Shugoshin1在非小细胞肺癌多西紫杉醇耐药中的作用

目的:探讨Shugoshin1在非小细胞肺癌A549细胞对多西紫杉醇耐药中的作用。方法:用Western-blot及RT-PCR检测Sgo1在非小细胞肺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxotere及亲本A549中的表达差异。通过构建Sgo1的si-RNA质粒和过表达质粒经慢病毒包装分别转染A549/Taxotere及亲本A549细胞,利用Western-blot及RT-qPCR鉴定其干预效果。MTT比色法比较下调及上调Sgo1的表达后细胞对化疗药物多西紫杉醇敏感性的影响。结果:在非小细胞肺癌多西紫杉醇耐药细胞株中,Sgo1的表达明显高于其亲本细胞株A549。通过外源性筛选和鉴定,经慢病毒包装载体,成功构建了Sgo1表达上调和下调的细胞株;MTT试验发现:抑制Sgo1的表达能显著增加A549/Taxotere对多西紫杉醇的敏感性,而外源性上调Sgo1的表达能明显降低A549对多西紫杉醇的敏感性。结论:Sgo1的表达与非小细胞肺癌细胞株A549紫杉醇耐药性密切相关。

钙调神经磷酸酶Aα对不同骨转移潜能小细胞肺癌细胞株黏附作用的影响

目的:探讨CnAα在小细胞肺癌骨转移中对骨基质黏附作用的影响。方法:构建CnAα稳定高表达和低表达的小细胞肺癌细胞SBC-3和SBC-5细胞株;利用骨条技术对构建好的稳定表达细胞株的骨黏附能力强弱进行对比。结果:高骨转移潜能SBC-5细胞对骨组织的黏附能力强于非骨转移SBC-3细胞;上调CnAα的SBC-3细胞的黏附能力强于其亲本细胞SBC-3,而下调CnAα的SBC-5细胞的黏附能力低于其亲本SBC-5细胞。结论:CnAα可能是通过提高小细胞肺癌细胞对骨组织的黏附能力来促进肺癌骨转移。

下调IQGAP1的表达对非小细胞肺癌PC14/B细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的:探究IQGAP1对非小细胞肺癌细胞株PC14/B生物学行为的影响。方法:构建干扰IQGAP1的质粒,转染至PC14/B细胞株,体外增殖、迁移、侵袭实验观察下调IQGAP1表达后对非小细胞肺癌细胞株PC14/B生物学行为影响。结果:成功构建IQGAP1表达下调的细胞株RNAi-PC14/B。与转染空载体的细胞株相比,下调IQGAP1的表达能够抑制PC14/B细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论:IQGAP1表达可能与肺癌转移相关。

慢病毒载体介导的RNA干扰下调膜联蛋白A1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究AnnexinA1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响。方法:构建干扰AnnexinA1的慢病毒载体,转染至SBC-5细胞株;体外增殖、迁移、侵袭实验观察下调AnnexinA1表达对小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响。结果:干扰AnnexinA1的细胞株ANXA1 RNAi-SBC-5构建成功。与转染空载体的对照细胞相比,抑制AnnexinA1的表达能够显著抑制SBC-5细胞的增殖、迁移、侵袭能力。结论:AnnexinA1表达可能与肺癌骨转移密切相关。

Shugoshin1对非小细胞肺癌H1299细胞增殖的影响

目的:探讨Shugoshin1(Sgo1)对于非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株H1299增殖的影响。方法:用Western blot及RT-PCR检测Sgo1在NSCLC细胞株H1299中的表达。成功构建Sgo1siRNA质粒,经慢病毒包装转染H1299细胞,利用Western blot及RT-PCR鉴定转染效力。用单层细胞生长实验和平板克隆形成实验观察Sgo1对H1299细胞株增殖及克隆形成能力的影响。结果:在NSCLC细胞株H1299中,Sgo1表达明显高于人成纤维细胞株。下调Sgo1的表达后,H1299细胞株的增殖能力和克隆形成能力均明显减低。结论:Sgo1的表达与NSCLC细胞株H1299的增殖密切相关,有可能成为肺癌治疗的一个新靶点。

血管内皮抑制素的不同给药方法对肺癌A549细胞和脐静脉内皮细胞生长的影响

目的:探讨血管内皮抑制素的不同给药方法对A549肺癌细胞、脐静脉血管内皮细胞及BALB/c裸鼠移植瘤生长的影响。方法:用不同浓度的血管内皮抑制素作用于A549细胞及脐静脉血管内皮细胞,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;构建BALB/c裸鼠A549移植瘤模型,观察不同给药方法下肿瘤体积、重量的变化;应用免疫组化法检测肿瘤组织中CD31和CD34分子的表达差异。结果:在各组不同浓度的血管内皮抑制素作用下,A549细胞增殖能力并未随抑制素浓度的增加而降低,仅在浓度为1μg/ml时与对照组有差异(P<0.05);脐静脉血管内皮细胞增殖能力与对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。在体内实验中,单独使用血管内皮抑制素及血管内皮抑制素联合顺铂治疗,各实验组肿瘤体积较对照组均有不同程度的缩小(P<0.05),联合用药疗效优于单用血管内皮抑制素;单独使用血管内皮抑制素时隔日给药肿瘤抑制率最高(50.74%),联合用药3周(血管内皮抑制素1次/日+顺铂1次/周)抑瘤效果最好(96.41%);免疫组织化学结果显示各实验组肿瘤组织中CD31和CD34分子的表达均下降(P<0.05)。结论:血管内皮抑制素在体外浓度为1μg/ml时对A549细胞生长有抑制作用,而对脐静脉内皮细胞生长没有明显抑制作用。血管内皮抑制素与顺铂联合使用较单独使用的抑瘤效果明显。血管内皮抑制素联合化疗时,每日连续给药抑瘤效果更好。

肺癌骨转移及骨相关事件危险因素分析:系统综述

骨转移及骨相关事件严重影响肺癌患者的生活质量及预后疗效。本研究运用已设定的研究方案,对已发表的肺癌骨转移/骨相关事件的危险因素进行系统分析,从而认识其相关危险因素。分析发现,T_4分期、N_3分期及BSP阳性表达的原发性肺癌患者发生骨转移的风险较对照组患者有所增加。低血钙和CEA升高的肺癌患者发生骨转移的可能性较大,但尚未排除其他混杂因素的干扰。在肺癌骨转移患者中,长期吸烟和多重骨转移的患者组发生骨相关事件的风险较对照组人群有所增加。

唑来膦酸预防肿瘤骨转移的研究进展

骨转移导致的骨相关事件使患者生存时间缩短,生活质量下降,同时也增加了患者家庭的经济负担。研究表明,第三代双膦酸盐(Bisphosphonate,BPs)唑来膦酸(Zoledronic acid,ZOL)在治疗多种实体瘤骨转移骨相关事件以及延缓骨相关事件的发生方面有效。目前大量临床前及临床研究提示:ZOL可能具有预防骨转移的作用。其机制可能涉及阻滞肿瘤细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和肿瘤血管生成。因此,ZOL可能对没有发生骨转移的早期癌症患者有预防骨转移的作用。本文就唑来膦酸预防骨转移的最新研究进展做一综述。

血清中CaN和PTHrP测定在肺癌骨转移诊断和疗效判定中的意义

目的:探讨血清中钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)的测定对肺癌骨转移患者的诊断及临床疗效评价的意义。方法:应用ELISA法检测患者血清CaN和PTHrP浓度,并比较其浓度在肺癌骨转移未治疗患者,非骨转移患者及骨转移治疗患者中的差异。结果:骨转移未治疗组患者血清CaN和PTHrP水平均明显高于非骨转移组(P<0.01),并高于骨转移治疗组(P<0.01)。结论:血清CaN和PTHrP的测定对肺癌患者骨转移的诊断及疗效评价可能具有重要意义。

BMP 7对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨重组人BMP 7(bone morphogenetic protein-7,rh BMP 7)在体外对人小细胞肺癌(SCLC)细胞株SBC-3和SBC-5生物学行为的影响,为开发新的抗癌药物提供理论依据。方法:设置不同的rh BNP 7浓度梯度(0、50、100、150、200ng/ml)和时间梯度(24、48、72h)作用于SBC-3细胞和SBC-5细胞。MTT法检测细胞增殖情况,探索rh BMP 7的有效作用浓度和作用时间。选择有效作用浓度作用于SBC-3/5细胞,观察撤离rh BMP 7后细胞增殖的变化,并用流式细胞仪分析rh BMP 7对细胞凋亡和周期的影响。结果:rh BMP 7在体外对SBC-3细胞和SBC-5细胞的增殖有抑制作用,且有一定的浓度依赖性,有效作用时间为48h。rhBMP 7撤离后肿瘤细胞的增殖可以得以恢复。进一步研究还发现rh BMP 7可以抑制SBC-3和SBC-5细胞的迁移和侵袭能力。流式细胞仪分析rh BMP 7不影响SBC-5细胞的凋亡率,但会诱导SBC-3细胞的凋亡(P<0.05)。同时,rh BMP 7处理组中G1期的细胞比率有所升高,S期的细胞有所减少;并且这一影响在SBC-3细胞中更为明显。结论:rh BMP 7可以抑制SBC-3和SBC-5细胞的增殖,且抑制作用具有浓度和时间依赖性。rh BMP 7并不影响SBC-5细胞的凋亡,但会诱导SBC-3细胞的凋亡。因rh BMP 7可以增加G1期细胞的比率,推测可能是通过诱导细胞周期阻滞抑制肿瘤细胞增殖,从而为SCLC的治疗提供新的思路。

Sema3A在胃癌增殖和侵袭中作用的初步研究

目的:探讨Sema3A在胃癌增殖和侵袭中的作用。方法:构建Sema3A正义表达载体,经慢病毒包装,感染胃癌高转移潜能MKN-28M细胞,获得外源性稳定表达的Sema3A胃癌细胞株。利用MTT法、克隆形成实验、细胞凋亡实验观察Sema3A过表达对胃癌细胞生长增殖能力的影响。Transwell侵袭实验观察Sema3A过表达对胃癌细胞体外侵袭转移能力的影响。结果:慢病毒包装Sema3A正义表达载体转染入胃癌细胞MKN-28M后,有效增加了Sema3A基因的表达。Sema3A慢病毒包装载体感染MKN-28M细胞后,与对照组相比,细胞生长、增殖速度明显减慢(P<0.05),克隆形成率明显下降(P<0.05),细胞凋亡明显增加(P<0.05),体外侵袭试验表明外源性上调Sema3A显著降低了高转移细胞系MKN-28M的侵袭转移能力(P<0.05)。结论:成功构建了外源性过表达Sema3A基因的慢病毒载体,上调Sema3A基因的表达显著降低了胃癌高转移系MKN-28M细胞的生长增殖能力,抑制了侵袭转移能力,提示Sema3A在抑制胃癌的发生发展中具有重要作用。

过表达GDF15对肺腺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究GDF15在体外对人肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响,为肺癌防治提供新的靶点。方法:通过质粒转染的方法,构建GDF15过表达和neo空载体的A549细胞株,运用MTT法、平板克隆和Transwell的实验方法,观察过表达GDF15对A549细胞株生物学行为的影响。结果:成功构建GDF1 5过表达的A549-GDF15细胞株和neo空载体的A549-neo细胞株。与空载体细胞株相比,过表达GDF15能够抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:GDF15在体外可抑制肺癌细胞的增殖及迁移。

脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

探讨构建人脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子(LITAF)基因的过表达慢病毒载体的技术方法,并检测其体外表达目的基因的水平。设计LITAF基因引物,应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增LITAF基因片段;应用EcoRI、Bam HI酶切LV8载体,通过连接酶将LITAF基因片段连接至线性化的LV8载体上,应用酶切及测序方法鉴定LITAF-LV8重组质粒,将其包装慢病毒后感染293T细胞(人胚肾细胞),观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,验证后感染肝癌细胞株HepG2。RT-PCR和Westernblot鉴定感染后HepG2中LITAF的表达。LITAF基因在慢病毒感染的HepG2细胞中的表达显著高于对照组细胞。说明成功构建了过表达LITAF的HepG2细胞株,为后期研究提供了实验基础。

Sema3A在胃癌中的表达及意义

目的:探讨Sema3A在胃癌中的表达及意义。方法:利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常健康人及胃癌患者血清中Sema3A表达的差异性。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time PCR)检测胃癌细胞系、人正常胃黏膜细胞中Sema3A mRNA的表达差异。应用免疫印迹法(Western Blot)检测胃癌细胞系、人正常胃黏膜细胞中Sema3A蛋白的表达差异。结果:与正常健康对照者相比,Sema3A在胃癌患者血清中表达下降(P<0.001),且与胃癌患者的年龄、肿瘤分化程度相关(P<0.05)。人转移潜能胃癌细胞株MKN-28M、MKN-28NM中Sema3A mRNA和蛋白表达量明显低于人正常胃黏膜细胞(P<0.05),且在高转移潜能MKN-28M细胞中表达量最低(P<0.05)。结论:与正常对照组相比,Sema3A在胃癌患者血清、人胃癌细胞株中均表达下降,且在胃癌高转移潜能MKN-28M细胞中表达最低,提示Sema3A在胃癌的发生发展中具有重要作用,可能扮演着抑癌基因的作用。

下调ZEB-1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探讨ZEB-1对非小细胞肺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建干扰ZEB-1的质粒,转染至A548细胞株,运用体外增殖、迁移、侵袭实验来观察ZEB-1表达下调后对非小细胞肺癌细胞株A549生物学行为的影响。结果:下调ZEB-1的表达可降低A549细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。结论:ZEB-1表达水平与非小细胞肺癌侵袭转移的能力显著相关。

雌二醇通过雌激素β受体促进非小细胞肺癌A549细胞增殖

目的观察雌二醇(E2)激动雌激素受体ERα和ERβ时,对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖能力的影响。方法将A549细胞和H1299细胞分别用E2、雌激素α受体激动剂(PPT)和雌激素β受体激动剂(DPN)处理24 h和48 h。利用MTT法筛选出三者在NSCLC细胞系A549和H1299中对细胞增殖产生作用的有效浓度和时间;利用平板克隆形成实验检测E2、PPT、DPN对A549和H1299的细胞增殖能力的影响;利用流式细胞术检测E2、DPN对A549的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT实验和平板克隆实验结果显示E2及DPN能够促进A549细胞的增殖(P <0. 05),而二者均不能促进H1299细胞的增殖(P> 0. 05),二者的最佳作用浓度为10^(-8)mol/L。而PPT在高浓度时严重抑制两种细胞的增殖(P <0. 05),低浓度时则对两种细胞的增殖无明显的促进作用(P> 0. 05)。流式细胞术结果提示E2和DPN通过促进细胞G1-S周期进程,提高A549细胞增殖能力(P <0. 05),而对A549细胞凋亡没有影响(P> 0. 05)。结论 E2和DPN均可促进A549细胞的增殖,但是PPT不能促进A549细胞的增殖,提示雌二醇通过激活雌激素β受体促进A549细胞的增殖。

海水冷冻预淡化系统的试验研究

本文提出了一种基于冷冻脱盐的海水双级冷冻预淡化系统。该系统利用蒸发结晶器对海水进行冷冻,并通过振动分离与洗涤实现冰晶与卤水的分离,以此实现海水的初步脱盐,可作为反渗透淡化的预处理系统。同时,海水冷冻淡化过程中消耗的冷量可重新回收用于空调制冷,淡化成本得以有效降低。本文建立了海水双级冷冻预淡化系统的数学模型,获得了试验系统的关键设计参数,以此搭建了试验平台并完成了试验测试,并对海水双级冷冻预淡化系统进行了经济性分析。试验结果表明:经过海水冷冻预淡化系统,预淡化海水产量可维持在21~27 L/h之间;预淡化海水盐度可从35降低到约11;预淡化过程可回收总冷量7.91 kW;反渗透淡化总成本可降低约33%。

核心素养背景下的校本课程开发与实施研究

构建新时代背景下"德、智、体、美、劳"五维发展的高水平人才,核心素养是根本,因此加强学生的教育水平,坚持"立德树人"的教育方针是非常有必要的。本文采用文献研究法、行动研究法、实验比较法,分析了基于核心素养校本课程建设开发的实践意义和两者融合的可行性,并基于本校实际和国内外研究学者的理论实践研究,及本校的校本课程开发经验,分析研究了核心素养背景下的校本课程开发与实施路径。

建立初诊肺癌患者骨转移风险评估模型

目的:建立一个列线图来预测肺癌患者骨转移的风险。方法:收集2012年1月至2019年12月未经任何治疗(包括手术、放疗和化疗)的肺癌患者的临床资料,包括骨转移情况、性别、年龄、病理类型、血清钙浓度、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、T分期、N分期。分析骨转移的危险因素,通过Logistic回归分析建立列线图。结果:在分析的306例患者中,有137例(44.78%)肺癌患者在初次诊断时已经发生骨转移。其中ALP、CEA、病理类型和N分期是新诊肺癌患者骨转移的危险因素,列线图模型曲线下面积(area under curve,AUC)值为0.867。结论:当临床上出现初诊ALP值高、CEA>7.285 ng/ml、N分期高、腺癌和小细胞癌的患者时,有必要及时对患者进行相关骨转移检查。