自噬介导的雷公藤甲素提高西妥昔单抗对SW480细胞治疗效果的实验研究

目的观察雷公藤甲素联合表皮生长因子受体单克隆抗体西妥昔单抗对人结直肠癌细胞SW480细胞株生物学行为的影响。方法雷公藤甲素、西妥昔单抗单独或联合作用于SW480细胞株, MTT法、细胞克隆实验检测细胞增殖抑制率;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测雷公藤甲素诱导细胞自噬性凋亡标记物p62、LC3-Ⅱ;雷公藤甲素及西妥昔单抗单独和联合作用细胞后,Western blot分析上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、Vimentin以及mTOR、Snail、Twist蛋白水平。结果雷公藤甲素及西妥昔单抗对SW480细胞的增殖抑制作用均呈剂量依赖性,两药联用可明显抑制SW480细胞增殖;雷公藤甲素诱导SW480细胞p62蛋白下调,LC3-Ⅱ上调,发生自噬性凋亡;雷公藤甲素单药组、联合用药组均能明显抑制SW480细胞发生EMT,其标记分子E-cadherin蛋白上调,Vimentin蛋白下调,关键分子Snail、Twist表达下调。结论雷公藤甲素联合西妥昔单抗抑制SW480细胞增殖和转移具有明显协同作用,雷公藤甲素通过抑制mTOR通路,可以诱导细胞自噬性凋亡,自噬介导的雷公藤甲素抑制肿瘤细胞EMT可能是逆转西妥昔单抗耐药的机制。

PI3K和MAPK抑制剂对胃肠道间质瘤细胞系GIST-T1细胞增殖和凋亡的影响

目的研究胃间质瘤中(磷脂酰肌醇-3-激酶)PI3K和(丝裂原活化蛋白激酶)MAPK信号通路对FOXO1的活性调节及胃间质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用PI3K信号通路抑制剂LY294002和MAPK信号通路特异性抑制剂UO126单独或联合处理细胞,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;Western blot检测FOXO1、p-FOXO1蛋白及信号下游蛋白Bcl2、Bax表达的变化;免疫荧光法检测FOXO1蛋白在GIST-T1细胞中的细胞定位的变化。结果与DMSO组相比,LY294002和UO126单独、联合处理组GIST-T1细胞增殖明显受到抑制(P<0.05),且呈时间依赖性。Western blot结果显示,总FOXO1蛋白表达水平未见显著变化,而p-FOXO1及Bcl2蛋白表达下降(P<0.05),Bax蛋白的表达增加(P<0.05)。免疫荧光显示FOXO1在GIST-T1细胞中的细胞核移位明显增多。LY294002和UO126联合处理GIST-T1细胞较药物单独应用时作用效果显著增强(P<0.05)。结论 LY294002和UO126能够抑制GIST-T1细胞增殖;PI3K和MAPK信号通路能通过调节FOXO1蛋白磷酸化水平,使其转录活性受到抑制,进而抑制Bcl2的表达,增加Bax的表达,且2种抑制剂作用效果具有协同效应。