检测B细胞成熟抗原的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR方法建立

目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。

情境教学法在《中医基础理论》教学中的应用

目的探讨情境教学法在《中医基础理论》课程中的应用效果。方法在《中医基础理论》课中采用情境教学法,并在课程结束后对学生进行问卷调查,了解情境教学法的教学效果。结果情境教学法可很好的激发学生的学习兴趣、提高学习主动性、且有助于掌握本门课程的知识、对本门课程教学内容的重点有更深刻的认识,对本科阶段要学习的其它主干课程有横向到纵向的贯通作用,起到连接理论课和临床课的作用。结论情境教学法是一种更好的教学方法,可以在《中医基础理论》课程教学中推广应用。

噬菌体抗体展示技术及其在抗新冠病毒抗体发现中的应用

噬菌体抗体展示技术是第一个也是目前应用最广泛的体外抗体筛选技术,可用于发现治疗各种疾病的全人源抗体。虽然存在不同的抗体发现方法,但噬菌体抗体展示技术已成为发现和优化靶标特异性单克隆抗体不可或缺的工具。研究人员可通过在丝状噬菌体上创建组合抗体库,从而在几周内获得抗原特异性抗体。在当前冠状病毒病(COVID-19)大流行的情况下,对中和抗体的研究激励着研究人员寻找出抗SARS-CoV-2的候选治疗药物。通过对噬菌体抗体库的筛选,目前已有许多不同的SARS-CoV-2中和抗体被发现。因此,本文综述了噬菌体抗体展示技术的原理,抗体库的构建、分类及淘选流程,并对其优点及局限性进行了讨论。此外,还总结了利用该技术发现抗SARS-CoV-2中和抗体的最新进展。旨为今后该技术在抗体发现中的应用提供理论支持。