新型冠状病毒疫情下的痰液细胞学制片

随着人类社会快速发展,致病微生物也在不断演变,严重危害人类健康。新型冠状病毒肺炎[1](COVID-19)为新发急性呼吸道传染病,可以通过呼吸道飞沫传播、密切接触、密闭环境中高浓度气溶胶等传播,已成为全球性重大的公共卫生事件。面临如此严峻的疫情,给病理科痰液样本的制作带来了风险。因此如何对送检的痰样进行消毒和灭活,成为我们更为关注的问题。

EGFR基因突变与肺腺癌主要病理分型及标本类型的关系

背景与目的随着基因突变技术及靶向药物治疗如火如荼的开展,对肺腺癌的精准治疗越来越受到关注,目前肺腺癌中研究最多的是表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)。对于EGFR突变和病理分型的关系在不同标本中是否一致,目前不甚明了。本研究比较肺腺癌活检标本和手术切除标本中EGFR基因突变与病理分型的关系是否一致,探讨EGFR基因突变与肺腺癌病理分型的关系以及标本类型对EGFR基因检测的影响。方法收集肺腺癌手术切除标本(楔形肺切除、肺叶切除标本)163例,肺腺癌活检[粘膜活检、肺穿刺、支气管内超声引导针吸活检术(endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration,EBUSTBNA)标本]173例,按照2015年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)肺腺癌分型标准对其主要组织学分型确认(贴壁型、腺泡型、乳头型、微乳头型、实体型),行EGFR基因检测[基因测序法及突变扩增阻滞系统(amplification refractory mutation system,ARMS)]。分别对活检标本和手术切除标本进行统计。结果163例的肺腺癌手术切除标本中,102例EGFR基因突变,突变率为62.58%,173例的活检标本中,114例EGFR基因突变,突变率为65.9%。两组标本中EGFR突变率没有统计学差异(P>0.05)。两组标本中女性的EGFR突变率均明显高于男性(P<0.05)。手术切除标本中60岁以上患者的EGFR突变率明显低于60岁以下(P<0.05),而活检标本中EGFR突变与年龄无关(P>0.05)。在EGFR突变的两组标本中病理分型构成比不同(χ2=8.040,P<0.05)。手术切除标本肺腺癌中EGFR突变的102例中,腺泡型占54.9%(56例),贴壁型占23.53%(24例),乳头型占17.65%(18例),实体型占3.9%(4例),其中腺泡型所占比例最高,其次是贴壁型和乳头型,实体型则比例最少。19、21外显子单独突变最多,21外显子突变在贴壁型较其他两型高(P<0.05),19外显子突变在乳头型较贴壁型高(P<0.05)。腺泡型和乳头型比较,19、21外显子突变无统计学意义。活检标本肺腺癌中EGFR突变的114例中腺泡型占48.25%(55例),贴壁型占26.32%(30例),乳头型占11.4%(13例),微乳头型占4.39%(5例),实体型占9.65%(11例)。腺泡型所占比例最高,其次是贴壁型,乳头状、微乳头状和实体型最少。同样是19、21外显子单独突变最多,但不同病理分型中,19、21外显子突变均无显著差异(P>0.05)。结论肺腺癌中手术切除标本和活检标本EGFR突变率没有差异,且突变与性别有关,均为女性突变率高于男性。手术切除标本中EGFR突变与年龄有关,年龄越大突变率越低,而在活检标本中则与年龄无关。两组标本的病理分型构成比不同。19、21外显子单独突变最多。手术切除标本中EGFR突变类型与主要病理分型有关,21外显子单独突变中贴壁型最多,19外显子单独突变中乳头型最多。EGFR突变活检标本中,19、21外显子单独突变与主要病理分型无明显相关。

子宫内膜样腺癌中mTOR和eIF4E蛋白表达及临床意义

目的探讨mTOR和eIF4E蛋白在子宫内膜样腺癌发生中的作用和临床意义。方法采用免疫组化EliVision方法分别检测17例增殖期宫内膜、64例子宫内膜增生性病变和44例子宫内膜样腺癌中mTOR和eIF4E蛋白的表达情况。结果 mTOR在增殖期子宫内膜和单纯性增生宫内膜中均无强阳性表达,复杂性增生宫内膜和子宫内膜样腺癌中mTOR强阳性表达率分别为23.40%和52.27%,明显高于增殖期子宫内膜和单纯性增生宫内膜(P<0.05)。子宫内膜样腺癌中mTOR的强阳性表达率明显高于复杂性增生宫内膜和复杂性非典型增生中的宫内膜(P<0.05)。子宫内膜样腺癌中mTOR强阳性表达与肿瘤分化程度密切相关,Ⅱ、Ⅲ级子宫内膜样腺癌的强阳性表达率明显高于Ⅰ级(72.41%vs13.33%,P<0.05)。而与TNM分期和淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。eIF4E蛋白在增殖期宫内膜,单纯性增生宫内膜,复杂性增生宫内膜,子宫内膜样腺癌中的阳性表达率分别为52.94%,73.68%,85.11%和90.91%。复杂性增生宫内膜和子宫内膜样腺癌中eIF4E蛋白的阳性表达均明显高于其它各组(P<0.05),但两者差异无显著性(P>0.05)。eIF4E与子宫内膜样腺癌分化程度、TNM分期和有无淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。结论 mTOR、eIF4E蛋白在复杂性增生宫内膜和子宫内膜样腺癌中表达明显增强,提示两者可能在子宫内膜样腺癌发生中发挥一定作用。

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的研究

目的探讨基因芯片技术在检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的应用。方法收集21例临床诊断结核病患者体液标本经培养得到的分离菌液,进行基因芯片检测,包括利福平的rpoB基因位点和异烟肼的KatG和inhA基因位点,从而判断其耐药性。结果 21例样本中,利福平rpoB基因有10例突变,总突变率为47.6%,其中9例为531位点的(C-T)突变,1例526位点的(C-G)突变。与药敏试验的符合率为81.0%。异烟肼基因突变有6例,总突变率为28.6%,其中4例为KatG 315(G-C)突变,2例为inhA-15(C-T)突变。与药敏试验的符合率为90.5%。利福平的11例耐药株中,基因芯片检测8例为突变型,突变率为72.7%,在利福平的10例敏感株中,基因芯片检测2例为突变型,突变率为20.0%。在异烟肼的6例耐药株中,基因芯片检测5例为突变型,突变率为83.3%,在异烟肼的15例敏感株中,基因芯片检测1例为突变型,突变率为6.7%。结论基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。

胆固醇性肺炎中TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达及意义

目的检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和核因子-κB p65(nuclearfactor-kappaB p65,NF-κB p65)在胆固醇性肺炎泡沫细胞中的表达水平,探讨三者在胆固醇性肺炎发生中的作用、相互关系及临床意义。方法选择手术切除标本经病理证实为胆固醇性肺炎45例,普通型肺炎(对照组)25例,采用免疫组织化学方法检测2组TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达水平。结果胆固醇肺炎泡沫细胞中TLR4蛋白阳性表达率、MyD88蛋白和NF-κB p65蛋白强阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。TLR4阳性表达率、MyD88和NF-κB强阳性表达率均与性别不相关(P>0.05)。年龄<50岁者胆固醇肺炎泡沫细胞中TLR4阳性表达率、MyD88和NF-κB p65强阳性表达率均明显高于年龄≥50岁者,差异有统计学意义(P<0.05)。TLR4与MyD88、TLR4与NF-κB p65、NF-κB p65与MyD88在胆固醇性肺炎的表达中均呈明显正相关(r=0.476、0.523、0.491,P<0.05)。结论 TLR4、MyD88和NF-κB p65的阳性表达可能与胆固醇性肺炎的发生发展有关,三者可能在胆固醇性肺炎的发病中起协同作用。随着年龄增长,三者表达的阳性率均降低。

45例胆固醇性肺炎的临床病理及影像学观察

目的比较原发性和继发性胆固醇肺炎的临床病理及影像学特征,探讨胆固醇性肺炎的发病特点,为临床认识和诊疗该疾病提供理论依据。方法比较8例原发性胆固醇性肺炎和37例继发性胆固醇性肺炎的影像学表现,结合光镜下诊断、临床表现等总结病变特征。结果原发性和继发性胆固醇性肺炎临床表现为咳嗽咳痰偶有痰中带血、发热、胸闷气短等,2组差异无统计学意义(P>0.05)。原发性胆固醇性肺炎女性比例高于继发性胆固醇性肺炎,差异有统计学意义(P<0.05)。2组年龄>50岁比例和发病部位差异无统计学意义(P>0.05)。2组影像学表现构成比、环靶征、支气管充气充液征、伴胸膜增厚、伴纵膈淋巴结肿大差异均无统计学意义(P>0.05)。2组肿物最大径>3cm比例差异无统计学意义(P>0.05)。原发性和继发性胆固醇性肺炎光镜下均可见肺泡腔内出现泡沫细胞聚集、胆固醇裂隙多核巨细胞、间质淋巴细胞增生、肺泡上皮立方状增生。结论不同类型胆固醇性肺炎不能通过临床和影像学表现区分,其确诊仍需病理学诊断。胆固醇性肺炎影像学中结节肿块影、伴随表现环靶征和胸膜增厚均较多见以及光镜下泡沫细胞聚集等,可为临床诊疗提供理论依据。

多种呼吸道病原体的多重实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立多种呼吸道病原体的多重实时荧光定量聚合酶链反应（multiplex real-time-PCR,MRTPCR）检测方法。方法根据生物信息学分析结果选定各种呼吸道病原体的靶序列,建立MRT-PCR检测体系。构建质粒标准品,检测建立体系的敏感度、特异度和重复性,并运用MRT-PCR和单荧光定量PCR检测临床样本进行对比分析。结果成功建立了多种呼吸道病原体的MRT-PCR检测体系;该方法特异度较好,最低检测限为10copies/μL,重复性良好,变异系数为0.99%~2.50%,530例临床样本中,MRT-PCR检测的阳性率为59.2%（314/530）,单荧光定量PCR检测的阳性率为61.1%（324/530）,阳性检出率差异不大。结论建立快速、敏感、特异、稳定的MRT-PCR检测体系,具有良好的临床应用前景。

结核感染干扰素释放试验中的QFT-G试验在肺结核诊断中的应用评价

目的探讨结核感染干扰素释放试验中的QFT-G试验在肺结核诊断中的应用评价。方法采用QFT-G检测外周血结核特异性γ-干扰素的含量,同时与FQ-PCR检测痰中结核分枝杆菌核酸结核菌素、纯化蛋白质衍生物(PPD)皮试进行平行比较分析。结果 QFT-G、FQ-PCR和PPD三种方法的敏感度分别为:91.4%、84.2%、78.9%,特异性分别为86.9%、80.8%和54.8%,阳性预测值分别为91.0%、92.2%和71.1%,阴性预测值分别为66.2%、75.4%和46.3%,准确性分别为87.8%、85.0%和59.6%。结论 QFT-G较FQ-PCR和PPD有较高的敏感度、特异性和准确性,是一种诊断肺结核的有价值的检测方法。

T细胞斑点试验在结核诊断中的效果分析

目的分析结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检验诊断结核杆菌感染的价值。方法选取70例临床疑似肺结核患者的外周血标本,用T-SPOT.TB试剂盒进行γ-干扰素释放试验,分析其在结核诊断中的灵敏度、特异度、误诊率、漏诊率、诊断指数、约登指数、总一致性、调整一致性、阳性预测值、阴性预测值。结果 T-SPOT.TB检测诊断结核病的灵敏度为93.2%(41/44)、特异度为92.3%(24/26),误诊率为7.7%(2/26),漏诊率为6.8%(3/44),诊断指数为185.5%,约登指数为85.5%,总一致性为92.9%(65/70),调整一致性为92.4%,阳性预测值为95.3%(41/43),阴性预测值为88.9%(24/27)。结论 T-SPOT.TB检验诊断结核杆菌感染的效果好,值得在临床推广应用。

两种γ-干扰素释放试验检测结核菌感染的对比研究

目的比较结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)和结核杆菌特异性细胞免疫反应(A.TB)在结核诊断中的敏感性和特异性,分析两者的一致性。方法选取70例临床患者的外周血标本,分别采用T-SPOT.TB试剂盒和A.TB试剂盒进行γ-干扰素释放试验,比较两者在结核诊断中的敏感性、特异性及一致性。结果 T-SPOT.TB的特异性稍高于A.TB,二者的敏感性差异无统计学意义(P<0.05),两种方法的一致性较强(P=1.000,κ=0.819)。结论两种γ-干扰素释放试验的方法具有较好的一致性,可以根据临床需要选择不同的方法。

过表达THEM4对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell,HKC),将细胞随机分为正常对照组(5.5 mmol·L^(-1)normal glucose,Control)、高糖组(30 mmol·L^(-1)high glucose,HG)、高糖+p Yrads-4-THEM4质粒转染组(HG+THEM4)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(HG+V)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser473)、TGF-β1、α-SMA的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况。结果高糖刺激可导致人肾小管上皮细胞内THEM4表达降低,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强及ColⅠ、ColⅢ分泌;过表达THEM4能够逆转高糖刺激所导致人肾小管上皮细胞phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达,抑制ColⅠ、ColⅢ的分泌。结论过表达THEM4能够降低高糖诱导的胶原分泌,可能是通过抑制phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现的。

THEM4/Akt在糖尿病小鼠肾脏细胞外基质沉积中的作用

目的探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)/Akt在糖尿病小鼠肾脏中的表达以及与细胞外基质沉积的关系。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,饲养8周后处死小鼠,应用Western blot、免疫组化及RT-PCR技术检测糖尿病小鼠肾脏中THEM4/Akt、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ、FN蛋白及THEM4 mRNA的表达。结果与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠肾脏中THEM4蛋白低表达,相对于对照组下降了37.7%;同时伴随phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ及FN蛋白表达升高,较对照组分别上调了3.66、1.29、2.33、1.99及2.82倍;糖尿病小鼠肾小管间质可见细胞外基质沉积。结论糖尿病小鼠肾小管间质细胞外基质沉积可能是由于THEM4的低表达进而激活Akt,上调TGF-β1和α-SMA蛋白的表达而实现的。

THEM4与高糖诱导的人胚肾上皮细胞胶原分泌的关系

目的探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)在高糖刺激的人胚肾上皮细胞(human embryo kidney epithelial cells,HKC)内的表达以及与胶原分泌的关系。方法体外培养HKC,分别给予高糖(30mmol/L)刺激0、6、12、24和48h后,收集细胞。提取RNA,Real-time PCR检测THEM4mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况。结果(1)高糖培养HKC内THEM4表达明显降低,伴随phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1和α-SMA表达上调;THEM4与TGF-β1和α-SMA表达呈负相关(分别为:y=-5.100 9x+1.178,R^2=0.971 1;y=-3.803 3x+1.408,R^2=0.893 9)。(2)高糖可刺激HKC分泌ColⅠ、ColⅢ。结论高糖诱导的HKC胶原的分泌可能是通过抑制THEM4表达,上调phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达而实现的。

肺隐球菌病并发纵隔淋巴结结核误诊一例——病例报告及文献复习

肺隐球菌病是一种吸入隐球菌孢子而引起的肺急性、亚急性或慢性真菌病,易播散至中枢神经系统而导致隐球菌性脑膜炎,病死率和致残率高。近年肺隐球菌病的发病率呈增长趋势。肺隐球菌病的临床症状及体征、肺部影像学及实验室检查均缺乏特异性,因此极易漏诊、误诊。河北省胸科医院病理科近期会诊一例肺隐球菌病并发纵隔淋巴结结核患者,曾在外院就诊时经影像学及临床检查误诊为肺癌,术后病理误诊为肺结核,经我院会诊其病理切片及进行辅助检查（特殊染色、结核分枝杆菌核酸检测）后最终明确诊断。现结合相关文献回顾性分析其临床、影像及病理特点,以期提高其诊断水平,避免误诊误治。

TLR4和核因子-κB在胆固醇性肺炎中的表达

胆固醇性肺炎又称内源性脂质性肺炎，由于脂类物质在肺内积聚而导致。我们用免疫组织化学方法观察Toll样受体4（TLR4）和核因子-KB（NF—κB）p65在胆固醇性肺炎泡沫细胞中的表达情况，探讨两者在其发生、发展中的作用及相关关系，为临床诊疗提供一定的理论依据。