TLR2、TLR4及MyD88高表达与Cm呼吸道感染肺组织炎症相关

目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染过程中C3H/HeN(C3H)小鼠过度炎症反应的机制。方法:C3H与C57BL/6(C57)小鼠鼻腔吸入1×10~3IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型,使用RT-PCR检测感染后不同时间点小鼠肺组织Toll样受体TLR2、TLR4及转导蛋白MyD88 mRNA的表达。结果:使用1×10~3IFU的Cm呼吸道感染C3H与C57BL/6(C57)诱导小鼠衣原体肺炎,Cm感染在高易感性的C3H小鼠及低易感的C57小鼠均诱导Toll样受体的表达,但在感染后第7天及第14天,高易感的C3H小鼠肺组织中TLR2和TLR4 mRNA的表达均显著高于C57小鼠,尤其TLR2(P<0.001或P<0.05),进一步研究发现Cm呼吸道感染C3H小鼠肺组织My D88mRNA的表达也显著高于C57小鼠,并在感染后第14天仍维持高表达。结论:Cm呼吸道感染诱导TLR2、TLR4及MyD88在高易感的C3H小鼠肺组织高表达,可能与C3H小鼠肺组织过度炎症反应相关。

产生IL-17的γδT细胞在沙眼衣原体呼吸道感染早期促进中性粒细胞的募集

目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染早期产生IL-17的γδT细胞对中性粒细胞募集的影响及其机制。方法WT（C57BL/6）与TCRδ－/－小鼠鼻腔吸入3×103 IFU（inclusion-forming units）沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（Chlamydia muridarum, Cm），建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型。分离感染不同时间点小鼠肺组织单个核细胞，流式细胞术检测肺组织CD11b＋Gr1＋中性粒细胞（PMN）百分率；细胞内因子染色检测γδT细胞IL-17的合成；RT-PCR检测小鼠肺组织IL-17及KC（中性粒细胞趋化因子）、IL-6 mRNA表达。结果一定剂量的Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织γδT细胞分泌大量IL-17，与未感染组比较，感染后第3天小鼠肺组织CD3＋ γδT＋细胞分泌的IL-17显著增加（P〈0.001），并且持续到感染的第7天（P〈0.05）；TCRδ－/－小鼠Cm呼吸道感染后第3天肺组织IL-17 mRNA的表达以及PMN百分率显著低于WT鼠；进一步研究显示TCRδ－/－小鼠在感染后第3天及第7天中性粒细胞趋化因子KC和IL-6在小鼠肺组织的表达显著降低。结论产生大量IL-17的γδT细胞可能通过上调KC和IL-6的表达在沙眼衣原体呼吸道感染中发挥PMN募集作用。

沙眼衣原体呼吸道感染诱导PI3K/AKT/Bcl-2/Bax通路活化促进CD4^＋ T细胞凋亡

目的探讨PI3K/AKT/Bcl-2/Bax途径在小鼠沙眼衣原体呼吸道感染中的诱导活化及CD4^＋T细胞的凋亡。方法C57BL/6小鼠，经鼻腔吸入1×10^3 IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（Cm），诱导小鼠衣原体肺炎。于感染的不同时间点分离小鼠肺组织单个核细胞，RT-PCR检测PI3K p110δ mRNA表达；Western blot检测p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白表达；流式细胞术检测不同感染时间小鼠肺组织CD4^＋ T细胞的凋亡。结果与未感染组比较，小鼠Cm呼吸道感染诱导感染肺组织PI3K p110δ mRNA表达及PI3K下游分子p-AKT蛋白表达增高，两者均于感染第3天显著增高，第7天达到高峰，感染第14天有所降低。同时，Cm呼吸道感染也诱导凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达显著增高，均于第7天达到高峰，但Bcl-2/Bax比值依感染时间降低，提示抗凋亡作用逐渐降低，细胞凋亡增加。Cm感染诱导小鼠肺组织CD4^＋T细胞的凋亡，于感染第3天早期凋亡（Annexin＋PI＋）和细胞总凋亡（Annexin＋PI）均开始增高（P〈0.05），感染第7天达高峰（P〈0.001）。结论Cm小鼠呼吸道感染诱导PI3K/AKT/Bcl-2/Bax通路活化导致CD4^＋ T细胞凋亡。

衣原体呼吸道感染早期IL-17对调节性T细胞及其IL-10分泌的影响

目的 探讨IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染中对调节性T细胞的影响.方法 鼻滴给予野生型(WT,C57BL/6)小鼠和 IL-17-/-小鼠 1×10^3包涵体形成单位(IFU)的鼠型衣原体(Chlamydia muridarum, Cm),构建小鼠衣原体呼吸道感染模型.制备小鼠脾、肺组织单个核细胞悬液,运用流式细胞术检测调节性T细胞(Treg)百分率;利用RT-PCR技术检测小鼠肺组织中Foxp3和TGF-β的mRNA表达水平;用ELISA方法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-10的产生.结果 衣原体呼吸道感染第3天,IL-17--小鼠脾、肺组织中的CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例均高于WT小鼠;IL-17-/-小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达及支气管肺泡灌洗液中IL-10的分泌显著高于WT小鼠;两种小鼠肺组织TGF-β mRNA表达无显著差异.结论 衣原体呼吸道感染早期阶段IL-17可能抑制小鼠调节性T细胞的增殖和IL-10的产生.