密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析

[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。

CD4^(+)T细胞相关细胞因子在人兽共患寄生虫感染中的作用研究进展

CD4^(+)T细胞亚群及其分泌的细胞因子在寄生虫感染过程中发挥着极其重要的调控作用,与寄生虫感染的发生、发展、预后密切相关。已知CD4^(+)T细胞亚群包括Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th9细胞以及Tfh细胞等,机体的Th1/Th2、Th17/Treg细胞处于动态平衡,但在特异性抗原刺激下,这种动态平衡会被打破。目前可用来预防或治疗寄生虫病的疫苗和药物较少,主要原因是对寄生虫病致病机制的认识有限。研究表明,寄生虫感染导致宿主炎症以及刺激宿主细胞介导的免疫反应有关。论文主要阐述与CD4^(+)T细胞亚群相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-9及IL-21在寄生虫感染中的作用,以期为探索和研究寄生虫病的发病机制及寄生虫在宿主体内的免疫逃逸机制提供参考。

猪δ冠状病毒重庆流行株的诊断与N基因序列分析

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),命名为CQ2023株。该毒株N基因序列全长1029 bp,与30株GenBank中登录的参考毒株N基因序列比对显示,核苷酸序列相似性为96.7%~99.4%,其中PDCoV CQ2023株与CHN-HeN06-2022株的相似性最高,为99.4%。遗传进化分析显示PDCoV CQ2023株属于国内流行株,与国内PDCoV毒株CHN-HeN06-2022等处于同一进化分支,亲缘关系最近。该次研究成功鉴定出该猪场腹泻疫情由PDCoV感染引起,并进行了N基因序列分析,为PDCoV的流行病学研究、遗传进化、预防及诊断试剂的研究提供数据支持。

中药诃子、余甘子对奶牛乳房炎病原菌体外抑制作用的研究

将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6h,蒸干水分,得到深棕色的物质,收率分别为10%和10.5%。将其用水稀释,得到本次参试的药物贮存液,采用试管法测定它们以及1:1和2:1混合物对奶牛乳房炎病原菌(金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞杆菌、产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)以及这四种等量混合菌)的最低抑菌浓度。结果显示,诃子、余甘子对这四种病菌均有较强的抑菌作用。1:1混合时,两种药物对于金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌的抑制有协同作用,对于ETEC的抑制有拮抗作用;对于金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和四种菌的等量复混菌无相互作用。2:1混合时,两种药物对于假单胞杆菌的抑制有协同作用,对于ETEC的抑制无相互作用;对于金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和四种菌复混菌的抑制有相加作用。

诃子等中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌体外抑制作用研究

猪呼吸系统疾病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来治疗病猪,但易产生副作用。筛选适宜中药来治疗猪呼吸系统疾病是养猪业发展的迫切需求。本研究将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6 h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6 h,蒸干溶剂,收率分别为10.0%、10.5%、11.0%和10.0%。将诃子、余甘子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80溶液稀释,得到药物储存液,采用试管法测定诃子及其与其他中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌(A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌及副猪嗜血杆菌)的最低抑菌浓度。结果显示,诃子对猪呼吸系统疾病病原菌有较强的抑菌作用,余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与诃子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,大多数能协同诃子抑制猪呼吸系统疾病常见病原菌,其作用强弱顺序为诃子/余甘子/多刺绿绒蒿(3∶1∶1)>诃子/余甘子/螃蟹甲(3∶1∶1)>诃子/螃蟹甲(2∶1)>诃子>诃子/多刺绿绒蒿(2∶1)>诃子/余甘子(1∶1)。这些药物组合可为猪呼吸系统疾病防治药物的研发提供参考。

发酵床养猪的优势和劣势分析

发酵床饲养模式是养猪业中的一种新型优质、安全、高效的饲养方式,不仅可减少养猪业的粪尿排放,提高猪肉品质和动物的免疫功能,同时在促进猪只生产性能,改善养殖环境等方面有重要意义。本文从发酵床的类型、优势和存在的问题等方面进行探讨,旨在指导养猪生产。

四川省部分规模养殖场猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪圆环病毒2型感染情况调查

为了解四川省规模化养猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)2种猪免疫抑制类病原的感染情况,采用荧光定量RT-PCR/PCR方法,对898份采自四川省12个地区规模化猪场的组织、精液及血液样品进行PRRSV和PCV2检测与分析。结果显示:至少检出PRRSV和PCV2中一种病原的样品占67.82%,其中组织样品阳性率最高(32.96%),其次为血液(27.17%)、精液(7.68%)。从不同类别样品感染情况看,组织样品中PRRSV+PCV2混合感染率最高,达33.53%;精液样品中PRRSV单感染率最高,达53.00%;血液样品中PCV2单感染率最高,达45.27%。从不同感染类型情况看,PCV2单感染、PRRSV单感染、PRRSV+PCV2混合感染率依次下降,分别为33.18%、20.71%、13.92%;PRRSV单感染、PRRSV+PCV2混合感染率最高的均为组织样品,分别占10.58%、12.80%,PCV2单感染率最高的为血液样品,达22.94%。从不同地区感染情况看,12个地区中PRRSV和PCV2中至少一种病原为阳性的阳性率为52.17%~82.81%,其中绵阳市最高;PRRSV单感染率最高的为绵阳市(37.50%),PCV2单感染率最高的为内江市(44.44%),PCV2+PRRSV混合感染率最高的为乐山市(20.29%)。结果表明:四川省规模化养猪场中普遍存在PRRSV、PCV2单感染和混合感染,其中内江、绵阳、乐山等地的感染情况较为严重;组织样品总阳性率最高并以PRRSV+PCV2混合感染为主,精液和血液样品分别以PRRSV单感染、PCV2单感染为主。

中药余甘子对猪腹泻病原菌体外抑制作用的研究

猪腹泻病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来进行治疗,但易产生副作用。寻找中药来替代抗生素治疗猪腹泻病,是生猪养殖业发展的大方向和迫切需求。研究将中药余甘子、诃子用中性去离子水索氏提取4~6h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6h,蒸干溶剂,收率分别为10.5%、10%、11%和10%。将余甘子、诃子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80水溶液稀释得到试验用药物贮存液,采用试管法测定余甘子及它与其他中药的组合对猪腹泻病原菌(大肠杆菌,猪霍乱沙门氏菌,以及这2种细菌混合菌)的最低抑菌浓度,结果显示:余甘子对猪腹泻病原菌有较强的抑菌作用。诃子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与余甘子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,多数能协同余甘子抑制猪腹泻常见病原菌。

藏猪呼吸道疾病临床样本中病毒的宏基因组学分析

为了解我国川西高原地区藏猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)相关病毒的种类和流行情况,本研究从四川省甘孜藏族自治州地区采集藏猪呼吸道样本共计119份,其中健康藏猪鼻拭子66份(来自6个猪场),PRDC明显症状的藏猪鼻拭子、肺组织及肺泡灌洗液53份(11个猪场)。将健康组和发病组样本制成两个pool样提取总核酸反转录成cDNA,建库后使用Illunima novaseq测序。经序列分析表明,健康藏猪呼吸道样品主要以细菌噬菌体为主,动物相关病毒仅检测到疱疹病毒科(Herpesviridae)的mardivirus。发病组样本的病毒种群包括14个病毒科的16种病毒,可引起PRDC的病毒有猪圆环病毒2型(PCV-2)、细环病毒(TTSuV)、猪细胞巨化病毒(PCMV)和非洲猪瘟病毒(ASFV)等。使用SOAPdenovo软件组装出两株PCV-2,三株TTSuV和一株Porprismacovirus的全基因组。遗传演化分析结果显示,两株PCV-2属于PCV-2d亚型,三株TTSuV均属于k2型,其中SCgz-1属于k2b亚型,SCgz-2和SCgz-3属于k2a亚型。Porprismacovirus毒株与越南的人源Human 16806x66_213毒株聚为单独一分支,而与猪源毒株则遗传距离较远。RDP4重组分析显示,该毒株为人源Human 16806x66_213毒株和猪源Porcine 17668x82_593毒株的重组毒株,该重组方式在国际上未见报道。本研究首次对川西高原地区藏猪的呼吸道相关病毒开展调查研究,发现藏猪呼吸道疾病相关病毒种类繁多,并存在不同家畜间、人和家畜间跨种传播的可能,应予以更多关注。同时,本研究也为藏猪呼吸道疾病的防控提供参考。

Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型VP60蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体,构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒,为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP 60基因序列,将其与腺病毒穿梭质粒进行重组,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建重组腺病毒穿梭质粒,并利用酶切与测序对重组腺病毒穿梭质粒进行鉴定;采用Ad Max腺病毒包装系统,基于HEK293细胞进行穿梭质粒与腺病毒骨架质粒的定点同源重组,构建重组腺病毒Ad5-RHDV2-VP60并感染HEK293细胞,通过RT-PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)对重组腺病毒进行表达验证;利用Reed-Muench方法测定重组腺病毒的病毒滴度。【结果】重组腺病毒穿梭质粒酶切鉴定结果可见2条大小分别为3895和1752 bp的条带,测序比对结果显示,其与GenBank中公布的相应序列相似性>99%,表明穿梭质粒构建成功。RT-PCR结果可见大小约为515 bp的特异性条带;Western blotting结果显示,大小约为60 ku的VP60蛋白特异性条带;IFA观察结果显示,感染重组腺病毒的HEK293细胞产生了绿色荧光,表明重组病毒能在HEK293细胞中表达VP60蛋白,且该蛋白具有良好的抗原性;病毒滴度测定结果显示,初代重组腺病毒的TCID_(50)为10^(5.5)/0.1 mL。【结论】本试验构建了含RHDV2 VP 60基因的重组腺病毒,并成功表达了RHDV2 VP60蛋白,为进一步研究开发RHDV2疫苗提供了病毒模型。

利用16S rDNA扩增子测序技术分析不同品种猪盲肠微生物菌落多样性

为了研究中国特有地方猪种丫杈猪、青裕猪和乌金猪盲肠微生物菌落的组成,揭示地方猪种耐粗饲特性的机理,本试验采用16SrDNA扩增子测序技术比较分析了体重90kg左右的丫杈猪、青裕猪和乌金猪盲肠微生物菌群的多样性。结果显示,在门水平上3个品种猪的核心菌群均为拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes),在属的水平上均为普雷沃菌属(Prevotella)和拟杆菌属(Bacteroides);在3个猪种的盲肠中均发现了与降解纤维素相关的细菌,其中纤维杆菌属(Fibrobacter)和梭菌属(Clostridium)在丫杈猪盲肠中的数量显著高于青裕猪和乌金猪(P<0.05),普雷沃氏菌属(Prevotella)在丫杈猪盲肠内的数量显著高于乌金猪(P<0.05),拟杆菌属(Bacteroides)在青裕猪盲肠内的数量显著高于丫杈猪(P<0.05),螺旋体门(Spirochaetes)在青裕猪盲肠内的数量显著高于乌金猪(P<0.05)。结果表明,3个品种猪盲肠内微生物菌群分布的种类相似度高,但分布规律和数量存在显著差异;对与纤维素消化相关菌群的分析表明,丫杈猪对纤维消化的能力是3个品种中最强的,其次是青裕猪,乌金猪最弱。

消毒剂对规模化蛋鸡舍消毒效果的影响因素研究

本文对用最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)以及定量杀菌能力测定筛选出的4种消毒剂在规模化蛋鸡舍中消毒效果的影响因素进行研究,为建立规模化蛋鸡舍消毒程序提供依据。试验采用正交设计表L16(45)设计消毒种类、消毒浓度(mg/L)、喷雾量(mL/m3)、消毒时间(min)为影响消毒效果的因素,每个因素设计4个水平,用极差分析评价各因素对空气消毒效果的影响主次,用方差分析进行显著性检验。结果:消毒剂浓度对消毒效果影响极显著(P<0.01);消毒剂种类对消毒效果影响极显著(P<0.01);喷雾量对消毒效果影响显著(P<0.05);消毒时间对消毒效果影响不显著(P>0.05)。结果表明,在对规模化蛋鸡舍进行消毒时,使用同种消毒剂情况下浓度是影响消毒效果的主要因素。

抗恩拉霉素多克隆抗体的制备

采用戊二醛法、偶联半抗原恩拉霉素(Er)和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备人工免疫抗原和人工包被抗原,分别为Er-BSA和Er-OVA。经紫外光谱鉴定,在紫外270~280 nm波长处得到Er-BSA和Er-OVA特征性偶联吸收峰;表明试验人工合成的2个人工抗原均偶联成功。人工免疫抗原和人工包被抗原的偶联比均达到26∶1,通过免疫新西兰大白兔获得抗Er多抗血清,并对抗体效价进行测定;为后续建立检测Er免疫学快速检测方法奠定了研究基础。

不同品种猪感染HP-PRRSV后肺组织间PRRSV受体基因差异表达的研究

为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14d肺脏中HSPG2、SIGLEC1、CD163、VIM和NMMHC-ⅡA5个PRRSV受体基因的差异表达情况。结果显示,藏猪感染JXA1分离株后4和14d肺脏中HSPG2的表达量显著高于感染前(P<0.05),而感染后7dHSPG2的表达量显著低于感染前(P<0.05),藏梅猪在感染后14dHSPG2的表达量显著高于感染后7d(P<0.05);藏猪感染后4和14d肺脏中SIGLEC1的表达量显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪感染后4、7和14dSIGLEC1的表达量均显著低于感染前(P<0.05);藏猪和藏梅猪感染后14d肺脏中CD163的表达量均显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪则感染后7和14d均显著低于感染前(P<0.05);藏猪感染后7d肺脏中VIM的表达量显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪在感染后7d显著低于感染前(P<0.05);藏梅猪感染后4d肺脏中NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪在感染后4和14dNMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P<0.05)。结果表明,5个PRRSV受体基因中,SIGLEC1和VIM基因可能是影响藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对JXA1分离株易感性存在差异的潜在关键基因。

规模化猪场不同品种猪重要疾病的免疫效果分析

试验采用ELISA方法检测了某多品种混养的规模化猪场4个品种猪的4种重要疾病的抗体情况,并对该场的免疫程序进行评价,为制定科学的免疫程序提供参考。结果显示,藏猪、杜洛克、巴克夏、约克猪瘟抗体合格率分别为100%、98.3%、100%、95%,平均为98.3%;伪狂犬病抗体合格率分别为98.3%、95%、100%、98.3%,平均为97.9%;口蹄疫抗体合格率分别为18.3%、26.7%、60%、15%,平均为30%;猪繁殖与呼吸综合征抗体合格率分别为51.7%、16.7%、11.7%、28.3%,平均为27.1%。由此可见,此规模化猪场猪瘟和伪狂犬病抗体水平理想,口蹄疫和猪繁殖与呼吸综合征抗体水平不理想,并且4个不同品种猪在口蹄疫和猪繁殖与呼吸综合征的免疫上不适用相同的免疫程序。

应激引起种猪急性死亡的诊断与治疗

长途运输作为一种应激原常常会导致运送的猪只发生死亡和发病，Vander Meulenl等（2001）证明长途运输的应激能够降低肠道内pH值，使肠道的渗透性增加，运输结束后肠道的渗透性达到最高峰。渗透性的增加导致肠道内的细菌和内毒素从肠道迁移至全身血液循环中，这可能能够解释运输后疾病增加的原因。2010年9月下旬，因猪场搬迁某集约化养猪场将猪只进行长途运输，猪场搬迁后20日间陆续出现11头种猪急性死亡。 通过对急性死亡种猪临床症状观察，并采集急性死亡猪的病料，对可疑引起猪死亡临床症状和病理解剖变化的病原进行实验室诊断，并且进行细菌分离，然后检测分离出的细菌对18种常见药物的敏感性试验，为临床治疗提供依据。

鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用

试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。

中药(赶黄草+波棱瓜子)提取物对小鼠维生素A急性中毒早期的治疗效果

【目的】研究中药提取物及其组方对小鼠维生素A急性中毒早期的治疗效果,为动物维生素A急性中毒提供有效的治疗手段,进而促进伴侣动物医疗的健康发展。【方法】选取健康成年昆明种小鼠一次性腹腔注射维生素A(按1500 mg/kg计)建立维生素A中毒致骨骼发育不良综合症小鼠模型,4周后采集血液测定生化指标。将维生素A急性中毒小鼠随机分成6组(T1~T6)进行治疗:T1组为空白对照组(不给药);T2组为10.0 mL/kg赶黄草水粗提物;T3组为1.0 mL/kg波棱瓜子粗提油;T4组为5.0 mL/kg赶黄草水粗提物+0.5 mL/kg波棱瓜子粗提油;T5组为5.0 mL/kg赶黄草水粗提物+0.5 mL/kg波棱瓜子粗提油+1.0 g/kg黄芪多糖;T6组为阳性对照,安宫牛黄丸(1/3粒,约1 g)。各给药处理组均连续灌胃给药7 d。在开始给药的第2、4、6和8 d分别采集小鼠静脉血制备血清,用于谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)、磷(P)和甲状旁腺素(PTH)等血清生化指标测定。【结果】除T1组外,各给药处理组维生素A急性中毒小鼠的血清生化指标均发生明显变化,ALT、AST和ALP活性及Ca和P含量整体上均呈下降趋势,PTH含量则呈上升趋势。综合各项血清生化指标的变化趋势,可确定T5组的小鼠维生素A急性中毒治疗效果最佳,至给药第8 d,维生素A急性中毒小鼠血清ALT活性降至3.78 ng/mL,AST活性降至628.14 pg/mL,ALP活性降至2.35 ng/mL,Ca含量降至3.29 mmol/L,P含量降至1.62 mmol/L,而PTH含量升高到337.95 pg/mL。【结论】赶黄草水粗提物和波棱瓜子粗提油均能有效治疗小鼠维生素A急性中毒,两者联用效果更佳,尤其是与黄芪多糖配伍组合,其作用机理主要是通过修复肝功能及骨组织损伤来实现。

鸡传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的构建和表达

通过文献报道和计算机软件分析筛选出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)结构蛋白基因S1、S2、N基因的T、B细胞的优势抗原表位共7段,采用人工合成及PCR方法将各抗原表位以柔性氨基酸(GP/GA)作为接头串联成一条全新的多表位嵌合基因F,并定向克隆入真核表达质粒pVAX1,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒。阳性质粒pVAX-F通过脂质体转染COS-7细胞进行表达研究。提取转染细胞总RNA,RT-PCR方法检测到目的基因的转录;间接免疫荧光试验(IFA)检测到特异性荧光存在。表明表达产物能与相应抗体特异性结合,证明了具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗IBV的核酸疫苗。

四川规模兔场球虫病流行病学调查

为掌握四川规模化养兔场球虫感染情况,本研究采用麦氏虫卵计数法和PCR方法对四川东、西、南、北及成都附近15个规模化养兔场共450份粪样进行了检测。结果表明,四川规模兔场兔球虫总感染率为71.11%,流行种类达9种,其中巨型艾美耳球虫、中型艾美耳球虫和黄艾美耳球虫场阳性率分别达100%、93.33%和93.33%,其次为穿孔艾美耳球虫73.33%、无残艾美耳球虫60%、斯氏艾美耳球虫46.66%、盲肠艾美耳球虫46.66%、梨形艾美耳球虫40%和小型艾美耳球虫26.67%;1~3月龄幼兔球虫感染率和感染程度明显高于4~6月龄商品兔和6月龄以上种兔,感染率达96%,平均OPG为14913。研究表明,四川规模兔场球虫感染率高,需加强对1~3月龄幼兔的球虫防控。