疾控系统生物样本库建设思考

疾病预防控制中心(以下简称疾控中心)是由国家各级卫生健康委员会主管的实施疾病预防控制与公共卫生技术管理及服务的公益性事业单位。作为公共卫生部门,疾控中心在疫情监测、疾病预防控制、突发公共卫生事件应急响应、健康监测和评估以及医学研究中发挥着不可或缺的作用。市级及区级疾控中心常年在市内开展传染病和慢性非传染性疾病的预防控制、相关产品的卫生学检验与评价、卫生监督监测等业务工作,这些工作非常依赖于样本的检验检测。

医院感染凝固酶阴性葡萄球菌分布及耐药性分析

目的分析医院感染凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的分布及耐药性。方法对临床分离的CNS进行鉴定,以K-B法检测药敏,Nitrocefin色原法测定β-内酰胺酶,刚果红平板法检测黏质。结果在162株CNS中,检出表皮葡萄球菌83株,占51.2%;耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)102株,100.0%产β-内酰胺酶,黏质阳性率17.6%;苯唑西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MSCNS)60株,5.0%产β-内酰胺酶,黏质阳性率1.7%;MRCNS对12种抗菌药物耐药性明显高于MSCNS(P<0.01);所有CNS对万古霉素敏感。结论CNS已为重要医院感染菌;CNS耐药性增高与产β-内酰胺酶和黏质有关;临床应积极进行病原学和耐药性监测,合理用药。

重症监护病房中呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性特征

目的探讨重症监护病房(ICU)中呼吸机相关肺炎(VAP)的流行病学、病原菌分布、耐药性特征。方法对广州市3所三级甲等医院ICU发生VAP的53例患者进行前瞻性研究,对病原菌进行细菌鉴定和耐药性分析。结果VAP平均发病时间为机械通气后7.8 d。97株病原菌中革兰阴性细菌58株(59.8%),革兰阳性细菌23株(23.7%),真菌16株(16.5%)。最常见病原菌分别为铜绿假单胞菌16株(16.5%),金黄色葡萄球菌13株(13.4%),嗜麦芽窄食单胞菌8株(8.2%),肺炎克雷伯菌8株(8.2%),白色念珠菌8株(8.2%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为100.0%;未发现耐万古霉素金黄色葡萄球菌;VAP病原菌存在严重的多重耐药性。结论ICU中VAP的病原菌构成以革兰氏阴性杆菌为主且呈现多重耐药现象,适当的经验性抗菌治疗应以病原学和耐药性的监测结果为依据。

重症监护病房医院感染铜绿假单胞菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型

目的了解ICU铜绿假单胞菌(Pa)感染的分子流行病学特征。方法对ICU临床分离的14株Pa菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型及耐药性检测。结果14株Pa分6个PFGE型别,分别命名为A、B、C、D、E和F型,其中A型为优势流行菌株共8株(57.1%),B型2株(14.3%),其余型别各有1株(分别占7.1%)。Pa对头孢他啶等15种抗菌药物产生不同程度的耐药性,其中8株A型Pa为泛耐药菌株。结论PFGE分型A型Pa菌株具有同源性,是本次ICU发生Pa医院感染的流行株,PFGE分型技术可以准确和快速地用于Pa引起医院感染溯源分型。

婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌分子检测方法探讨

目的:对婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分子检测方法进行探讨。方法:分别用常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌鉴定。结果:32份样品中检出2株阳性株,阳性率为6.25%,两种检测方法结果相符。结论:市售婴幼儿配方奶粉中存在阪崎肠杆菌污染,应尽快制订婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的检测标准,分子检测方法可快速准确检测阪崎肠杆菌。

ICU铜绿假单胞菌感染暴发的随机扩增多态性DNA分子分型

目的对铜绿假单胞菌(PA)进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分子分型,探讨重症监护室(ICU)中PA医院感染的流行规律。方法采用RAPD技术对13株分离自某院ICU临床诊断为医院感染肺炎患者下呼吸道标本的PA进行分型,并与抗菌药物耐药谱分型比较。结果 13株PA产生A型(12株,92.31%)和B型(1株,7.69%)2种耐药表型,优势耐药表型为A型;RAPD分型可分2型,分别为Ⅰ型(6株,46.15%)和Ⅱ型(7株,53.85%)。7株分子Ⅱ型和5株分子Ⅰ型的耐药A型PA是优势菌株,可判断为引起ICU中PA医院感染暴发的病原菌。结论 ICU存在PA暴发流行,流行株为耐药A型/分子Ⅱ型、耐药A型/分子Ⅰ型。PA产生多重耐药性,RAPD分型是目前比较理想的分子流行病学溯源手段。

3种方法检测婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌

目的对市售婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌检测方法进行研究。方法分别用常规培养鉴定方法、常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌分离鉴定。结果32份样品中检出2株阳性株,阳性率为6·25%,3种鉴定方法结果相符。结论联合使用多种鉴定方法可提高阪崎肠杆菌检测的可靠性。

致呼吸机相关性肺炎的鲍曼不动杆菌分子分型

目的了解引起呼吸机相关性肺炎(VAP)的鲍曼不动杆菌(Ab)分子流行病学特征。方法对分离自VAP患者下呼吸道分泌物标本中的7株Ab菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型及耐药性检测。结果 7株Ab的PFGE电泳条带相似度为57%～100%,分为A、B、C、D 4个PFGE型别,其中A、B、D型各2株(28.57%),C型1株(14.29%)。Ab对头孢他啶、亚胺培南和妥布霉素等13种抗菌药物产生不同程度的耐药性,均为泛耐药菌株,其中C型Ab为全耐药菌株。结论 PFGE分型技术可以准确和快速地用于Ab引起的医院感染溯源、分型。

食品中产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

目的调查广州地区食品中产气荚膜梭菌的污染水平及菌型分布。方法参照国家标准方法进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用针对产气荚梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2六种毒素的基因cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2序列的6对特异性引物,用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型鉴定。同时用产气荚膜梭菌A型参照株NCTC64609作为阳性对照。结果从142份食品中分离到21株产气荚膜梭菌,以冷冻肉的带菌率最高,为19.6%;鲜肉和速冻肉饺分别为12.2%和11.9%。经多重PCR方法鉴定,均扩增出预期大小为324bp的cpa基因片段的特异性条带,未扩增出针对cpb、etx和iA基因的特异性条带,证实均为A型产气荚膜梭菌。携带β2毒素基因的产气荚膜梭菌共19株(占总分离株的90.4%),其中1株为肠毒素基因阳性的A型菌株。结论初步调查表明广州地区食品中存在可致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌污染,为进一步建立广州地区食品中及与食物中毒有关的厌氧菌分子分型数据库奠定了基础。

广州市市售食品食源性致病菌污染状况调查

目的了解广州市市售食品中食源性致病菌的污染状况。方法采用随机抽样方法分别对我市10个区以及两个地级市的集贸市场、超市、宾馆饭店及个体熟食销售点的7类食品共363份样品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、空肠弯曲菌等6种致病菌依据国标的方法进行了监测。结果363件样品中检出致病菌72株。其中副溶血性弧菌检出率为33.93%,主要污染水产品;金黄色葡萄球菌为3.00%,主要污染熟食品;沙门氏菌和单增李斯特菌检出率分别为1.93%和0.66%;未检出大肠杆菌O157:H7和空肠弯曲菌。在各类食品中,致病菌带菌数有显著性差异(以!2检验,P<0.005)。水产品致病菌带菌率最高,以副溶血性弧菌为主;其次为生肉类,以检出沙门氏菌为多。结论我市市售食品存在食源性致病菌污染,水产品和生肉类是主要污染食品。应加强市售食品监督管理,以减少可能引起食源性疾病的因素。

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。

广州地区食品分离空肠弯曲菌的病原及分子分型分析

目的了解广州地区食品中空肠弯曲菌的污染状况及菌株分子型别特征。方法采用传统生化鉴定、荧光免疫分析及PCR方法分离和鉴定所分离的菌株,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型分析。结果从100份检材中分离到10株空肠弯曲菌,不同方法得到一致的鉴定结果。10株菌经PFGE分析共得到3个聚类群。结论传统生化鉴定与PCR方法相结合能有效地从食品中进行空肠弯曲菌的分离和鉴定,食品分离的空肠弯曲菌中存在PFGE型的多态性。

基因分型技术在食物中毒调查中的溯源应用

目的:运用基因分型技术分析金黄色葡萄球菌的分子特征,为流行病学溯源提供有效手段。方法:对一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒进行常规鉴定后,用荧光定量PCR检测特异耐热核酸酶基因(nuc)和5种常见肠毒素基因(sea,seb,sec,sed,see),并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分型和聚类分析。结果:23株分离菌的nuc基因检测均为阳性,其中22株检测出sea肠毒素基因,21株细菌属于同一个PFGE型别。结论:此次食物中毒由同一株金黄色葡萄球菌引起,基因分型技术可以显示食物中毒诊断证据链,为流行病学调查和溯源提供可靠依据。

正常妊娠妇女不同孕期血清微量元素指标分析

目的 了解妊娠期母体 6种金属元素的生理变化 ,做好孕期保健工作 ,保证母婴健康。方法 采用电感耦合高频等离子体发射光谱仪对 110例正常妊娠妇女孕中期和孕晚期血清铁、铜、钙、锌、锰、铅测定。结果 妊娠妇女血清中铁与铜含量在孕中期和孕晚期差异无显著性 ;血清钙含量孕晚期比孕中期显著降低 ;血清锌、锰、铅含量则孕晚期比孕中期显著升高。结论 要加强妊娠期钙、锌、锰、铅的监控 ,特别是针对孕晚期钙的缺乏 ,积极采取干预措施 。

PCR-RFLP与特异引物PCR对副溶血性弧菌进行分型鉴定探讨

目的:探讨在流行病学溯源方面,运用PCR-RFLP与特异引物PCR对副溶血性弧菌进行分型鉴定的可行性。方法:选择副溶血性弧菌核糖体基因16SrRNA序列进行PCR-RFLP分析、保守核糖体基因间隔序列16-23SrRNA(RS)和肠道细菌重复内显子保守序列(ERIC)进行特异引物PCR分析。结果:16SrRNA PCR-RFLP分析有4种模式图,RS-PCR分析有3种模式图,ERIC-PCR分析有10种模式图。结论:PCR-RFLP与特异引物PCR可以对副溶血性弧菌进行快速分子分型鉴定,有利于流行病学溯源。

检测实验室设备质量控制管理方法探讨

设备质量控制管理,是检测实验室实现全面质量控制管理的重要内容之一。通过建立检测实验室设备质量控制管理体系,分析设备质量控制管理的各个关键环节,提高设备质量管理水平,对确保检测结果的准确、有效和可靠有重要意义。

广州市疾控系统的实验室信息化建设构建

建立广州市区域一体化网络实验室管理系统,通过增加信息录入的种类和方式,加强实验流程的监控管理功能,拓展与广州市其它机构数据平台的互联性,加强数据处理和统计功能,实时对人、机、物、料、法各个环节进行有效的质量控制,将广州市疾控市区系统的资源进行科学的配置,实现数据的跨区域、多层次的利用,工作效率显著提升。

沙门菌grOEL基因序列在系统发育分析和PCR-限制性片段多态性分析鉴定中的应用

目的探讨grOEL基因序列在沙门菌进化分析和分型鉴定中的应用。方法对8种血清群的沙门菌菌株进行PCR扩增、测序,然后用分子生物学软件Bioedit与DNAstar进行序列分析,同时用PCR-限制性片段多态性分析(RFLP)技术进行分型鉴定。结果8种沙门菌血清群grOEL基因保守序列与变异序列呈锯齿状排列,其grOEL氨基酸系统发育树与grOEL基因系统发育树结果不完全相同,但O8、O9、O10之间亲缘关系最近,PCR-RFLP分析有5种模式图。结论grOEL基因序列在沙门菌系统发育中可作为遗传标记,同时也可作为分型鉴定的靶序列。

一起引发食物中毒病原菌的分离鉴定

目的对引起食物中毒的副溶血弧菌进行分离鉴定。方法按照国标GB4789和有关规范对引起食物中毒的海鲜食品和临床病人进行检测。结果从22份临床病人肛拭子标本均分离出血清型为O3:K6的副溶血弧菌,而从其食用的海鲜食品中未分离到副溶血弧菌。结论副溶血弧菌引起食物中毒具有较强的致病性,从病人体内分离出副溶血弧菌,但在所食用剩余食品中未能检出,也许副溶血弧菌在冷冻的海鲜食品中进入了"活的非可培养"状态而难以分离检测出来。

山西贡梨粗多糖的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

选取山西贡梨为研究对象,使用超声辅助的方法提取山西贡梨粗多糖,采用单因素试验探讨了提取温度、提取时间、液料比和提取功率的影响;在单因素试验基础上,再进行正交试验优化最佳的工艺提取条件。根据正交试验结果分析得最佳的提取条件为:提取温度为60℃、提取20 min、料液配比1∶20(g/mL)、超声功率120W。采用最佳的提取工艺条件对山西贡梨粗多糖进行提取,提取率可达15.43%。以抗坏血酸作为阳性对照,测试山西贡梨粗多糖对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除率。试验结果显示,山西贡梨粗多糖与抗坏血酸对上述两种自由基均表现出较明显的清除能力,且清除能力与粗多糖浓度呈正相关性。山西贡梨粗多糖的抗氧化性研究为山西贡梨精加工产品提供一定的前期理论基础。