“端粒到端粒”人类参考基因组:精准医学时代的新起点

DNA测序技术的飞速发展使人类基因组学研究迈进“端粒到端粒(T2T)时代”。这个时代的核心标志是实现每一个人类染色体分子——从端粒到端粒——高质量、高完整度的连续线性组装,成为精准医学质量控制的金标准,从而准确和稳定地识别个体变异信息。越来越多个体基因组的完整组装为我们揭示远高于预期的人类基因组差异,也为各人群采用自己的近缘参考基因组进行变异分析提供了关键的理论依据。近缘参考基因组可以更准确地识别和定位个体的基因变异,而准确的变异数据是精准医学中变异与表型关联研究的关键数据基础。这种以人群为单位的基因组分析和研究新范式,必将显著影响国际和国内未来精准医学发展的格局。

腺病毒介导的β-半乳糖苷酶在小鼠气道上皮的转基因表达

目的:以β-半乳糖苷酶基因为标志基因研究重组复制缺陷腺病毒在小鼠肺内气道上皮细胞中的转基因表达。方法:带有LacZ表达基因的重组复制缺陷腺病毒(AdCMVLacZ),经鼻腔吸入法和气管内注射法两种途径分别感染小鼠肺组织,此后在不同时间取小鼠肺组织经多聚甲醛固定后,以X-gal染色。石蜡包埋切片后用核固红复染。结果:β-半乳糖苷酶经重组复制缺陷腺病毒AdCMVLacZ感染小鼠气道和肺泡上皮细胞,并高效表达目的基因,表达时间可长达31天,重复感染后仍可表达13天。结论:重组复制缺陷腺病毒可携带外源性基因在小鼠气道上皮细胞内进行高效、稳定和较为长期的转基因表达。

γ-干扰素在哮喘气道非特异性炎症反应中的作用机制

支气管哮喘是一种由肥大细胞、嗜酸细胞、T淋巴细胞等多种细胞参与的气道变应性炎症性疾病.目前大量研究证实:至少有10余种细胞、20余种细胞因子和50余种活性介质参与了支气管哮喘发病机制的调节.细胞、细胞因子网络间存在复杂的双相作用,Th1/Th2平衡失调,导致Th2系统优势表达(即Ⅱ型炎症反应)是支气管哮喘炎症形成和发展的主要机制.而其中γ-干扰素(IFN-γ)的作用不容忽视.

来源于人外周血单核细胞的树突状细胞感染rAAV-HBsAg后的功能改变

目的观察人外周血单核细胞来源树突状细胞(DCs)经重组腺相关病毒(rAAV)载体介导乙肝表面抗原(HBsAg)基因感染后的功能改变。方法采用ELISA试剂盒检测感染rAAV-HBsAg后的DCs (rAAV-HBsAg-DC)分泌IL-12水平以及rAAV-HBsAg-DCs与淋巴细胞共孵育后上清中γ-干扰素(IFN-γ)的含量;采用混合白细胞反应(MLR)检测rAAV- HBsAg感染前后DCs刺激同种异体淋巴细胞的增殖能力;用FACSort流式细胞仪检测rAAV-HBsAg-DCs表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的变化。结果rAAV-HBsAg感染可促进DCs分泌IL-12(P<0.05),感染后的DCs刺激淋巴细胞分泌IFN-γ的水平显著提高(P<0.01),感染前后的DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖能力及其特征性表面分子无明显改变。结论rAAV介导HBsAg基因感染的DCs能诱发淋巴细胞朝Th1型细胞分化,且不明显改变DCs的表型和刺激淋巴细胞增值的功能,rAAV载体介导HBsAg基因体外遗传修饰的DCs可以进一步用于乙型肝炎的免疫治疗研究。

富血小板血浆在膝关节骨关节炎治疗中的应用

富血小板血浆(PRP)是自体外周循环血经离心后得到的血小板浓缩物,关节腔内注射PRP能改善膝关节骨关节炎(KOA),尤其是早期软骨退变患者临床症状,缓解关节疼痛,改善关节活动度,提高关节运动功能和生活质量,其疗效可能优于透明质酸(HA)。PRP治疗KOA的作用机制可能与促进软骨基质合成、促进软骨细胞增殖分化和刺激内源性HA生成有关。该文就PRP在KOA治疗中的作用作一综述。

γ-干扰素转基因对过敏原导致的小鼠肺嗜酸性粒细胞浸润的抑制作用

目的 :探讨腺病毒介导的小鼠γ 干扰素在小鼠哮喘模型肺上皮细胞内的转基因表达对过敏原所致的嗜酸性粒细胞浸润的作用。方法 :C5 7小鼠经卵蛋白 (ovalbumin ,OVA)腹腔致敏和气道吸入激发建立哮喘模型 ,48h后收获小鼠肺泡灌洗液 (bronchoalveolarlavage ,BAL)和小鼠肺 ;哮喘模型在OVA激发前 48h ,在其气道内给予带有γ 干扰素的复制缺陷腺病毒 (replication deficientadenoviruswithIFN γgene,AdCMVmIFNγ) 5× 10 8空斑形成单位 (pfu) ,同上在OVA激发 48h后收获其肺泡灌洗液和肺。结果 :在卵蛋白所致的哮喘模型中 ,肺组织病理可见支气管周围、血管周围及部分肺泡内明显的嗜酸粒细胞浸润 ,肺泡灌洗液中的嗜酸粒细胞平均占 (75 .13±6 .85 ) % ,而在阴性对照组中则未见嗜酸粒细胞 ;小鼠哮喘模型气道内给予AdCMVmIFNγ后 ,肺内嗜酸粒细胞浸润的程度明显减少 ,肺泡灌洗液中的嗜酸粒细胞占 (9.0 0± 4.5 8) % (P <0 .0 0 1) ,二者均显著低于哮喘模型组。结论 :小鼠的IFN γ经腺病毒介导在小鼠肺上皮细胞内的表达可明显抑制过敏原所致的肺内嗜酸性粒细胞浸润 。

强的松及环磷酰胺对狼疮肾炎远期疗效的影响

目的：分析比较强的松和环磷酰胺对狼疮肾炎远期疗效的影响。方法：３７例活动性狼疮肾炎患者，随机分为三组，１４例口服大剂量强的松（１．０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），１１例在激素基础上用环磷酰胺静脉冲击治疗（０．８－１ｇ，每月一次，总量６－１２ｇ），１２例在激素基础上口服环磷酰胺１００－２００ｍｇ·ｄ－１，总量３．６－１５ｇ。随访观察２４－９８月，平均６５．８±１８．６月，比较治疗前后血清免疫学指标的变化，对尿蛋白及长期肾功能稳定率的影响，并观察三种方法的副作用．结果：环磷酰胺口服组及静脉冲击组对Ｃ３、ＡＮＡ等指标有显著改善作用，优于强的松组（Ｐ＜０．０５）；三组治疗均使２４ｈ尿蛋白定量明显下降；经过平均６５．８月的观察，环磷酰胺口服组与静脉冲击组的长期肾功能稳定率明显高于单用强的松组（Ｐ＜０．０５），环磷酰胺口服组与静脉冲击组疗效相当；药物不良反应：强的松组药物不良反应发生率较高，环磷酸胺口服组次之，环磷酰胺静脉冲击组最少。结论：环磷酰胺可使狼疮肾炎患者的远期疗效有显著改善，其中静脉冲击治疗作用显著，且药物不良反应少。

脊柱外固定装置牵张下经皮椎体成形治疗后壁破损椎体骨质疏松压缩骨折

背景:对于后壁破损椎体骨质疏松压缩骨折伴椎管占位,国内外多采用开放手术或保守治疗。老龄骨质疏松患者用脊柱外固定装置轴向牵张前后纵韧带,使椎管占位后移骨块复位,同时扩大椎管,然后行经皮椎体成形术固化椎体,在临床中取得良好的治疗效果。目的:观察后壁破损椎体骨质疏松压缩骨折伴椎管占位患者前后纵韧带在脊柱外固定装置牵张下行经皮椎体成形的临床疗效。方法:选取老年后壁破损椎体骨质疏松压缩骨折伴椎管占位患者52例,年龄61-86岁,平均(78.62±5.20)岁;采用脊柱外固定联合经皮椎体成形术治疗,治疗前、治疗后1 d、治疗后3个月及末次随访(术后12个月)时,用X射线片及CT观察椎体前缘高度丢失率、后凸成角、椎管狭窄率及骨折椎体内骨水泥分布范围,同时进行目测类比评分、Oswestry功能障碍指数评估。结果与结论:52例患者随访3-12个月。X射线片示治疗前、治疗后1d、治疗后3个月、末次随访时的椎体前缘高度丢失率分别为(34.5±2.2)%,(3.5±1.3)%,(4.0±0.6)%,(4.4±1.1)%,后凸成角分别为(12.1±1.7)°,(4.0±0.8)°,(3.5±0.5)°,(4.4±0.2)°,CT示椎管狭窄率分别为(40.9±7.2)%,(10.7±2.5)%,(9.7±1.1)%,(9.8±0.7)%;骨折椎体骨水泥填充分布范围均≥75%;治疗前与治疗后1 d目测类比评分、Oswestry功能障碍指数比较差异有显著性意义(P<0.05),治疗后3个月与末次随访时目测类比评分、Oswestry功能障碍指数比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明,椎体前后纵韧带牵张下经皮椎体成形治疗不仅显著改善后壁破损椎体骨质疏松压缩骨折伴椎管占位复位的临床效果,还能提高椎体固化率,减轻疼痛,是一种安全有效的微创组合新技术。

市政道路路面结构及路基设计要点刍议

随着社会和人民生活的进步,市政基础设施对道路工程基础设施的需要也在逐渐增加,运输部门的持续发展和良好的市政道路对社会生产力和人民生活产生了重大影响。路面路基设计是市政道路工程设计的关键环节,路面路基设计对市政道路通行能力、使用寿命与交通安全有重要影响。本文以路面路基设计作为切入点,详细阐述路面结构设计、道路路基设计要点及注意事项。旨在建立标准化市政道路设计体系,切实增强道路结构使用性能,提升道路设计水平。

抗人SARS病毒单链抗体库的构建

目的:利用细胞内重组的方法,构建大库容量的人源性抗SARS病毒单链抗体(scFv)库,为筛选SARS病毒抗原的人源性抗体奠定基础。方法:取6例SARS康复患者的80mL外周血,分离淋巴细胞后提取总RNA。分离纯化mRNA并反转录成cDNA后,扩增抗体重链、轻链可变区基因片段。然后经重叠延伸PCR装配成scFv基因并克隆入噬粒载体pDAN5中,电转化大肠杆菌TG1构建初级抗体库。制备初级库噬菌体后,感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组制备次级抗体库。结果:初级库库容量为3×109,在大肠杆菌BS1365中重组后得到3×1011的次级抗体库。结论:细胞内重组方法的应用可使大库容量抗体库的构建变得简单易行。构建的抗SARS病毒单链抗体次库不仅接近人类天然抗体库的水平,而且多样性好,为筛选抗SARS病毒抗原的抗体提供了保证。

城市道路平面交叉口渠化设计分析

城市道路交叉口是两条或两条以上道路相交处,是城市道路系统的咽喉,是车辆及行人的交汇点。在设计时需要保障交叉口通行安全,提高交叉口车辆通行能力,减少交通延误,并提高交叉口行驶舒适性。本文以平面交叉口渠化设计作为切入点,简要叙述在城市道路工程中的平面交叉口渠化设计概念、作用与基本原则,并车道设计、人行横道设计、车道功能划分等多个方面分析城市道路平面交叉口的渠化设计内容与注意事项,仅供参考。

携带外源基因的rAAV-2在人树突状细胞中的稳定表达

目的:观察2型重组腺相关病毒(rAAV-2)载体介导外源基因对人外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)的感染效能.方法:采用激光共聚焦显微镜观察FTTC标记的rAAV-2进入DC的过程;用不同的感染复数(MOI)的rAAV-2-Luc和rAAV-2-GFP感染新分离的DC,荧光素酶(Luc)检测试剂盒检测Iuc的表达和流式细胞术(FACS)检测GFP表达细胞的百分率.结果:加入rAAV-2后80分钟就可见病毒吸附在DC膜上,至90分钟可完全进入细胞内;MOI为1×104vp/cell时就可检测到Luc的表达,并呈现出随着MOI的加大而提高的趋势,自MOI为5×105vp/cell起,再提高MOI值并不能明显增加luc的表达;rAAV-2介导外源基因感染DC48小时后就可检测到表达,从96～240小时表达水平无明显变化;GFP的表达率为5～18%.结论:rAAV-2介导外源基因能有效感染DC,感染的DC可稳定表达外源基因,rAAV-2载体体外遗传修饰的DC可以进一步用于ex vivo途径的免疫治疗研究.

rAAV2VEGF_(165)治疗小型猪急性冠状动脉闭塞的有效性研究

目的 在小型猪急性冠状动脉 (冠脉 )闭塞模型上 ,探讨重组腺相关病毒载体携带人血管内皮生长因子165基因 (rAAV2 VEGF165)治疗冠脉闭塞性疾病的有效性及其量效关系 ,为进一步应用rAAV2 VEGF165治疗慢性心肌缺血的研究探索较合适的剂量。方法 以微开胸心肌内注射的方法将rAAV2 VEGF165导入小型猪心肌 ,实验组分成 4个剂量组 (n =3) :1× 10 11v g(virusgenome) ,5× 10 11v g,1× 10 12 v g ,5× 10 12 v g。对照组 (n =3)注射磷酸盐缓冲液 (PBS)。采用RT PCR以及免疫组化方法观察各组VEGF165mRNA和蛋白的表达 ,通过心肌血管计数及冠脉造影 ,观察各剂量组促进血管生成的生物学效应。结果 术后 4周 ,各实验组心肌组织均可检测到VEGF165mRNA的表达 ,且各组VEGF165蛋白表达水平均高于对照组 ;1× 10 12 v g组及 5× 10 12 v g组心肌毛细血管密度大于对照组 ,5× 10 11v g组及其以上剂量组冠脉侧支循环分级的增加优于对照组。结论 心肌内注射rAAV2 VEGF165能在缺血心肌中有效表达VEGFmRNA及其蛋白 ,在一定剂量范围 ,rAAV2 VEGF165能够增加缺血心肌毛细血管密度 ,促进闭塞冠脉的侧支血管生成。结果显示 ,在小型猪心肌缺血模型上 ,rAAV2 VEGF1651× 10 12v g是较理想的剂量。

可控应力轴向诱导山羊腰椎间盘退变的实验研究

探讨一种自行研制的可控应力器轴向压缩诱导山羊腰椎间盘退变的可行性,并观察山羊腰椎间盘的影像学变化。选取山羊16只,随机分为加压组和对照组,每组8只,用自行研制的可控应力器经皮固定于两组山羊的L4、5椎体,对山羊L4/5椎间盘进行轴向加压诱导,加压组轴向压缩应力设定为40N,对照组为0N,两组分别于术后第4周、第8周进行X线、磁共振检查。Pfirrmann分级结果显示,第4周时,加压组山羊椎间盘Ⅲ级6只,Ⅱ级2只,对照组8只均为I级;第8周时,加压组椎间隙高度指数(DHI)小于对照组(P<0.05);加压组山羊椎间盘Pfirrmann分级Ⅳ级5只,Ⅲ级3只,对照组8只仍均为I级。本实验结果说明,可控应力器轴向压缩诱导山羊腰椎间盘退变是可行的,相同可控应力轴向压缩诱导山羊椎间盘的时间越长,影像学的变化就越明显。

压缩应力诱导椎间盘退变动物模型构建的研究进展

椎间盘退行性疾病（intervertebral disc degenerative disease,IDDD）是目前临床上的常见病,其治疗手段多样,但其发病机制以及变化规律仍不清楚,国内外学者为探寻椎间盘退变规律构建了多种椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）动物模型,按照模型建立方法可大致分为力学模型、损伤模型、生物学模型。

重组腺相关病毒2型转导人外周血单核细胞来源树突状细胞的研究

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC)，能捕获、加工和提呈抗原,参与淋巴细胞的生长分化,并产生原发性CTL反应的细胞,在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用[1].

可控牵张力对山羊腰椎间盘退变的影响

目的探讨轴向牵张力对山羊椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)的影响。方法选取24只6~8月龄雄性山羊,采用弹性应力装置以40 N轴向压缩力诱导,构建山羊IDD模型,在IDD模型构建完成后,随机分为6组(A~C组为对照组,D~F组为实验组),并将压缩力转换为牵张力,A~C组牵张力0 N,D~F组牵张力40 N,牵张持续时间分别为4、6、8周。利用影像学(X线、磁共振成像)及病理组织学(HE染色、免疫组化)评估椎间盘退变及再水化程度。结果随着牵张时间的延长,实验组椎间隙高度指数(disc height index,DHI)增加;Pfirrmann分级提示在牵张6周时,实验组退变程度最低;HE染色提示椎间盘内髓核细胞增多;免疫组化显示髓核Ⅰ型胶原呈先减少后增多的变化趋势,髓核Ⅱ型胶原呈先增多后减少的变化趋势。结论在合适的时间内,一定的牵张力能够促进山羊IDD修复及其再水化。研究结果为临床牵引治疗IDD性腰痛提供新的思路和理论依据。

可控压缩应力轴向诱导山羊椎间盘退变模型构建及评价

目的构建可控压缩应力轴向诱导山羊椎间盘退变模型并评价影像及病理学特点。方法山羊20只,随机分4组(对照组、加压4周组、加压8周组、加压12周组,n=5,压力40 N),利用X线通过椎间盘高度指数(disc height index,DHI)评价椎间盘高度的变化,利用磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)通过Pfirrmann分级法观察椎间盘退变的程度,利用HE染色及免疫组化对椎间盘进行组织病理学观察评估。结果随着加压时间延长,对照组DHI无明显变化,实验组DHI逐渐降低;Pfirrmann分级在对照组中无明显改变,在实验组中随着时间的延长,Pfirrmann分级越高,退变程度逐渐加深:实验组HE染色显示,椎间盘髓核体积缩小、髓核细胞减少,逐渐被纤维样组织代替。免疫组织化结果显示,髓核内Ⅰ型胶原蛋白逐渐增多,Ⅱ型胶原蛋白逐渐减少,椎间盘出现退变。结论一定的轴向压缩应力可导致山羊腰椎椎间盘退变,随着时间延长,退变的程度逐渐加重。

大鼠脊柱融合模型构建及其应用的研究进展

脊柱融合术在脊柱外科中应用广泛,而脊柱融合动物模型是脊柱融合的相关基础研究的必备条件。近年来研究者也开始采用大鼠作为脊柱融合模型构建的实验动物,然而目前关于大鼠脊柱融合研究的文献综述尚未见报道,本文从大鼠脊柱局部解剖、大鼠脊柱融合模型构建及其应用等方面进行文献回顾,旨在为大鼠脊柱融合动物实验模型提供系统综述。

脊柱外固定弹性应力治疗跳跃性脊柱骨折

背景:目前国内外通常采用非融合性内固定治疗跳跃性脊柱骨折,易出现相邻椎间盘严重退变、断钉、断棒、脊柱僵硬恢复困难等相关并发症,尤其是无法避免第二次内固定取出手术,造成组织再次损伤。目的:分析脊柱外固定弹性应力治疗跳跃性脊柱骨折治疗的临床疗效。方法:选择2016年7月至2019年7月南华大学附属第一医院及重庆郭昌毕骨伤科医院收治的跳跃性脊柱骨折患者65例,其中男37例,女28例,年龄20-55岁,按照治疗方式分2组,对照组(n=32)进行椎弓根螺钉置入内固定治疗,试验组(n=33)进行脊柱外固定弹性应力治疗。比较两组患者手术前后的伤椎前缘高度丢失率、Oswestry功能障碍指数、目测类比评分及骨痂形成状况。研究获得南华大学附属第一医院及重庆郭昌毕骨伤科医院伦理委员会批准。结果与结论:(1)两组患者术后的伤椎前缘高度丢失率均低于术前(P<0.05),试验组术后1周、3个月的伤椎前缘高度丢失率低于对照组(P<0.05);(2)两组患者术后的Oswestry功能障碍指数、目测类比评分均低于术前(P<0.05),试验组术后1周、3个月的Oswestry功能障碍指数及目测类比评分低于对照组(P<0.05);(3)试验组患者术后3,12个月的骨痂形成率高于对照组(P<0.05);(4)结果表明,脊柱外固定弹性应力治疗跳跃性脊柱骨折较传统椎弓根螺钉具有更好的效果。