褪黑素在不同疾病细胞焦亡作用中的研究进展

褪黑素(melatonin,MT)是机体释放的一种神经激素,具有抗感染、抗炎和抗氧化作用,调节机体的正常睡眠周期等生理功能。它可以作为一种有效的自由基清除剂或免疫增强剂,作用于全身各个系统与组织,对机体正常生理功能的维持有重要作用。细胞焦亡是细胞的一种程序性死亡模式,炎症小体与GSDMD(gasdermin D)家族是其重要的组成成分。当机体受到外界损伤后,炎症小体和GSDMD蛋白先后发生活化,导致细胞膜产生膜孔,大量胞液以及胞内物质释放,引发一系列炎症级联反应,造成细胞的继发性损伤。细胞焦亡与机体多种疾病的发生有密切的关系。作为一种抗炎和抗氧化的神经激素,褪黑素通过抑制细胞焦亡的发生,在心肌损伤、糖尿病、中枢神经系统疾病、肥胖、退行性变性疾病的发生发展与治疗中发挥重要作用。本文就褪黑素在机体不同疾病细胞焦亡中的影响和作用机制进行概述。

不同类型青少年脊柱侧弯支具治疗疗效观察

[目的]回顾性分析青少年脊柱侧弯支具治疗疗效,探讨不同类型青少年脊柱侧弯的支具选择及治疗措施。[方法]通过总结本科自2003年1月～2006年6月间接受支具治疗的青少年脊柱侧弯患者26例,男9例,女17例;年龄9～15岁(平均12.4岁),其中King-MoeⅠ型3例,Ⅱ型4例,Ⅲ型8例,Ⅳ型6例,Ⅴ型2例,半椎体畸形2例,胸段脊柱分节不良1例。分别采用胸腰骶支具外固定,支具固定前Cobb’s角平均29.9°,支具治疗后Cobb’s角平均20.8°。[结果]侧弯Cobb’s角平均矫正9.1°,矫正率35%。KingⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型支具治疗后有改善,Ⅴ型支具治疗后无改善,其中3例先天性侧弯支具治疗后加重。26例观察0.5～2.5年,Cobb’s角逐渐加大,失去支具治疗指征而采取手术者8例。[结论]支具治疗轻、中度I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型特发性脊柱侧弯效果良好;参与侧弯椎体数越多支具治疗疗效越好;柔韧度好者支具治疗疗效良好;复杂脊柱侧弯及先天性脊柱侧弯支具固定可以预防术前快速加重。

不同类型胫腓骨骨折对胫骨远侧关节面的影响

目的通过对不同类型胫腓骨骨折及胫骨远侧关节面变化的分析,探讨不同类型小腿骨折对踝关节的影响。方法对1997～2001年5年间住院病人中病历资料齐全的144例X线片做回顾性分析,测量胫骨远侧关节面与胫骨纵向中心线夹角。结果小腿下段螺旋形及斜形骨折时胫骨远侧关节面与胫骨纵向中心线夹角变小,与正常对照比较明显变小(P<0.01),小腿中段螺旋形及斜形骨折时胫骨远侧关节面与胫骨纵向中心线夹角变小,与正常对照比较变小(P<0.05)。结论小腿中、下段螺旋形及斜形骨折时易引起胫骨远侧关节面外侧角压缩,致使踝关节的运动轴线发生改变,易出现踝关节损伤。

胸椎管狭窄症手术指征及时机探讨

目的总结胸椎管狭窄症手术治疗结果,探讨胸椎管狭窄症手术指征及手术时机。方法回顾性分析影像学检查狭窄及有临床症状的胸椎管狭窄症患者17例。6例影像学多间隙狭窄患者中仅对有临床症状节段行手术治疗,而无临床症状的影像学狭窄节段未予手术减压。手术前后Frankel分级评定。结果17例随访6-57个月,Frankel A级1例无恢复;B级2例1例无恢复、1例恢复为C级;C级5例恢复为D级3例、E级2例;D级9例恢复为E级8例、1例仍为D级但有改善。结论有临床症状且有影像学证实的胸椎管狭窄应尽早行手术减压治疗,远离目标减压节段的影像学狭窄不需手术。

脊柱附件局部取骨植骨在青少年脊柱侧凸矫形中的应用

目的探讨青少年脊柱侧凸术中脊柱附件局部取骨植骨融合的可行性。方法选择12例经脊柱附件局部取骨植骨融合的青少年脊柱侧凸,12例均采取一期后路矫形,中华长城内固定系统或GSS椎弓根内固定系统矫形内固定,矫形后切取需要融合区域棘突、关节突及胸椎横突处外侧骨皮质,滑移错位植于关节突关节处。定期复查X线片观察脊柱侧凸Cobb角变化和内固定情况。结果术中出血300~600 ml,输血300~400 ml。术前Cobb角为45°~120°（87°±21°）,术后为15°~50°（27°±13°）,矫正率为69%。经12~19个月随访,X线提示11例达到骨性融合,未出现侧凸角度加大及断钉、断棒等并发症,疗效满意。1例术后5个月出现2枚下位椎弓根钉断钉,行二次手术。结论脊柱附件局部取骨、植骨融合可满足青少年脊柱侧凸矫形植骨要求,临床疗效满意。

非典型脊柱结核与肿瘤鉴别

目的探讨非典型脊柱结核与肿瘤的鉴别要点。方法回顾性分析我科自2004年1月-2007年12月间难以确定诊断的脊柱肿瘤或脊柱结核患者23例,其中证实为脊柱结核的9例,证实为脊柱肿瘤者14例;通过临床表现、影像学资料、病理检查,总结非典型脊柱结核特点及与脊柱肿瘤的鉴别点。结果9例非典型脊柱结核患者中2例X线片无变化,而MRI检查提示椎间隙及相邻椎体T2像高信号者,给予抗结核治疗痊愈;其余7例均行手术或病理确诊,经手术、抗结核治疗痊愈;其中不全瘫痪2例手术减压,病灶清除,术后抗结核治疗,瘫痪恢复。14例脊柱肿瘤中,有转移瘤5例,原发瘤9例,其中不全瘫痪3例,减压后好转。结论非典型脊柱结核具有病史长,结核中毒症状轻,ESR值较低等临床特点。MRI及ECT检查、组织活检及诊断治疗对其诊断具有非常重要意义。

人骨肉瘤细胞株中类肿瘤干细胞的分离培养及鉴定

目的:从人骨肉瘤株U2-OS中分离并鉴定类肿瘤干细胞。方法:用无血清培养法从骨肉瘤细胞株中分离出肿瘤细胞球,流式细胞术检测骨肉瘤细胞株中Stro-1的阳性表达率,MTT法检测其增殖能力,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法研究Stro-1阳性细胞中Stro-1 mRNA的表达,并将Stro-1阳性细胞和阴性细胞分别接种于NOD/SCID小鼠。结果:U2-OS中CD44的阳性百分率为5.67%,Stro-1阳性细胞形成的细胞球具有增殖和分化的能力,Stro-1阳性细胞中呈现Stro-1 mRNA的高表达,Stro-1阳性细胞能形成骨肉瘤。结论:骨肉瘤细胞株中存在类骨肉瘤干细胞,并具有自我更新和多向分化的能力。

人骨肉瘤细胞株U2-OS中分离并鉴定肿瘤干细胞

目的:采用无血清培养法从人骨肉瘤细胞株U2-OS中分离肿瘤干细胞,检测肿瘤干细胞特异性标志物Stro-1的表达。方法:实验于2006-02/2007-02在兰州大学第二医院骨科研究所完成。①实验材料:人骨肉瘤细胞株U2-OS由中国科学院细胞库提供;DMEM/F12(1∶1)培养基(Gibco公司);胎牛血清(杭州四季青公司);PCR引物由上海生物工程公司合成。②实验方法:取原代培养的骨肉瘤细胞经胰蛋白酶消化制备单细胞悬液,用含表皮生长因子20μg/L、碱性成纤维细胞生长因子20μg/L、L-谷氨酰胺2mmol/L、胰岛素4U/L、青霉素100U/mL和链霉素100U/mL,pH7.2～7.5的无血清DMEM/F12培养基重悬细胞,常规培养5～7d,待培养基中悬浮的肉瘤细胞球体积较大后,用无血清培养基重新吹打成单细胞悬液,按1∶2或1∶3比例传代。③实验评估:从上述骨肉瘤细胞株中分离出的肿瘤细胞球,用MTT法检测其增殖能力,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链法检测Stro-1阳性细胞中Stro-1 mRNA的表达,免疫细胞化学染色的方法检测分化后成骨细胞特异性抗原的表达。结果:①肿瘤干细胞增殖活性:增殖潜伏期约为24h,传代后1～2d即可见肿瘤干细胞形成,以后体积逐渐增大。第7天吸光度值最高,与0d吸光度值比较差异有显著性意义(P<0.01)。②免疫磁珠法分选Stro-1阳性细胞:分选的Stro-1+细胞接种于无血清培养基后,24～48h即可形成和原代肿瘤干细胞球形态一样的干细胞球,而Stro-1-细胞却不能形成肿瘤细胞球。③骨肉瘤干细胞中Stro-1mRNA的表达:Stro-1+细胞和Stro-1-细胞mRNA扩增产物的吸光度值二者比较差异有显著性意义(P<0.05)。④肿瘤干细胞分化:分化2周的肿瘤干细胞骨形态蛋白及Ⅰ型胶原酶均呈阳性表达。结论:骨肉瘤细胞株中存在骨肉瘤干细胞,并具有自我更新和多向分化的能力。

吉西他滨对人骨肉瘤细胞增殖及肿瘤转移相关基因1 mRNA表达的影响

目的探讨吉西他滨对体外培养的人骨肉瘤细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法体外传代培养人骨肉瘤MG-63细胞,实验时取对数生长期的细胞。将不同浓度(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 mg/L)的吉西他滨分别作用于MG-63细胞24 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对MG-63细胞的生长抑制率。用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测吉西他滨作用24 h后人骨肉瘤MG-63细胞肿瘤转移相关基因1(MTA1)mRNA的相对表达量。结果 0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 mg/L吉西他滨作用24 h后,MG-63细胞抑制率分别为(3.3±1.2)%、(3.7±1.0)%、(6.1±0.1)%、(8.0±1.9)%和(11.5±1.4)%,差异有统计学意义(F=30.568,P=0.0169);其中0.025、0.050 mg/L组MG-63抑制率均低于其他3组,0.100、0.200 mg/L组亦低于0.400 mg/L组(P<0.05)。0.100、0.200、0.400 mg/L吉西他滨作用于人骨肉瘤MG-63细胞24 h后,MTA1 mRNA相对表达量〔分别为(0.86±0.16)、(0.68±0.12)、(0.46±0.08)〕均低于空白对照组(1.01±0.15),且3个剂量吉西他滨组MTA1mRNA相对表达量依次降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论吉西他滨能抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,且有剂量依赖性;其作用机制可能是通过下调MTA1 mRNA的表达,从而抑制MG-63细胞转移,发挥抗骨肉瘤作用。

Nanog mRNA在骨肉瘤类肿瘤干细胞中的表达和意义

目的:观察骨肉瘤类肿瘤干细胞中Nanog基因的表达和意义.方法:用无血清培养法从骨肉瘤细胞株U2-OS和MG-63中分离培养悬浮细胞球,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Stro-1阳性细胞、Stro-1阴性细胞及悬浮生长细胞中Nanog mRNA的表达.结果:Stro-1阳性细胞和悬浮细胞Nanog mRNA表达水平为1.69±0.14和1.56±0.18,均高于Stro-1阴性细胞的表达水平(0.19±0.35,P<0.05).随着培养时间的延长,悬浮细胞球Nanog mRNA的表达比早期悬浮细胞球有所下降(P<0.05).结论:骨肉瘤类肿瘤干细胞高度表达Nanog mRNA,该基因可能有助于骨肉瘤类肿瘤干细胞自我更新和维持其未分化状态.

电刺激联合神经营养素3可促进脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞的增殖和分化

背景:由于外源性神经干细胞的获取有限,且容易产生免疫排斥以及伦理问题等严重制约其向临床转化,因此如何激活内源性神经干细胞并促进其生长增殖、分化,成为近期科研工作者究的热点。目的:探讨电刺激联合神经营养素3对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖及向神经元分化的作用。方法:将96只SD大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、电刺激组、电刺激+神经营养素3组,每组24只。假手术组仅暴露脊髓,其他3组大鼠应用改良Allen法建立脊髓损伤模型,造模后给予相应措施进行干预。造模后7,14,21,28 d时,以BBB评分评价大鼠后肢运动功能,电生理学检查运动诱发电位潜伏期;造模后28 d取材,进行苏木精-伊红染色观察脊髓病理变化,免疫组化染色观察内源性神经干细胞的增殖和分化情况。实验方案经兰州大学第二医院医学伦理委员会批准。结果与结论:①与假手术组相比,脊髓损伤组大鼠的BBB评分明显降低(P<0.01),脊髓组织可见大量炎症细胞浸润,并存在多个空洞;与脊髓损伤组相比,电刺激组、电刺激+神经营养素3组大鼠后肢功能开始逐渐恢复,电刺激+神经营养素3组BBB评分明显高于电刺激组(P<0.05),上述病理损伤变化明显改善;②脊髓损伤组7,14d及电刺激组大鼠7 d时双后肢运动诱发电位潜伏期均未测出,电刺激组、电刺激+神经营养素3组21,28 d时运动诱发电位潜伏期较模型组缩短(P<0.05),电刺激+神经营养素3组潜伏期缩短更显著(P<0.05);③BrdU和Nestin阳性细胞数、微管相关蛋白2的表达:电刺激+神经营养素3组>电刺激组>脊髓损伤组;胶质纤维酸性蛋白的表达:脊髓损伤组>电刺激组>电刺激+神经营养素3组。结果表明脊髓损伤大鼠经电刺激及神经营养素3干预后,促进内源性神经干细胞增殖和向神经元分化,病理损伤明显减轻,后肢运动功能显著改善。

C1后弓侧块、C2椎弓根螺钉在AndersonⅡ型齿状突骨折治疗中的应用

齿状突骨折在颈椎损伤中占5％～15％，老年患者的发生率更高。AndersonⅡ型骨折是最常见的齿状突损伤，常引起寰枢椎不稳定。因颅椎交界区具有特殊的解剖特征，齿状突骨折的有关手术涉及此区，治疗棘手。自2008年7月-2012年3月。我们应用后路经C1后弓侧块、

短程化疗联合病灶清除一期植骨内固定术治疗胸腰椎结核疗效分析

目的：探讨短程化疗联合病灶清除、一期植骨内固定治疗胸腰椎结核的疗效。方法采用短程化疗、病灶清除、一期植骨及前路或后路内固定术治疗70例胸腰椎结核患者。结果70例均获随访，时间1～5（3.5±0.8）年。患者神经症状得到改善，植骨骨性融合，后凸畸形矫正较满意。结论短程化疗联合病灶清除、一期植骨及前路或后路内固定术，对患者神经功能的恢复、病椎的融合、脊柱稳定性的重建等方面治疗效果满意。

陈旧性胸腰椎骨折并后凸畸形疼痛的手术疗效分析

陈旧性胸腰椎骨折并后凸畸形在临床上较常见,导致这种病因主要有前期延误治疗或治疗失败;非手术治疗失败的胸腰椎骨折病人中,不遵从医嘱,早日负重,导致前中柱不断楔形压缩,后凸逐渐加重是最为常见的原因[1,2]。由于脊柱重力线前移及椎体不稳,从而出现腰背部顽固性的疼痛和下肢神经功能障碍。目前治疗方法较多,但效果不明显,我科于2014年6月至2016年6月,对收治的30例陈旧性胸腰椎骨折合并后凸畸形的病人,采用后路在顶椎区经椎弓根楔形截骨矫形术进行治疗,现报告如下。

胸腰椎手术后切口早期深部感染的处理

目的探讨胸腰椎手术后深部切口感染的处理方法。方法将41例胸腰椎内固定手术后深部切口感染患者按处理方法分成4组,A组:早期彻底清创,保留内固定装置,置管冲洗引流;B组:早期切口换药感染未控制,然后进行手术彻底清创并保留内固定,负压封闭引流(VSD);C组:早期换药感染未控制,后行彻底清创并取出内固定,置管冲洗引流;D组:早期彻底清创,取出内固定,置管冲洗引流。结果 A、D组感染治疗时间、术后神经症状明显少于B、C组(P<0.05);A、B组术后腰痛症状明显少于C、D组(P<0.05)。结论胸腰椎手术后切口早期深部感染应早期诊断,彻底清创,置管冲洗引流,结合抗生素使用有效控制感染,可避免内固定取出,维持脊柱稳定性,减少并发症发生。

骨肉瘤中Wnt5a表达及其与血管生成的关系

目的探讨Wnt5a在骨肉瘤组织中的表达及其与血管生成的关系。方法采用免疫组化法检测45例骨肉瘤组织及15例骨软骨瘤组织中Wnt5a和CD34的表达,根据CD34染色结果进行微血管密度(microvessel density,MVD)计数,并分析Wnt5a表达和MVD计数与骨肉瘤患者临床病理特征及预后的关系。结果骨肉瘤组织中Wnt5a和CD34表达(阳性率分别为60. 0%和71. 1%)明显高于骨软骨瘤(阳性率分别为13. 3%和20. 0%)(P均<0. 05)。在骨肉瘤中,Wnt5a表达和MVD计数与Enneking分期和远处转移密切相关(P均<0. 05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型等无关。Spearman相关分析表明,Wnt5a蛋白表达与MVD计数呈正相关(r=0. 380,P=0. 010)。Kaplan-Meier生存分析发现,Wnt5a和MVD阳性患者的生存时间明显短于阴性患者(P均<0. 05)。结论骨肉瘤中Wnt5a呈高表达,可能与肿瘤血管生成相关,Wnt5a有望成为骨肉瘤抗血管生成治疗中新靶向分子。

Salter截骨联合股骨转子下截骨对髋关节发育的影响

目的探讨Salter截骨联合股骨转子下截骨对髋关节发育的影响。方法对51例(59髋)发育性髋关节发良不良行Salter截骨联合股骨转子下旋转、短缩截骨治疗。测量术前、术后X线片臼头指数、CE角、髋臼指数、患、健侧股骨头骨化中心直径比率(FHDR),比较术前、术后变化。结果随访1～5年,经Salter截骨联合股骨转子下旋转、短缩截骨治疗后,臼头指数、CE角、髋臼指数及患、健侧FHDR都有明显改善,尤其是在术后2～3年变化最为显著。疗效:优66.1%(39/59),良27.1%(16/59),可6.8%(4/59),优良率93.2%。结论Salter截骨联合股骨转子下截骨是一种早期治疗发育性髋关节发育不良疗效良好、可靠的手术方法。

纳洛酮对急性一氧化碳中毒大鼠血清丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶水平的影响

目的探讨急性一氧化碳中毒(ACOP)大鼠血清丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及超氧化物歧化酶(SOD)活性变化及纳洛酮的干预作用,加深对ACOP病理机制及纳洛酮治疗机制的认识。方法100只Wistar大鼠,随机.分为正常组(n=10)和ACOP组(n=90)。ACOP后10只死亡。余80只随机分为数量相等的两组:中毒照组(吸40%的氧)和纳洛酮干预组(吸40%的氧并每6h腹腔注射纳洛酮2mg/kg,共4次),分别于中毒后0、12、24、36h观察大鼠血清中MDA水平及GSH-Px、SOD活性的变化。结果中毒对照组12、24、36h的的血清SOD、GSH-Px活性水平均显著低于正常组,(均P<0.05),血清MDA水平均高于正常组(均P<0.05)。纳洛酮干预治疗组12、24、36h的血清SOD、GSH-Px活性水平均高于对照组(均P<0.05),血清MDA水平均低于对照组(均P<0.05)。结论ACOP后存在着严重的自由基氧化损伤过程;纳洛酮干预治疗能提高SOD、GSH-Px活性水平,降低血清MDA水平,减轻中毒后自由基氧化损伤的程度。

肿瘤干细胞与骨肉瘤相关研究进展

肿瘤研究中发现极少数有分化潜能,可无限增殖的亚细胞群具有干细胞特性,肿瘤的发生、生长、转移与之密切相关。肿瘤干细胞主要来源于成体干细胞,也可来源于祖细胞、分化细胞或骨髓细胞。白血病、乳腺癌、恶性脑瘤存在肿瘤干细胞已经明确,在前列腺癌、肺腺癌、肝癌、恶性黑色素瘤等多种肿瘤中也已初步分离出相应的肿瘤干细胞。骨肉瘤是常见的骨组织恶性肿瘤,肿瘤干细胞学说可更好地解释骨肉瘤恶性程度高、转移早、抗化疗等特性。应用无血清悬浮培养方法,干细胞样骨肉瘤细胞已初步得以分离、分析。该文就肿瘤于细胞及干细胞样骨肉瘤细胞的相关研究进展作一综述。

酒精导致大范围骨梗死

由多种原因导致的骨骼营养血管梗塞称为骨梗死，其病理变化与骨坏死相似。从解剖上区分，发生于骨骺-干骺端者称为骨坏死；发生于骨干-干骺端者称为骨梗死。现总结我科收治的3例因长期饮酒导致的大范围骨梗死患者，报告如下：