痛风清热方对急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18的影响

目的观察不同剂量痛风清热方对急性痛风性关节炎模型大鼠的踝关节滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18炎性因子表达的影响。方法选取SD雄性大鼠72只,随机分为6组,正常对照组、模型组、秋水仙碱组及痛风清热方高、中、低剂量组,每组12只。模型组、痛风清热方各剂量组及秋水仙碱组按经典Coderre大鼠动物模型造模,正常对照组在相应部位注射等量生理盐水。痛风清热方高、中、低剂量组分别予以60、30、15 g/kg痛风清热方混悬液灌胃干预,秋水仙碱组予以0.09 g/kg秋水仙碱悬浊液灌胃。于造模前、造模后4、8、12、24、48 h测量踝关节周径,测定受试踝关节肿胀指数;于造模后48 h取受试踝关节滑膜组织;采用HE染色观察踝关节滑膜组织病理变化;采用ELISA法检测组织中TNF-α、IL-1β、IL-18的含量。结果与正常对照组相比,模型组呈现明显的关节炎病理变化,在光镜下可见不同程度的滑膜上皮脱落、血管增生以及大量炎症细胞浸润;而痛风清热方各剂量组和秋水仙碱组则病理变化较少。与正常对照组比较,模型组、痛风清热方各剂量组、秋水仙碱组造模后4、8、12、24、48 h关节肿胀指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,痛风清热方各剂量组及秋水仙碱组造模后4、8、12、24、48 h关节肿胀指数各有不同程度降低(P<0.05),其中秋水仙碱组肿胀指数降低最明显,其次为痛风清热方高剂量组(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组、痛风清热方各剂量组及秋水仙碱组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平均增高(P<0.05);与模型组比较,痛风清热方各剂量组及秋水仙碱组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平均降低(P<0.05),其中秋水仙碱组TNF-α、IL-1β、IL-18水平降低最显著,其次为痛风清热方高剂量组(P<0.05)。结论痛风清热方对大鼠痛风性关节炎具有明显消肿作用。其作用可通过降低滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18炎性因子的表达,从而改善局部组织炎症作用,而且随着痛风清热方剂量的增加,其作用越强。

AQP2、HSP70在痛风湿热蕴结证模型中表达的意义

目的采用多因素复合的造模方法,先建立湿热模型,采用改良Coderre[1]法痛风造模,以复制痛风湿热蕴结证病证结合动物模型[2],探明水通道蛋白-2(AQP2)、热休克蛋白70(HSP70)在痛风湿热蕴结证中表达的意义,为模型建立指标评估及临床药物疗效判定指标做进一步实验验证。方法实验对象为SPF级雄性SD大鼠,将40只大鼠按随机数字表分为4组,分别为正常对照组、痛风模型组、湿热模型组、痛风湿热模型组,每组10只。对各组分别造模(方法详见正文造模部分),造模期间观察大鼠外观、精神状态、食饮量、体质量变化等一般情况,测定受试踝关节炎症指数、造模72 h各组大鼠的步态情况、血尿酸、尿液AQP2、血浆HSP70等指标。结果4组模型尿液AQP2含量具有显著差异;与正常对照组比较,湿热模型组、痛风湿热模型组尿液AQP2明显升高(P<0.05;P<0.05);与痛风模型组对比,湿热模型组、痛风湿热模型组尿液AQP2明显升高(P<0.05;P<0.05)。四组模型尿液HSP70含量具有显著差异;与正常对照组比较,湿热模型组、痛风湿热模型组血浆HSP70明显升高(P<0.05;P<0.05);与痛风模型组对比,湿热模型组、痛风湿热模型组血浆HSP70明显升高(P<0.05;P<0.05)。结论通过多因素(饮食+气候环境+致病因子+局部用药+全身用药)复合造模方法可以复制出痛风湿热蕴结证病证结合模型,而且AQP2、HSP70两个指标在判断痛风湿热蕴结证型时有着重要作用,AQP2和HSP70含量变化可作为痛风湿热蕴结证模型建立成功与否的评价参考指标。

基于P2X7R/NLRP3信号通道研究痛风清热方对急性痛风性关节炎大鼠局部组织中炎性信号表达的影响

目的:观察痛风清热方对急性痛风性关节炎模型大鼠的踝关节滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R基因和蛋白表达及TNF-α、IL-1β、IL-18等炎症因子水平的影响。方法:选取雄性SD大鼠48只,随机分为4组,每组12只。模型组、痛风清热方组及秋水仙碱组按经典Coderre大鼠动物模型造模,正常对照组在相应部位给予等体积生理盐水。痛风清热方组予痛风清热方水提液灌胃、秋水仙碱组予秋水仙碱悬液灌胃。干预后取受试踝关节滑膜组织,用RT-qPCR法测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA表达,用Western blot法测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18含量。结果:与正常对照组比较,模型组NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),与模型组比较,痛风清热方组及秋水仙碱组NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平显著升高(P<0.05),与模型组比较,痛风清热方组及秋水仙碱组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.05)。结论:痛风清热方能抑制急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达,并能降低滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-18水平,减少局部组织炎症反应。

基于“气道重塑”对三伏灸治疗支气管哮喘可行性探讨

该文以中医、西医两个角度出发,分析支气管哮喘的发病机制,研究支气管哮喘的治疗方法,阐述三伏灸治疗支气管哮喘的机理,结合临床案例观察,探讨三伏灸治疗支气管哮喘的可行性。

ATP及P2X7受体在三伏灸治疗支气管哮喘的作用机制研究

目的观察三伏灸治疗对支气管哮喘新西兰兔大椎穴和肺俞穴透析液腺苷酸含量及肺组织P2X7受体m RNA表达的影响。方法选取新西兰雄性兔子18只,随机分为3组。进行支气管哮喘气道重塑模型造模后,于"三伏天"以隔姜灸加中药贴敷法干预,疗程结束后,采用微透析的方法提取大椎穴、肺俞穴的透析液,再用超高效液相色谱法测定透析液中腺苷酸的含量。取新西兰兔肺组织,采用荧光定量PCR法观察各组肺组织P2X7受体m RNA表达的变化。结果与空白组相比,模型组大椎穴和肺俞穴的ATP浓度均明显升高(P<0.05),与模型组相比,治疗组的大椎穴和肺俞穴的ATP浓度均明显下降(P<0.05);模型组新西兰兔肺组织P2X7受体m RNA的表达较空白组明显升高(P<0.05),治疗组P2X7受体m RNA的表达较模型组明显下降(P<0.05)。结论 ATP可能通过P2X7受体参与了支气管哮喘的发生发展过程,三伏灸可通过下调局部穴位ATP的浓度,进而调整肺组织P2X7受体的表达量,达到治疗效果。

蠲痹历节清方对高尿酸血症大鼠肾脏中部分尿酸转运蛋白的影响

目的:探讨肾脏尿酸盐转运子1(Urate Transporter 1,URAT1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ATP-binding Cassette Superfamily G Member 2,ABCG2)、葡萄糖转运蛋白9(Glucose Transporter 9,GLUT9)等尿酸转运蛋白在蠲痹历节清方降低血尿酸(Serum Uric Acid,SUA)中的机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、苯溴马隆组(5 mg/kg)及蠲痹历节清方低、中、高剂量组(11,22,44 g/kg)。除空白组外,其余各组均建立高尿酸血症模型;苯溴马隆组和蠲痹历节清方组分别予相应浓度混悬液进行灌胃干预。最后收集大鼠腹主动脉血和双肾组织,采用全自动生化仪检测各组大鼠腹主动脉中血尿酸含量,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠肾脏中URAT1、GLUT9、ABCG2 mRNA和蛋白的表达。结果:与空白组相比,模型组血尿酸水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);空白组与模型组血尿酸水平存在明显差异,提示造模成功。与空白组比较,模型组URAT1及GLUT9的mRNA和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2的mRNA和蛋白的表达则显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,蠲痹历节清方各剂量组和苯溴马隆组URAT1及GLUT9的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2的mRNA和蛋白的表达则显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与蠲痹历节清方高剂量组比较,中、低剂量组URAT1及GLUT9的mRNA和蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2的mRNA和蛋白的表达则明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:蠲痹历节清方可通过抑制肾脏中URAT1、GLUT9 mRNA及蛋白表达,促进ABCG2的mRNA和蛋白的表达,来调节尿酸的分泌,减少尿酸的重吸收,增加尿酸的排泄,进而降低血尿酸水平,且随着剂量的升高,其降尿酸的作用逐渐增强。

与急性心肌缺血损伤相关体表敏化穴位的初步分布观察

目的:观察与急性心肌缺血损伤相关的体表伊文思蓝(EB)渗出点的分布,并和大鼠穴位的分布进行比较,为疾病状态下的穴位敏化提供实验依据。方法:SD大鼠80只,分为生理盐水对照组(20只)、模型组(60只)。采用背部皮下多部位注射异丙肾上腺素(60mg/kg)造成急性心肌缺血损伤模型(连续2次,间隔24h),当天尾静脉注射EB。观察造模当天(注射完成4h后)EB渗出点的分布。结果:急性心肌缺血损伤造成体表一些部位的神经源性炎性反应点,即EB渗出点,这些反应点的分布与穴位分布呈现一定的相关性;分布位置主要位于:脾、胃俞(74.41%),心俞(60.46%),肝俞(46.51%),肾俞(39.53%)。但这些EB渗出点在正常状态时很少或者不出现。结论:急性心肌缺血损伤可促使EB在体表渗出,渗出点主要分布在脾、胃俞,心俞等穴位,提示在疾病状态下沉寂的穴位可以被激活。

ATP及P2X7受体在三伏灸治疗哮喘中的作用

文章通过阐述三磷酸腺苷(ATP)和P2X7受体各自的定义以及两者的关系,分析ATP及P2X7受体与哮喘的联系,并结合三伏灸治疗哮喘的机制,探讨三伏灸对ATP及P2X7受体的影响,推断ATP及P2X7受体在三伏灸治疗哮喘中的作用,推测ATP及P2X7受体对三伏灸"气至病所"的影响。以此协助哮喘机制的确定、三伏灸疗效的提高,以及"气至病所"理论在临床上的更好运用,从而进一步深入了解中医经络机制的研究,提高哮喘临床诊断治疗水平。

嘌呤物质及其受体与哮喘关系的研究进展

在明确了胞外嘌呤物质为重要的信号传导分子的基础上,分析P1、P2两大类特异性嘌呤受体产生的生物学作用,概述嘌呤-受体对哮喘的影响,归纳出嘌呤-受体在哮喘发作与治疗中的作用,并在嘌呤物质及其特异性受体方面,对三伏灸治疗哮喘的理论研究的发展趋势进行分析,提出嘌呤受体的研究,将发展为探讨三伏灸治疗哮喘的作用机制的研究热点。