双孢蘑菇来源非特异性过氧合酶在毕赤酵母中的表达及生化表征

本研究以来源于(Agaricus bisporus var. bisporus,Abvb)的非特异性过氧合酶AbvbUPO为目标蛋白,实现了其在毕赤酵母GS115中的异源分泌表达。Westernblot检测结果表明重组AbvbUPO分子量为35ku。酶生化表征研究发现,非特异性过氧合酶AbvbUPO的最适反应温度和pH分别为35℃和3.0。通过过氧化氢耐受性实验,发现2 mM以上的过氧化氢会导致AbvbUPO钝化。为保持AbvbUPO在反应过程中的活力,原位生成过氧化氢的AbvbUPO酶级联催化反应被应用于其催化能力的鉴定。以乙基苯为底物的AbvbUPO酶级联催化反应,经过4h的反应后,产物β-苯乙醇的得率可达14.40%。上述研究表明,AbvbUPO是一种不耐受高温和高浓度过氧化氢的中温酶,但在原位生成过氧化氢的级联反应中AbvbUPO可保持良好的催化性能。本研究为非特异性过氧合酶的异源表达和生物催化应用提供了一个良好的借鉴。