登革病毒感染对T细胞和NK细胞表达细胞因子的影响

【目的】本文探讨登革病毒体外感染人外周血单个核细胞后对T细胞和NK细胞表达细胞因子的影响,并初步探讨登革病毒感染引起的免疫效应。【方法】用登革2型病毒(DEN-2)感染健康人外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测登革2型病毒后T细胞和NK细胞的表型及细胞因子的表达水平。【结果】DEN-2感染18 h后,T细胞明显表达CD69、IFN-γ、TNF-α和perforin,NK细胞表达CD69、IFN-γ和perforin;随着感染复数(MOI)增加,表达perforin和IFN-γ的T细胞数及表达perforin的NK细胞数上升;随着感染时间的延长,表达perforin和IL-4的T细胞数及表达perforin的NK细胞数逐渐上升,而表达IFN-γ的T细胞数及表达IFN-γ的NK细胞数逐渐下降;表达perforin的T细胞亚型主要为CD8+T细胞。【结论】发现登革病毒在体外能够诱导T细胞表达CD69、IFN-γ、TNF-α、perforin和IL-4,及NK细胞表达CD69、IFN-γ和perforin,提示T细胞、NK细胞可能在抗登革病毒感染或免疫损伤中起着重要的作用。

登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用

【目的】重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化。用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体。应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(>1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。

核酸定量检测用于优化艾滋病“一站式”诊断流程的研究

目的探讨联合应用HIV核酸定量检测(病毒载量,viralload,VL)与HIV抗体确证试验(Western-blotting,WB)优化艾滋病“一站式”诊断流程,建立有效可行的补充试验检测方案。方法2014年3—9月,收集广西6个现场点县医院常规HIV-1抗体筛查试验有反应的样本,同时进行VL和WB检测,比较不同补充试验检测方案的诊断效果与检测成本。结果6个现场点共有185例新发现HIV抗体筛查试验有反应,以男性为主(占74.6%),年龄中位数为52岁。在WB方法中,HIV-1抗体阳性有174例,占94.1%;在VL方法中,VL>5000拷贝/mL有181例,占97.8%。在174例HIV-1抗体阳性的样本中,VL为20、20~5000、5001~100000及>100000拷贝/mL分别有2例(1.1%)、2例(1.1%)、51例(27.6%)及130例(70.3%)。10例HIV-1抗体不确定的样本,其VL均为100000拷贝/mL。WB、VL、WB/VL和WB+VL四种补充试验方案可明确诊断HIV感染的比例分别为94.1%、97.8%、99.5%和99.5%,其检测成本分别为112750、146050、116380和17300元。结论艾滋病“一站式”诊断流程以WB/VL检测方案为最优,即WB检测结果为HIV-1抗体不确定或阴性的样本再做VL检测,该方案可以提高HIV感染诊断的准确性和减少检测成本。

尿液与血液样本中HIV-1抗体检测结果比较分析

目前艾滋病病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）抗体检测主要以血液样本为主。而血液采集需要采血器和工作人员,存在职业暴露危险,并且运输、保存要求高,经常遇见不愿接受采血或静脉采血比较困难的情况。

广西VCT门诊HIV-1抗体阳性人群WB条带分析

目的分析2012-2016年,广西自愿咨询检测门诊人群艾滋病病毒1型（HIV-1）抗体阳性样本的蛋白印迹试验（WB）条带,为艾滋病的预防和控制提供科学依据。方法对筛查有反应性的样本经WB进行确证检测,数据用SPSS 17.0进行统计分析。结果 1 018例确证阳性样本中,WB条带6~9条的占62.48%（636例）;各WB条带中均有gp160带型;反应性率〉95.00%的带型有gp120、gp41和p24,反应性率〉80.00%的带型有p66、p51和p31,有p55、p39和p17的,分别占41.45%（422例）、39.69%（404例）和53.93%（549例）。带型p51、p55和p39的反应性率在不同性别间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,带型p66、p51、p31和p55的反应性率在不同年龄组间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,带型p31、p55和p39的反应性率在不同感染途径间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论广西地区某些WB带型反应性率在不同感染人群中存在不同程度的差异,并且与其他地区的报道存在差异,其原因有待进一步研究和探讨。

自助采样传递检测HIV抗体模式应用研究

目的探索新的艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体检测模式,为提高检测主动性、更大范围促进HIV抗体传递检测提供可推广的经验。方法以专用尿液采集管、干血斑滤纸片作为传递载体,分别采集尿液和干血斑,依靠物流或志愿者传送采集样本到专业实验室。分别针对尿液HIV-1/2抗体和干血斑HIV-1/2抗体的诊断试剂盒(酶联免疫法)检测,检测结果上传至网站,求询者通过序列码在移动终端查询结果和咨询。结果暗娼人群中回收干血斑和尿液各293人份,回收率97.67%,干血斑、尿液检测结果与确证结果的一致率分别为98.98%(290/293)和98.29%(289/293);男男性行为人群(men have sex with men,MSM)中回收检测包1595人份,回收率63.8%,干血斑传递检测HIV结果与快速自检结果的一致率为99.81%(1586/1589);大学生人群中回收尿液样本180份,阳性检出率为4.4%。通过分析网络查询结果记录,男男性行为人群平均查询次数为1.2次,最高查询次数为26次;大学生平均查询次数为3.5次,最高查询次数为46次。结论尿液和干血斑采集可以作为HIV抗体检测的样本,并且传递检测可作为一种新模式推广应用。

基于分子网络的广西壮族自治区HIV传播热点和跨地区传播特征分析

目的基于分子网络分析广西壮族自治区(广西)HIV传播热点和跨地区传播特征,为优化艾滋病精准防控策略提供证据。方法整合1997-2020年采集的5996条广西HIVpol区序列和165534条公开发表的非广西HIVpol区序列,使用HIV-TRACE工具以0.5%成对基因距离阈值构建分子网络。结果进入广西HIV传播热点分子网络的序列比例为31.5%(1886/5996)。在HIV跨地区传播分子网络中,省内连接占51.6%(2613/5062),国内连接占48.0%(2430/5062),国际连接占0.4%(19/5062)。与广西跨地区连接的主要地区为广东省(49.5%,1212/2449)、北京市(17.5%,430/2449)、上海市(6.9%,168/2449)、四川省(5.7%,140/2449)、云南省(4.2%,102/2449)、陕西省(3.8%,93/2449)、浙江省(2.8%,69/2449)、海南省(2.0%,49/2449)、安徽省(1.5%,37/2449)和江苏省(1.3%,33/2449),其余地区与广西跨地区连接比例均<1.0%。进入广西HIV传播热点分子网络风险较高的影响因素包括≥50岁(相比于25~49岁,aOR=1.68,95%CI:1.46~1.95)、男性(相比于女性,aOR=1.21,95%CI:1.05~1.40)、未婚(相比于已婚,aOR=1.18,95%CI:1.00~1.39)、高中及以上文化程度(相比于初中及以下,aOR=1.21,95%CI:1.04~1.42)和男男性传播(相比于异性性传播,aOR=1.77,95%CI:1.48~2.12)。跨地区连接风险较高的影响因素包括男性(相比于女性:aOR=1.74,95%CI:1.13~2.75),高中及以上文化程度(相比于初中及以下,aOR=1.96,95%CI:1.43~2.69)、自由职业/待业/退休(相比于农民,aOR=1.50,95%CI:1.07~2.11)、男男性传播(相比于异性性传播,aOR=3.28,95%CI:2.30~4.72)。结论广西存在HIV传播热点,广西与国内地区组成复杂的跨地区传播网络。后续研究应针对分子网络分析推断的高风险人群开展社会网络调查,及时识别隐匿传播链,减少HIV二代传播。

一种国产HIV-1病毒载量试剂与进口试剂的比较研究

血浆病毒载量检测是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标,与疾病的发生、发展及预后有密切关系,主要用于评估艾滋病病毒（HIV）感染进程、抗病毒治疗效果监测及HIV感染的辅助诊断^（[1]）。目前国内主要使用3种进口试剂进行病毒载量（VL）检测,进口试剂的敏感性及特异性均较好,但价格昂贵^（[2-4]）。随着治疗就是预防艾滋病策略被广泛地接受^（[5-6]）,

广西壮族自治区2020年新报告≥50岁男性HIV感染者的HIV-1基因亚型分布及其与首次CD4+T淋巴细胞的关联

目的 分析2020年广西壮族自治区(简称广西)新报告50岁及以上男性(简称中老年男性)HIV感染者的HIV-1基因亚型构成特点及不同基因亚型与首次CD4+T淋巴细胞(简称CD4)计数的关联。方法 以市为抽样单位,采用分层随机抽样法选取广西2020年新报告中老年男性HIV感染者为研究对象,对其血浆进行病毒RNA提取、逆转录扩增、测序、HIV-1基因亚型和亚簇判定,使用多因素模型评价CD4计数可能存在统计学关联的影响因素。结果 共纳入分析606例HIV感染者,主要流行毒株有CRF01_AE、CRF07_BC及CRF08_BC三种,其构成比分别为57.6%(349/606)、17.2%(104/606)及22.1%(134/606),其首次CD4中位数分别为145(51, 271)个/μL、212(110, 330)个/μL及178(100, 307)个/μL。CRF01_AE感染者首次CD4值低于CRF07_BC感染者(Z=-3.363,P=0.002),也低于CRF08_BC感染者(Z=-2.983,P=0.009)。二元logistic回归分析模型分析显示,CRF01_AE为广西中老年人群CD4≤200个/μL的独立危险因素(aOR=1.453, 95%CI:1.047~2.017)。结论 CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC为广西2020年新报告中老年男性HIV感染者主要毒株,其构成以CRF01_AE为主,CRF01_AE为CD4≤200个/μL的独立危险因素,提示感染CRF01_AE毒株中老年男性的疾病进展较快,对广西艾滋病流行危害较大。

2012-2015年广西男性流动人员艾滋病哨点监测结果分析

目的通过对2012-2015年广西男性流动人员艾滋病哨点监测结果的分析,了解该群体的行为特征及艾滋病流行趋势,为制定相应干预对策提供重要依据。方法根据《全国艾滋病哨点监测实施方案》要求,对广西男性流动人员进行相关的问卷调查和血清学检测工作。结果 2012-2015年各年纳入监测对象分别为800人、800人、806人、800人,2015年艾滋病知识知晓率为99.0%,2012年为83.9%;各年知晓率的差异有统计学意义(χ2=178.272,P<0.05),且呈上升趋势(χ2=147.159,P<0.05)。最近1年发生商业性行为安全套坚持使用率,以及最近一次发生商业性行为安全套使用率的差异有统计学意义(χ2=14.895,P<0.05;χ2=9.85,P<0.05);最近1年发生临时性行为安全套坚持使用率的差异有统计学意义(χ2=18.746,P<0.05)。各年HIV阳性率分别为0.5%、0、0.5%、0.3%,差异无统计学意义(P>0.05);各年梅毒阳性率分别为1.8%、1.3%、0.2%和1.0%,差异有统计学意义(χ2=8.996,P<0.05)。结论广西男性流动人员的艾滋病相关知识知晓率、不安全性行为中安全套使用率等指标有逐年上升趋势,应继续加强对该人群的艾滋病及梅毒等相关性传播疾病的监测,并针对男性流动人员的特点和其对艾滋病知识不够了解部分进行宣传教育,实施更加切实有效的防治措施。

南宁16～25岁HIV感染者中多亚型流行毒株及耐药传播现状

目的通过对广西壮族自治区南宁市2013-2014年HIV新发感染者毒株基因特征的研究,了解当地HIV毒株流行现状及耐药毒株传播情况。方法采集当年新确证1625岁且未接受抗病毒治疗的部分HIV-1感染者血浆样本,提取病毒RNA,通过扩增HIV-1 pol区片段,进行测序和耐药突变分析。结果2年共获得pol区序列124条,主要以CRF01AE为主（62.1%,77/124）;其次也发现了CRF07BC、CRF08BC、CRF5501B和B亚型等多种亚型毒株。共有9例样本（7.3%）出现了耐药突变,其中6例为异性传播,3例为同性传播,5例针对蛋白酶类抑制剂（PIs）,2例针对非核苷类抑制剂（NNRTIs）,另有2例针对核苷类抑制剂（NRTIs）发生耐药突变。结论当地流行毒株主要为CRF01AE,在南宁首次发现多例CRF5501B重组亚型。广西南宁HIV-1新发感染者耐药传播水平目前超过5%,应引起高度重视,需进一步加强对新近感染者传播性耐药株的监测。

131例HIV抗体检测不确定结果以及随访情况分析

目的了解玉林市5年来HIV抗体确证试验为不确定结果进行跟踪随访检测分析,为艾滋病精准防控提供科学依据。方法对2016~2020年玉林市辖区各医疗卫生单位送检的HIV筛查阳性血液样本,使用两种不同厂家抗体试剂进行复检试验,任意一种方法复检有反应的样本再用免疫印迹法(WB)进行抗体确证试验,HIV抗体WB不确定结果4周后跟踪随访再进行检测,同时使用HIV核酸定量检测作为补充实验。结果复检4798份样本,WB检测4263份,131例受检者为不确定结果,不确定率为3.07%;成功随访检测了76例(随访率为58.02%),失访55例(失访率为41.98%);阳转53例,阳转率为69.74%;带型gp160p24(43/131)以及gp160(37/131)出现频率位居前2位;主要带型中阳转率最高的是gp160gp120gp41为90.91%(10/11),其次是gp160p24为83.33%(25/30);随访了4例HIV抗体不确定孕产妇,阳转例数为0,均为阴性;HIV核酸定量(VL)检测>5000CPs/ml的患者WB试验阳转率为100.00%(53/53),VL<5000CPs/ml者最终排除了HIV感染;首次复检单反应结果随访阴转率为91.11%,阳转率为9.09%(2/22)(P>0.05)。结论双试剂快速法复检试验可减少不确定结果的产生;不确定人群失访率较高;出现HIV抗体不确定结果时采用HIV病毒核酸定量检测方法作为补充实验可更早确诊。

HIV抗体不确定样本的影响因素研究进展

我国HIV抗体不确定的样本呈上升趋势。但是对于不确定样本的影响因素,尚缺乏全面综合的研究。为帮助广大医务检测已工作者了解HIV抗体不确定样本的影响因素,本文就我国不确定样本的检出率现状以及人群、条带和S/CO比值等分布特征进行综述。

2018年广西HIV/AIDS病人抗病毒治疗效果评估及基因型耐药分析

目的了解广西1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者接受抗病毒治疗(ART)8~15个月的治疗效果和基因型耐药情况,为广西艾滋病(AIDS)防治工作提供基础信息。方法 2018年7-10月,运用多阶段抽样的方法纳入297例接受抗病毒治疗8~15个月的广西HIV-1感染者/AIDS病人(简称HIV/AIDS病人),采集血液样本,分离血浆用于病毒载量测定,对病毒载量> 1 000拷贝/mL的样本进行基因型耐药检测。结果 297例HIV/AIDS病人抗病毒治疗8~15个月后CD4+T淋巴细胞计数上升,差异有统计学意义(P <0.05),抗病毒治疗失败率为4.0%(12/297,病毒载量> 1 000拷贝/mL)。至少出现一种抗病毒基因型耐药的人数占总调查人数的2.4%(7/297)。病毒抑制失败人群中耐药发生率为53.8%(7/13)。7例发生核苷类反转录酶抑制剂耐药,其中6例有高度耐药,其主要耐药突变位点为M184V;有6例发生非核苷类反转录酶抑制剂耐药,全部为高度耐药,主要突变位点为K103N和Y181C。结论广西HIV/AIDS病人抗病毒治疗8~15个月后耐药率低,属于低流行状态,绝大部分病人病毒得到有效抑制,病毒抑制失败的病人有一半以上由高度耐药造成。

广西玉林市2015—2020年HIV抗体不确定结果的随访分析

目的 探讨人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)抗体不确定结果转归特点及HIV-1病毒载量检测在HIV抗体不确定诊断中的应用。方法 收集2015—2020年广西壮族自治区玉林市HIV抗体筛查为HIV抗体有反应的样本,使用胶体金和胶体硒两种快速法检测试剂复核,出现单反应或双反应的标本使用蛋白免疫印迹法(Western-blot, WB)进行确证试验,WB结果为不确定的样本检测其HIV-1病毒载量作为补充试验并在1~4周后进行随访。结果 2015—2020年共收到HIV抗体确证检测样本4 906人份,不确定结果 153人份(3.12%),最终完成随访并有检测结果 91例。在91例中有59例阳转(64.84%),32例阴转(35.16%);复核双反应和单反应的阳转率分别为94.74%(54/57)和14.71%(5/34);WB结果为2条带以上的阳转率为89.80%(44/49),WB结果仅有1条带的阳转率为35.71%。91例随访中病毒载量>5 000 CPs/mL的有59例,阳性率为90%,病毒载量≤5 000 CPs/mL的有32例,阳性率为0。结论HIV抗体复核出现双反应且WB至少2条带型的样本阳转率比较高;HIV抗体复核仅单反应且WB仅有1条带型的也有感染的高风险,可检测HIV-1病毒载量以尽早确定患者是否感染HIV病毒。

HIV感染者戊型肝炎病毒IgM抗体阳性率调查

戊型肝炎(hepatitis E,HE)是一种由单股正链、无包膜的RNA病毒引起的肝炎[1],其临床分型一般可以分为急性戊肝、淤胆型戊肝及重型戊肝[2]。在免疫功能正常的人群中,绝大多数HE患者在数周内痊愈,症状轻微,不发生慢性感染,但在免疫力低下的患者中,如在实体器官移植患者、肿瘤化疗患者、HIV/AIDS患者等人群中,容易发生迁延性感染,加剧患者的病情[3]。