了冶金级氧化铝的抗磨损性能.利用依据国家标准设计的氧化铝磨损指数测定仪,对从不同氧化铝企业采样的32种氧化铝进行了磨损前后的粒径分布测试和磨损指数计算,研究了磨损指数和粒径分布之间的关系.数据分析结果重新强调了综合考虑磨损指数和粒度分布的重要性.同时分析了铝电解干法烟气净化系统对氧化铝的磨损程度.还提出了一种衡量氧化铝粒径分布好坏的方法.

双向电泳和质谱技术在类风湿关节炎滑膜细胞差异蛋白分析中的应用及意义

目的 采用2-DE和质谱技术分析RA患者和创伤件关节炎患者关节滑膜组织中FLS蛋白质组学的变化,寻找RA关节滑膜特异性自身抗原.方法 采用2-DE分离6例创伤性关节炎患者及3例RA患者关节滑膜组织中FLS总蛋白质,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,并用MALDI-TOF-MS对筛选出的差异蛋白质点进行鉴定.结果 RA患者与创伤性关节炎患者中的FLS蛋白质通过2-DE检测,分别检出1 633、1 603个蛋白质点;对2组相互匹配的蛋白质点进行差异分析后,其中蛋白质差异量大于3倍的差异点共有92个,从中选取在RA患者FLS中表达上调的33个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS 鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出包括肿瘤型丙酮酸激酶、α-烯醇化酶、二硫键异构酶A3 前体、谷胱甘肽转移酶、泛素结合酶E2K、血小板活化因子乙酰水解酶、二氢嘧啶酶样2、腺苷酸酶、转醛醇酶、乙酰基辅酶A异构酶、26S蛋白调节亚单位S6a、膜联蛋白A11、过氧化物还原酶1、人色氨酰tRNA合成酶、核纤层蛋白、肌间蛋白、核基质蛋白、肌动蛋白、T-复合物多肽1、葡萄糖调节蛋白75、αB-晶体蛋白、葡萄糖调节蛋白78、未知蛋白：如PSMFA和SELENBP1等30个与RA发病有关的蛋白.结论 RA患者与创伤性关节炎患者FLS间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有可能是构成RA关节滑膜的相关自身抗原,并可能在诱导RA自身免疫反应中发挥一定作用.

84例阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者麻醉期间的护理

分析了84例阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者的解剖特点及病理生理变化,针对OSAS患者全身麻醉的风险,总结了麻醉期间的护理配合经验,护理配合重点包括:充分了解和评估患者情况,妥善准备必须的物品和药品,密切关注和配合麻醉操作步骤,及时发现和处理患者的异常情况。