冻干甲型肝炎减毒活疫苗原液制备中两种抽提方法效果的比较

目的比较冻干甲型肝炎减毒活疫苗原液制备中两种抽提方法的效果,为生产工艺的优化提供参考。方法取超声后甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)收获物,分别以抽提方法 A和B进行抽提纯化,并对制备的疫苗原液进行无菌检查、支原体检查及蛋白含量、病毒滴度检测。以优化的抽提方法连续制备3批试验疫苗原液及成品,并参考《中国药典》三部(2010版)及企业内控监测指标相关要求进行全面检定。结果与抽提方法 A相比,抽提方法 B制备的原液蛋白含量明显降低,且差异有统计学意义(P<0.001),而病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。以抽提方法 B连续制备的3批原液、成品的各项检测指标均符合相关要求。结论以抽提方法 B进行疫苗生产,提高了原液的纯度及疫苗质量。

甲型肝炎病毒抗原蛋白的制备与分析

目的提取并制备甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原蛋白,了解、分析其主要成分和性质。方法利用人胚肺二倍体细胞培养并收获HAV,释放并初步提取病毒抗原;采用阴离子交换层析和分子筛层析等方法纯化制备HAV抗原蛋白;再利用凝胶电泳(gel electrophoresis)和Western印迹法(Western Blot)对蛋白成分和性质进行分析。结果初步提取的HAV抗原回收率为87.50%,蛋白质去除率为87.88%。纯化后的HAV抗原蛋白的电泳显示HAV抗原蛋白主要由3条蛋白带组成,相对分子质量分别为33000、29000和25000;Western Blot结果显示,相对分子质量为33000和29000的2条蛋白带可与抗体反应。结论实验提取并制备了HAV抗原蛋白,其电泳条带的相对分子质量与HAV衣壳蛋白VP1、VP3和VP2的相对分子质量相当,其中两条蛋白带可与抗体发生免疫反应,含有主要的抗原表位。