符合慢性乙型肝炎病毒感染免疫特点的细胞共培养体系的建立

目的研究Huh7．93细胞与慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（cPBMCs）共培养能否模拟慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒（HBV）的复制特点及免疫功能状态，为研究慢性HBV感染的免疫清除机制提供体外共培养细胞系统。方法Huh7．93细胞单独培养及分别与健康体检者外周血单个核细胞、cPBMCs共培养7d。细胞增殖与毒性检测（CCK8）试剂盒检测Huh7．93细胞的增殖活性，荧光定量PCR、Southern blot等方法检测cPBMCs中及共培养细胞中HBV复制情况。两组间比较用独立样本t检验。结果一定比例的Huh7．93细胞与PBMCs共培养后Huh7．93细胞增殖活性较高，细胞生长状态良好。HBV不能感染cPBMCs并在其内复制。Huh7．93细胞与cPBMCs共培养后细胞培养上清液中HBVDNA定量在第4天[（6．01±0．20）log10拷贝／ml]、第7天[（7．82±0．24）log10拷贝／ml]明显增加，与Huh7．93细胞单独培养[分别为（4．99±0．08）log10拷贝／ml、（6．96±0．09）log10拷贝／ml）比较，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。Huh7．93细胞与cPBMCs共培养后第7天细胞裂解液中HBV复制中间体均比Huh7．93细胞单独培养明显增加。HepG2．2．15细胞与cPBMCs共培养后HBV复制无明显增加。结论Huh7．93细胞与cPBMCs共培养后类似于人体感染HBV后的病毒复制规律，能够很好地模拟慢性乙型肝炎患者的肝脏微环境及免疫功能状态，为体外研究慢性HBV感染的免疫清除机制提供了新的方法。