低氧条件对人角膜上皮天然免疫的影响机制

目的探讨低氧条件对人角膜上皮天然免疫的影响机制，以揭示低氧导致角膜感染发生率和严重程度增加的作用机制。方法永生化人角膜上皮细胞（THCEs）分别置于常氧（21％O2）和低氧（1％O2）条件下37℃培养，并于不同时间点（0、6、12、24、48h）收集细胞，分别采用实时PCR和Western印迹检测Toll样受体（TLR）4mRNA和蛋白的表达水平。应用TLR4的公认配体脂多糖（LPS）（1μg/ml）分别刺激常氧组和低氧组THCEs6h，收取细胞采用实时PCR检测TLR通路分子髓样分化因子88（MyD88）、白细胞介素（IL）6、IL-8和肿瘤坏死因子仅（TNF-α）mRNA表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中IL-6、IL-8及TNF—α蛋白表达水平，并利用Western印迹检测核因子-κB（NF—κB）抑制蛋白α（IKBα）和磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκBα）的表达水平。结果低氧孵育THCEs48h后，TLR4的mRNA和蛋白水平均明显减低，分别下调90％和55％。LPS刺激试验结果显示，与常氧组比较，低氧下调63％的MyD88mRNA表达量，抑制IκBα的磷酸化（下调59％），下调炎性细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的分泌（mRNA表达分别下调84％、88％及91％，蛋白表达分别下调31％、55％及50％）。结论低氧可能通过抑制TLR4的表达及其信号通路的活化，降低人角膜上皮的天然免疫反应，增加角膜感染率。

角膜缘干细胞的鉴定、筛选与培养的研究进展

角膜缘干细胞(Li mbal epithelial stemcell,LESC)对于研究角膜上皮和重建眼表均有非常重要的意义。而如何鉴定、筛选以及筛选后如何培养扩增LESC仍是目前困扰干细胞研究的瓶颈。以往对LESC的定位仍集中于寻找相关标志物如P63、ABCG2、整合素等;而分离纯化干细胞的方法也有多种,如流式细胞仪筛选法、快速吸附法、细胞大小筛选法等;体外培养扩增干细胞亦集中于拟造一个干细胞niche环境即干细胞龛培养扩增LESC。本文对目前LESC一些热点标志物、分离方法以及体外拟造niche环境的研究做一综述。

低氧条件下人角膜上皮对棘阿米巴易感性的观察

目的 探讨低氧条件下人角膜上皮对棘阿米巴易感性的调控机制.方法 培养永生化人角膜上皮细胞（THCEs）,随机分为低氧（1％O2）棘阿米巴刺激组和常氧（21％O2）棘阿米巴刺激组（1×10^6/ml）.收集刺激细胞检测Toll样受体4（TLR4）及其通路分子髓样分化因子88（MyD88）、核因子κB（NF-κB）,以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素8（IL-8）和干扰素β（IFN-β） mRNA的表达水平.同时检测TLR4、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化IκBα （p-IκBα）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达水平.收取上清检测相关炎性因子IL-8、TNF-α和IFN-β的表达水平.结果 低氧条件下棘阿米巴诱导的TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α、IFN-β及IL-8 mRNA表达相较常氧条件下分别下调47％、41％、45％、53％、36％及50％,细胞培养上清TNF-α、IFN-β及IL-8蛋白表达分别下调46％、28％及35％.同时,低氧明显抑制p-IκBα和p-ERK1/2蛋白表达（分别下调56％、55％）,并促进IκBα的表达,与常氧棘阿米巴刺激组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）.结论 低氧抑制人角膜上皮细胞对棘阿米巴刺激引起的炎性反应,该反应可能是通过抑制TLR4及其信号通路来完成的.

用于眼部的同种异体阔筋膜不同保存方法的比较

目的比较同种异体阔筋膜在不同保存方法下生物学性能的改变,为临床应用提供依据。方法取新鲜同种异体阔筋膜,随机分成三组保存:Ⅰ组梯度乙醇固定保存,Ⅱ组深低温甘油保存,Ⅲ组复合抗生素溶液浅低温保存。于保存后不同时段检测理化特性和生物力学性能,观察其变化,以新鲜阔筋膜作为对照。结果Ⅰ组:保存1个月、3个月时阔筋膜理化特性正常,保存6个月时阔筋膜表面色泽及柔韧性能发生改变,HE染色结果显示,随着保存时间的延长,纤维排列密度逐渐降低。Ⅱ组和Ⅲ组:保存1个月、3个月和6个月时,阔筋膜理化特性均正常。三种方法保存6个月时生物力学性能与新鲜阔筋膜比较无统计学差异。结论三种保存方法均可用于同种异体阔筋膜的保存,在观察期内生物力学性能未见显著性变化。梯度乙醇固定保存在6个月后有形态学变化,深低温甘油保存和复合抗生素溶液浅低温保存则未观察到变化。长时间、大量保存同种异体阔筋膜时不建议使用梯度乙醇固定保存法。