尿石素A改善线粒体氧化应激抗血管内皮细胞衰老

目的研究尿石素A(UA)对血管内皮细胞衰老的影响及其可能机制。方法10 g·L^(-1)D-半乳糖处理3 d诱导HUVEC细胞衰老,同时给予UA处理,设立对照组、衰老模型组、低剂量UA处理组(10μmol·L^(-1))、高剂量UA处理组(20μmol·L^(-1))。试剂盒检测细胞β-gal染色及活性、丙二醛、超氧化物歧化酶以及过氧化氢酶活性,流式检测细胞活性氧、线粒体ROS(mtROS),Seahorse检测线粒体氧化呼吸功能,JC-1染色和流式检测线粒体膜电位,qPCR检测衰老相关基因表达,Western Blot检测线粒体抗氧化酶表达。结果UA能够改善D-半乳糖诱导的血管内皮细胞衰老,降低细胞氧化应激水平,抑制mtROS水平,提高线粒体抗氧化酶表达,改善线粒体呼吸功能。结论UA可能通过改善线粒体功能,提高线粒体抗氧化防御系统活性,缓解线粒体氧化应激,从而抗D-半乳糖诱导氧化应激和血管内皮细胞的衰老。

异鼠李素通过减轻氧化应激改善游离脂肪酸诱导肝细胞脂质沉积

目的探讨异鼠李素(Iso)对游离脂肪酸(FFA)诱导的肝细胞脂质沉积程度以及氧化应激的影响。方法将L-02细胞分为3组:对照组,FFA组和FFA+Iso组,其中FFA浓度为0.6 mmol·L^(-1),异鼠李素浓度为10μmol·L^(-1)。干预7 d后,采用CCK-8试剂盒、油红O染色和三酰甘油(TG)试剂盒检测细胞活力、TG沉积程度;用DCFH-DA荧光探针、丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞内总活性氧(ROS)、MDA水平;用抗氧化酶活性检测试剂盒检测总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;Western blot检测SOD1、SOD2、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)、核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)等蛋白的表达水平。结果FFA可诱导L-02细胞中脂质沉积显著增加,并显著提高细胞中总ROS与MDA水平;抑制SOD酶活性,降低SOD1、SOD2、GPx1的表达水平;抑制Nrf2通路,降低其下游的HO-1、GCLC、GCLM的表达水平。异鼠李素则能够缓解FFA引起的脂质沉积,使ROS与MDA水平降低,增强SOD活性,提高GPx1等抗氧化酶蛋白的表达水平,促进Nrf2活化进入细胞核并提高其下游的蛋白表达水平。结论异鼠李素可通过减轻氧化应激,缓解FFA对L-02细胞诱导的脂质沉积。Nrf2通路在此过程中发挥了重要作用。

异鼠李素通过减轻氧化应激延缓D-半乳糖诱导的人脐静脉内皮细胞衰老

目的:探讨沙棘中的重要成分异鼠李素(ISO)对细胞衰老的影响及机制。方法:采用D-半乳糖(D-Gal)诱导细胞衰老模型,取20~23代的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为4组:对照组、D-Gal组、D-Gal+ISO组(5μmol/L)、D-Gal+ISO组(10μmol/L)。其中D-Gal浓度为10 g/L,干预时间为72 h。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞活力;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒检测细胞衰老状态;各相关试剂盒检测细胞总活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。Western blot法检测衰老标志蛋白p21、p27和核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及其下游蛋白表达水平。结果:ISO浓度≤10μmol/L时对HUVEC无明显毒性作用;与对照组比较,D-Gal能够诱导细胞衰老指标SA-β-Gal活性增加(P<0.05);提高p21、p27表达水平,提高细胞总ROS水平和MDA含量,降低总SOD和CAT活性,降低Nrf2及下游蛋白表达水平(P<0.05)。与D-Gal组比较,ISO能够降低细胞SA-β-Gal活性,抑制p21、p27表达,降低细胞总ROS水平和MDA含量,提高总SOD和CAT活性,增强Nrf2及下游蛋白表达(P<0.05)。结论:ISO可以通过减轻氧化应激,延缓D-Gal诱导的HUVEC细胞衰老,在此过程中激活Nrf2通路可能是其发挥抗衰老作用的重要机制。

高迁移率族蛋白B1在小鼠肝再生中对细胞增殖的作用及机制

目的:研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在小鼠部分肝切除术(PH)后的再生过程中对细胞增殖的作用及机制。方法:将21只雄性BALB/c小鼠,随机分为假手术组和6个PH组,每组3只。假手术组小鼠只打开腹腔暴露肝脏并不切除肝脏;PH组小鼠进行70%肝切除术,并分别于术后第6小时以及第1、2、3、5、7天处死。另外采用丙酮酸乙酯(EP)作为HMGB1的特异性抑制剂进行干预实验,9只雄性BALB/c小鼠,随机分为假手术组、PH组和EP干预组,每组3只,EP干预组小鼠在70%肝切除术后按40mg/(kg·d)给予EP腹腔注射,术后第2天处死。取各组小鼠肝组织提取总蛋白及核浆蛋白,采用Western blot法分别检测提取的不同蛋白样品中HMGB1、TLR4、RAGE、NF-κB p65、Cyclin D1、PCNA的蛋白表达水平。结果:小鼠于进行70%PH后的1周内,肝组织内胞核中HMGB1的蛋白表达水平,在术后第2天上升至顶峰(P<0.05),之后逐渐回落,细胞质中该蛋白表达水平的变化与其一致。干预实验中,相比较假手术组,术后第2天PH组中TLR4、RAGE、NF-κB p65、Cyclin D1、PCNA的蛋白表达水平也明显提高(P<0.05)。EP干预后,虽然肝组织内胞核蛋白中的HMGB1以及总蛋白中TLR4与RAGE的表达水平与PH组比较没有明显改变,但胞浆蛋白中的HMGB1和下游NF-κB p65、Cyclin D1、PCNA的蛋白表达水平出现了显著下降(P<0.05)。结论:HMGB1在小鼠肝再生过程中对细胞的增殖发挥了调控作用,该蛋白可能作为调控肝再生的潜在干预靶点。