MULT1转基因小鼠的基因型鉴定和表型的初步分析

目的对高亲和力NKG2D配体MULT1转基因小鼠进行基因型的鉴定和表型分析,并进行MULT1的初步功能研究。方法提取转基因小鼠的基因组DNA,PCR以鉴定转基因小鼠的基因型。提取小鼠尾部组织mRNA进行实时定量PCR,检测其基因转录情况。应用流式细胞分析仪及免疫组化对MULT1转基因小鼠多种组织细胞进行初步分析。结果获得鉴定阳性的MULT1转基因小鼠3 S品系25只,4 S品系13只。3 S和4 S品系的MULT1转基因小鼠的基因转录产物阳性,可用于进行下一步研究。MULT1主要表达在胸腺和小肠上皮间淋巴细胞(iIELs),且在胸腺和iIELs表面的表达与小鼠的年龄有关,而在脾脏细胞上基本不表达。iIELs流式细胞仪分析结果显示,CD8+T细胞比例降低,而CD4+CD25+调节性T细胞比例升高。结论经过基因型和表型的鉴定,表明已经成功构建MULT1转基因小鼠。对转基因小鼠表型的初步分析表明,MULT1可能与胸腺的发育、老化以及免疫调节相关。

重型肝炎中骨桥蛋白与IL-17的表达及临床意义

目的 探讨慢性重型乙型肝炎患者外周血中骨桥蛋白（OPN）和白细胞介素-17 （IL-17）的表达及临床意义.方法 于2009-2010年期间收集浙江大学医学院附属第一医院传染科住院的乙型肝炎引起的慢加急性肝功能衰竭（ACLF）患者20例,其中男11例,女9例,年龄37 ～ 65岁,中位数为39岁.并收集同期健康体检者40名作为对照组,其中男20名,女20名,年龄25 ～ 55岁,中位数35岁.采用ELISA法检测血浆中OPN及血清中IL-17的水平.并应用刀豆球蛋白A（ConA）诱导的小鼠暴发性肝炎模型,分析外周血及肝脏中OPN和IL-17的水平随时间的变化.分离人外周血单个核细胞（PBMC）,在ConA刺激的基础上,添加肿瘤坏死因子（TNF）-α或anti-TNF-α培养后,收集细胞培养上清,检测OPN和IL-17的水平.采用SPSS统计软件进行统计学处理,两组间比较采用t检验,OPN与IL-17之间关系采用Pearson相关性分析.结果 慢性重型乙型肝炎组IL-17和骨桥蛋白的水平[ （42.4±12.9） pg/ml和（1460.1±523.1） ng/ml]高于健康对照组[（10.6±4.8）pg/ml和（472.8 ±67.5） ng/ml],差异有统计学意义（t=2.387和3.570,P均＜0.05）.小鼠肝炎模型中,ConA注射后6h,外周血中的OPN即达到高峰,在12 h后OPN水平回落；而IL-17在24h内逐渐升高.注射后6h,肝脏组织中的OPN水平有一小的下降后逐渐升高并在12 h达到高峰；IL-17在ConA注射后6h达到高峰.慢性重型乙肝患者中骨桥蛋白与IL-17水平呈正相关（R2 =0.582,P=0.026）,TNF-a增加淋巴细胞对骨桥蛋白的分泌（P＜0.05）.结论 重型肝炎发生与骨桥蛋白和IL-17的表达水平有关,骨桥蛋白与IL-17水平呈正相关.TNF-α能促进淋巴细胞产生骨桥蛋白.