大鼠椎间盘巢源性干细胞的体外分离、培养和特性鉴定

目的:对大鼠椎间盘干细胞巢来源的干细胞(ISN-SCs)进行体外分离、培养和特性鉴定。方法:以10周龄雄性SD大鼠作为研究对象,按照解剖区域分离椎间盘干细胞巢组织(骺板外周软骨膜部分),用Ⅱ型胶原酶消化获取细胞后进行体外培养,选用第四代细胞进行干细胞相关特性的鉴定:采用流式细胞技术测定细胞周期;MTT法测定增殖曲线;流式细胞技术检测干细胞相关表型;q PCR检测干细胞相关基因的表达水平;细胞三系诱导分化培养后采用茜素红染色及钙钴染色检测成骨分化能力,阿利新蓝染色检测成软骨分化能力,油红O染色检测成脂肪分化能力,q PCR检测多向分化相关基因的表达水平。结果:大鼠ISN-SCs呈成纤维样细胞,多触角,具有贴壁能力,是一种慢周期细胞,高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD29、CD90、CD44,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子CD34、CD45、CD19、CD11b;成骨诱导分化后茜素红染色和钙钴染色均为阳性,成软骨分化后阿利新蓝染色阳性,成脂肪分化后油红O染色阳性,且各分化相关基因(成骨:Runx2、OPN、OCN;成软骨:SOX-9、COL2a1、ACAN;成脂肪:PPARγ、C/EBPα)表达水平较对照组显著增高,其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有相似的干细胞相关基因(NANOG、SOX-2、OCT-4)表达水平。结论:ISN-SCs具备干细胞的生物学特性,在体外经诱导后可以向软骨细胞及脂肪细胞转化,可为椎间盘的自体生物学修复研究提供良好的细胞来源。

椎间盘髓核细胞老化的微环境因素研究现状

椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）继发的脊柱不稳与椎管狭窄是引起腰腿痛的主要原因。老化的髓核细胞（nucleus pulposus cells,NPCs）在退变的椎间盘组织中广泛聚集,这些老化的NPCs能诱导并加速IDD。与细胞程序性凋亡不同,老化细胞仍有代谢活性,却停止分裂增殖,同时上调炎症因子和基质降解酶的表达,通过形成老化分泌表型（senescent-associated secretory phenotypes,SASP）来恶化邻近细胞生存的微环境。

结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测在脊柱结核诊断中的应用

目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测(TB-IGRA)在脊柱结核诊断中的应用价值。方法分析44例疑似脊柱结核病例资料,结合最终临床诊断,分为脊柱结核组和非脊柱结核组,计算TB-IGRA、抗结核抗体(TB-Ab)检测、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)及病理学检测4种方法诊断脊柱结核的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,采用kappa一致性检验评估TB-IGRA与TB-Ab检测、Xpert MTB/RIF及病理学检测结果的一致性。结果纳入的44例患者中,确诊或高度怀疑脊柱结核病28例,确诊非脊柱结核16例。TB-IGRA的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为85.7%、68.8%、82.8%和73.3%;TB-Ab检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为53.6%、87.5%、88.2%和51.9%;Xpert MTB/RIF的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为68.8%、71.4%、84.6%和50.0%;病理学检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为92.9%、100%、100%和88.9%。TB-IGRA与TB-Ab诊断结果一致性较差(κ=0.25),与Xpert MTB/RIF及病理学诊断结果一致性较高(κ=0.68、0.71)。结论TB-IGRA作为脊柱结核的辅助诊断手段,简便、快速,灵敏度和特异度较高,尤其适用于不方便获取病灶组织的患者。

大鼠尾椎与腰椎髓核组织及细胞的分离培养以及髓核表型的对比研究

目的:对大鼠尾椎与腰椎髓核组织及细胞进行体外分离、培养与观察,并对髓核软骨样细胞表型进行对比研究。方法:分别取12周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠腰椎与尾椎椎间盘,用分析天平称取髓核组织的质量。组织贴壁法分离培养髓核细胞;倒置相差显微镜观察HE染色的髓核组织及不同代次细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测第2代尾椎与腰椎髓核细胞髓核表型的差异。结果:腰椎髓核组织总质量及单个节段的质量均显著低于尾椎(P<0.05)。成功分离培养腰椎与尾椎髓核细胞。腰椎原代髓核细胞贴壁时间及70%融合时间显著高于尾椎原代髓核细胞(P<0.05);第2代腰椎髓核细胞中脊索样细胞数量显著低于尾椎髓核细胞(P<0.05)。HE染色示尾椎髓核组织中脊索样细胞较多,细胞外基质丰富,髓核样软骨细胞数目较少。第2代腰椎与尾椎髓核细胞凋亡率差异无统计学意义。实时PCR示第2代尾椎髓核细胞与腰椎髓核细胞相比,前者显著下调低氧诱导因子(Hif)2α、aggrecan、Brachyury(T)、细胞角蛋白(Krt)8、Krt18及Krt19的表达(P<0.05),且Brachyury(T)、Krt8、Krt18及Krt19的下调量更明显;显著上调碳酸酐酶(Car)3、Car12的表达(P<0.05)。结论:与腰椎髓核组织相比,尾椎髓核组织中的脊索样细胞数目更多,细胞活性更佳,组织量大,易取材,更适合作为椎间盘退变研究的种子细胞。体外单层培养的腰椎与尾椎髓核细胞表型存在差异。

碱性成纤维生长因子在椎间盘退变中作用的研究进展

椎间盘变性、突出等退行性改变是临床腰腿痛的常见病因,严重影响患者生活质量。尽管手术摘除突出的椎间盘能在一定程度上缓解腰腿痛的症状,但不能从根本上逆转椎间盘退行性改变。近年来,基于基因调控生物学修复的研究为早期从病因学层面治疗椎间盘退变打开崭新思路。碱性成纤维生长因子在椎间盘退变中有重要的生物学作用,能够促进血管形成、干预细胞增殖、分化、基质合成等。作者就碱性成纤维生长因子在椎间盘退变中的作用作一综述。

大鼠尾椎间盘髓核细胞的分离、培养与鉴定

目的：利用单纯Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠尾椎间盘获取髓核细胞,拓展组织工程髓核细胞的获取途径。方法：单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离培养大鼠尾椎间盘髓核细胞,镜下观察细胞形态,行HE、甲苯胺蓝、免疫组化及免疫荧光染色鉴定观察;取原代和传代细胞行细胞活性检测;取P1代细胞检测,绘制生长曲线并行细胞周期分析。结果：成功分离出大鼠尾椎间盘髓核细胞。P0代细胞中包含多角形类软骨样细胞、体积大且胞浆中含有大量空泡的脊索样细胞;经传代纯化后最终得到较高纯度的软骨样髓核细胞。台盼蓝细胞活力测定P0代活力高达99%,到P3代细胞活力稍下降,为95%~97%。细胞生长曲线及周期测定示P1代细胞有较强增殖潜能,活力旺盛。胞浆内蛋白聚糖被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫组化呈阳性,表现为黄褐色沉淀;Ⅱ型胶原免疫荧光染色示强阳性表达。结论：大鼠尾椎髓核组织可以提供代谢旺盛、维持类软骨表型的髓核细胞。

大黄芒硝外敷联合“消腮茶”口服治疗流行性腮腺炎30例临床研究

目的:探讨大黄芒硝外敷联合消腮茶口服治疗对流行性腮腺炎患者临床症状的改善作用。方法:流行性腮腺炎患者90例,按照随机原则分为大黄芒硝经皮给药联合消腮茶治疗组(治疗组)、利巴韦林对照组(对照1组)和消腮茶对照组(对照2组),每组30例。各组分别治疗7d为1个疗程。观察并比较3组患者治疗72h内局部皮温,治疗7d后腺肿胀程度和疼痛情况。结果:治疗48h、72h治疗组患者局部皮温明显低于对照1组、对照2组(P<0.01)。治疗7d后,治疗组局部肿胀程度明显轻于对照1组(P<0.01),与对照2组比较差异无统计学意义(P>0.05),对照1、2组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组疼痛程度明显轻于对照1组、对照2组(P<0.05,P<0.01),对照1、2组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大黄芒硝外敷联合消腮茶口服可有效改善流行性腮腺炎患者临床症状。

从选穴及手法探讨针刺治疗神经根型颈椎病

目的分析各医家治疗神经根型颈椎病所常用的穴位及行针手法,总结出针刺治疗神经根型颈椎病临床疗效好的穴位及行针手法。方法通过检索CNKI近年来发表的相关神经根型颈椎病针刺治疗的部分文章,从针刺的选穴及行针手法入手整理和分析。结果颈部取穴是必不可少的,其中夹脊、风池、肩井、大椎、天宗、肩髃、阿是穴、天柱使用频率最多,其次是大肠经的曲池、合谷,三焦经的外关、小肠经的后溪;行针手法方面雀啄刺法、龙虎交战针、齐刺针法、配合电针及、灸法等手法较常规针刺疗效显著。结论颈部穴位有椎骨下方发出的脊神经后支及伴行的动脉和静脉丛分布,针刺可抑制交感神经活动,改善血液循环,缓解血管痉挛状况,消除炎症水肿,改善局部组织缺血缺氧状态,促进外周炎性组织阿片肽的释放,从而消除颈椎病症状,此乃治标;配以大肠、小肠及三焦经等穴位,意在补养脾胃之后天以滋肾之先天,此乃治本;两者兼顾,从而达到标本兼治的效果。手法上采取电针、多种行针手法及灸法等联合,增加针感强度,提高患者治疗过程中的体验感,更有利于增加临床疗效。

人老化椎间盘髓核细胞体外老化模型的建立与细胞老化表型的初步研究

[目的]构建人椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)老化模型,探讨老化NPCs中生长因子的表达差异及其与椎间盘退变(intervertebral disc degeneretion,IDD)的关系。[方法]体外单层培养人正常NPCs系(Scien Cell 4800),连续1:2传代培养,诱导建立NPCs复制性老化(replication senescence cells,RS)模型;不同浓度双氧水作用于未老化细胞,模拟椎间盘氧化应激微环境,诱导建立应激诱导过早老化(stress induced premature senescence cells,SIPS)模型。细胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色检测NPCs阳性表达率。流式细胞仪检测G1期细胞比例及细胞凋亡率。CCK-8检测不同代次细胞增殖活性。应用Agilent表达谱芯片初步筛选出正常与老化NPCs中差异性表达的生长因子,实时荧光定量PCR进一步验证所筛选生长因子的表达差异。[结果]NPCs经连续传代、双氧水诱导可分别构建RS模型及SIPS模型。两种老化模型SA-β-Gal阳性表达的细胞比例均高于70%,G1期细胞比例均高于80%,凋亡率均低于10%。Agilent表达谱芯片筛选出的碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)与血管内皮生长因子a(vascular endothelial growth factor a,VEGF-a)在不同老化模型中,表达差异有统计学意义(P<0.05),特别是b FGF在SIPS模型中的表达显著高于RS模型(P<0.05)。两种老化模型中的b FGF表达量显著高于正常组(P<0.05)。[结论]双氧水诱导所引起的氧化应激可促进细胞过早老化。老化NPCs上调b FGF,且SIPS模型中的上调幅度显著高于RS,SIPS可能比RS更加上调b FGF。不同老化诱导条件下,生长因子的表达可能存在差异,b FGF可能参与椎间盘再血管化及自我修复。

高血糖中老年患者左股骨近端骨密度研究

目的:研究高血糖中老年患者左股骨颈近端骨密度及部分实验指标的变化规律,为骨质疏松的防治提供新的科学依据。方法:收集双能X线骨密度仪测定的188例左股骨颈近端骨密度及部分实验指标资料,选取相近血糖正常的人群作对照组,进行分类比较。结果:高血糖组患者的左股骨近端(TROCH,INTER,NECK,WARD及HTOT)的骨密度均低于对照组,两组及两组同性别组间差异有统计学意义(P<0.05),其中Ward三角区的骨密度最低,Inter区的骨密度最高。高血糖组、对照组及两组同性别间的比较,HbAlc,FPG,TG,TC及h-CRP均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),IGF-1较对照组略低,差异无统计学意义(P>0.05)。骨密度与IGF1正相关,与FPG,TG,TC及h-CRP负相关。结论:高血糖中老年患者骨密度降低明显,骨质流失严重,更容易发生骨质疏松,应该进行早期干预及治疗,降低老年骨折发生率。