至宝三鞭丸基于Nrf2/HO-1通路的抗疲劳作用机制研究

目的通过观察至宝三鞭丸(Zhibao Sanbian Pills)对Nrf2/HO-1信号通路的影响,研究其对小鼠的抗疲劳作用及机制。方法将ICR小鼠随机分为正常对照组、至宝三鞭丸低剂量(0.958 g·kg^(-1))组、至宝三鞭丸中剂量(4.79 g·kg^(-1))组、至宝三鞭丸高剂量(9.58 g·kg^(-1))组,每组25只,连续给药35 d,记录体质量。采用负重游泳实验评价至宝三鞭丸的抗疲劳作用;比色法检测各组小鼠血清中的尿素氮(Urea nitrogen,UN)和乳酸(Lactic acid)水平;比色法检测各组小鼠肝组织中的糖原(Liver glycogen)含量;Western Blot检测各组小鼠肝组织中核因子红细胞2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、核孔糖蛋白62(Sequestosome 1,P62/SQSTM1)、血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)和醌氧化还原酶1(Quinone oxidoreductase 1,NQO1)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比,至宝三鞭丸各剂量组可不同程度延长小鼠负重游泳时间,提高肝脏组织中糖原含量,下调血清中尿素氮水平,其中至宝三鞭丸高剂量(9.58 g·kg^(-1))组的差异具有统计学意义(均P<0.05);至宝三鞭丸虽具有降低乳酸堆积的作用趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);此外,至宝三鞭丸各剂量组均可提高肝组织中Nrf2、P62、HO-1和NQO1的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论至宝三鞭丸具有明显的抗疲劳作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路,从而提高机体的抗氧化能力有关。

基于TLR4/TNF⁃α/MMP⁃9信号通路研究马钱子水提物改善类风湿关节炎大鼠疼痛的作用机制

基于Toll样受体4(Toll⁃like receptors 4,TLR4)/肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)/基质金属蛋白酶⁃9(matrix metalloproteinase⁃9,MMP⁃9)信号通路探索马钱子水提物(aqueous extract of Strychni Semen,SA)改善类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠疼痛的作用机制。首先通过TCMSP、TCMID、ETCM等数据库以及相关文献查找马钱子的主要化学成分;借助TargetNet和SwissTargetPrediction等数据库查找马钱子化学成分的主要作用靶点;通过GeneCards、OMIM和TTD等数据库获取RA和疼痛的主要靶点;Venny 2.1.0平台获取三者的交集靶点;利用STRING平台和Cytoscape 3.6.1软件构建蛋白互作网络。随后利用AutoDock Vina软件进行分子对接验证。最后建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎(typeⅡcollagen⁃induced arthritis,CIA)大鼠模型,up⁃down法和丙酮法检测大鼠机械痛敏及冷痛敏反应,评价SA对CIA大鼠的镇痛作用;通过苏木素⁃伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)染色评价CIA大鼠关节组织病理学变化。采用免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测关键靶点蛋白的表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法(real⁃time PCR)检测关键靶点mRNA的表达水平。网络预测结果表明,马钱子可能通过作用于TLR4/TNF⁃α/MMP⁃9信号通路发挥镇痛作用。进一步分子对接结果显示,SA主要活性成分马钱子碱与TLR4、TNF⁃α、MMP⁃9蛋白受体均有较强结合能力。实验验证结果显示,SA对CIA大鼠的机械刺激痛敏及丙酮刺激冷痛敏反应均具有较好的改善作用(P<0.05,P<0.01),且可显著降低CIA大鼠关节组织病理学评分(P<0.01);此外,SA中、高剂量可显著降低TNF⁃α、TLR4、MMP⁃9蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。综上,SA对CIA大鼠机械刺激痛敏、丙酮刺激冷痛敏反应及关节组织病理改变均具有较好的改善作用,其作用机制可能与抑制TLR4/TNF⁃α/MMP⁃9信号通路过度活化有关。

马钱子水提物改善Ⅱ型胶原诱导型类风湿关节炎大鼠骨破坏的作用及机制研究

考察马钱子水提物(aqueous extract of Strychni Semen,SA)对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(typeⅡcollagen⁃induced arthri⁃tis,CIA)大鼠骨破坏的作用机制。将SD大鼠随机分为正常组,模型组,SA低、中、高剂量组(2.85、5.70、11.40 mg·kg^(-1)),甲氨蝶呤组。除正常组外,其他各组均制备CIA模型。二次免疫后,SA低、中、高剂量组给予不同剂量的SA,每日1次,甲氨蝶呤组每3 d给药1次,正常组和模型组给予0.3%羟甲基纤维素钠(CMC⁃Na),连续28 d。每3 d进行关节炎临床评分。采用微计算机断层扫描技术(micro computed tomography,Micro⁃CT)评价骨破坏。通过苏木素⁃伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)染色以及抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate⁃resistant acid phosphatase,TRAP)染色评价CIA大鼠关节组织病理学变化及破骨细胞数量。免疫组织化学法检测大鼠关节组织中白细胞介素⁃1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)的表达。免疫蛋白印记法检测大鼠关节组织中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen⁃activated protein kinase,MAPK)、磷脂酰肌醇3⁃激酶(phosphatidylinositol 3⁃kinase,PI3K)/蛋白激酶B(pro⁃tein kinase B,Akt)信号通路关键蛋白的表达。结果显示,SA各剂量均能不同程度地改善CIA大鼠炎症关节的红、肿和关节畸形,降低临床评分,抑制滑膜炎症、血管翳、软骨侵蚀和骨破坏,并减少骨组织中TRAP阳性细胞数;Micro⁃CT结果显示SA能够升高骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量,并降低骨表面体积比和骨小梁分离度。SA各剂量均能不同程度下调IL⁃1β、p⁃JNK、p⁃ERK、p⁃p38、PI3K、p⁃Akt蛋白表达水平。综上,SA能够改善CIA大鼠的疾病严重程度,减轻关节组织病理学和影像学改变,具有骨保护作用,其作用机制可能与抑制MAPK、PI3K/Akt信号通路过度活化有关。

中药马钱子研究进展的CiteSpace知识图谱分析

该研究系统检索中国知网(CNKI)和Web of Science核心集数据库关于中药马钱子的相关文献,运用文献计量学研究手段及CiteSpace 5.6.R5软件对研究作者、研究机构及关键词等内容进行可视化展示,并结合信息提取的方法对中药马钱子研究现状及发展趋势进行分析。经过筛选最终纳入中文文献1895篇,英文文献1599篇。中、英文文献作者分析显示蔡宝昌和陈军是马钱子研究发文量最多的作者,并形成稳定的核心研究团队;发文机构分析显示南京中医药大学和中国科学院分别是马钱子中文和英文文献发文量最多的研究机构,机构间合作较少;中、英文文献关键词分析显示马钱子的研究内容主要集中在成分分析、研究手段、受体靶点、临床应用、增效减毒措施等方面,其中马钱子提取物的成分研究、减毒分析、药物动力学评价及诱导癌细胞凋亡是目前研究热点。中药马钱子的研究仍处于发展时期,该研究为快速掌握马钱子的研究内容和判断研究热点提供参考。

基于CiteSpace对山豆根研究进展的可视化分析

运用CiteSpace 5.6.R5软件通过对中国知网(CNKI)数据库检索平台收录的1990—2020年山豆根相关研究的中文文献进行文献计量学分析,从论文的发文量、合作作者、合作机构、关键词的突现、共现、聚类进行分析及可视化展现。研究共纳入808篇中文文献,其中发文量最多的作者孙蓉,共计17篇,并形成以孙蓉为中心的研究团队;发文机构合作显示上海中医药大学药物安全评价研究中心是发文量最多的机构,共计29篇,还形成以山东省中医药研究院为核心的科研合作机构,并形成较为紧密的合作网络关系;文献关键词分析显示研究方向集中在山豆根的中医用药、药理机制、毒副反应、有效成分等,其中山豆根有效成分的药效与毒性研究成为热点趋势。