华南虎源产碱普罗威登斯菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】分离鉴定导致华南虎急性死亡的病原菌,确定其致病性及药物敏感性,为今后该病的防控提供科学依据。【方法】利用形态学、分子生物学确定分离菌株种类,并对其进行小鼠致病性试验、药敏试验。【结果】从死亡华南虎幼虎肠道中分离到1株细菌。分离菌在鲜血琼脂平板上呈现灰白色菌落,在麦康凯平板上呈现白色菌落;镜检为革兰阴性杆菌,命名为FJ/Tiger201802。结合16S rRNA测序结果,确定其为产碱普罗威登斯菌。遗传进化分析显示,FJ/Tiger201802与鱼源分离株HXM38(MZ734428.1)位于同一进化分支,亲缘关系较近,16S rRNA基因核苷酸相似性为99.5%。分离菌株接种试验小鼠,发病小鼠出现精神萎靡、被毛松乱、扎堆、眼角出现分泌物等症状,分离菌株对小鼠的半数致死量(LD50)为1×108.2CFU,病理剖检及病理组织学结果表明,FJ/Tiger201802的致病性较强,主要侵害小鼠的肝脏、肺脏、肠等组织器官。药敏试验结果表明,氨苄西林、氨曲南、头孢呋辛、头孢哌酮、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、头孢西叮、氧氟沙星、链霉素、妥布霉素和庆大霉素对分离菌株具有较强的体外生长抑制作用,对头孢唑林、头孢噻吩不敏感。【结论】本研究分离到1株华南虎源产碱普罗威登斯菌,可引起小鼠感染发病。研究结果可为产碱普罗威登斯菌病的临床诊断和治疗提供参考依据。

五株华南虎源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为了解福建省梅花山繁育研究所华南虎潜在病原菌的携带情况并分析相关生物学特性,本研究对2018—2021年从梅花山华南虎繁育研究所采集的104份华南虎组织、粪便、肛门拭纸、鼻拭纸进行细菌分离,并对分离菌进行生化鉴定、16S rRNA序列扩增、毒力基因检测、致病性试验、药敏试验。结果显示,通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、16S rRNA序列分析,确定从104份华南虎样本中分离到5株弗氏柠檬酸杆菌;5株分离菌16S rRNA序列的相似性为99.3%~99.7%,与其中18株不同来源的弗氏柠檬酸杆菌的相似性为98.3%~99.9%;遗传进化分析结果显示,5株分离菌与18株弗氏柠檬酸杆菌位于同一进化分支,亲缘关系较近;毒力基因检测结果显示,FJ/Tiger-1803、FJ/Tiger-1804、FJ/Tiger-1806、FJ/Tiger-1807株均携带ureD、ureE、ureABC基因,FJ/Tiger-1805株仅携带ureD、ureE基因;小鼠致病性试验结果显示,在相同浓度(1×10^(9) CFU/mL)下腹腔注射感染健康小鼠,FJ/Tiger-1803、FJ/Tiger-1806、FJ/Tiger-1804、FJ/Tiger-1807、FJ/Tiger-1805株对小鼠的致死率分别为100%、100%、80%、80%和0;药敏试验结果显示,分离菌株对14种抗生素具有不同的耐药性,其中对阿莫西林、青霉素G、万古霉素和红霉素的耐药性最强,且呈现多重耐药现象。综上,本研究从不同华南虎样本中分离获得了5株对小鼠具有较强致病性且耐药严重的华南虎源弗氏柠檬酸杆菌,临床上应引起重视。