hnRNPA1在人胃癌细胞株BGC-823中的生物学功能

核不均一核糖核蛋白A1(hnRNPA1)是体内重要的RNA结合蛋白,通过调节pre-mRNA和mRNA参与转录和转录后调控过程,与肿瘤发生、发展密切相关。目前对hnRNPA1与胃癌的关系尚不十分清楚。目的:探讨hnRNPA1在人胃癌细胞中的生物学功能,明确其与胃癌的关系。方法:以蛋白质印迹法检测正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1和人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823中的hnRNPA1表达。构建靶向hnRNPA1基因的siRNA重组质粒并稳定转染BGC-823细胞,以稳转空质粒pU6的细胞株作为对照,蛋白质印迹法验证干扰效果。分别以CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和流式细胞术分析各组BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭能力和细胞凋亡情况。结果:hnRNPA1在3株人胃癌细胞株中均呈高表达,BGC-823细胞表达水平最高。与pU6稳转组相比,siRNA hnRNPA1稳转组BGC-823细胞增殖抑制率为36.3%,细胞迁移[(5.44±0.25)μm/h对(9.37±0.49)μm/h,P<0.01]和侵袭(穿膜细胞数146.30±12.56对312.51±9.62,P<0.01)受抑,细胞凋亡率降低(3.6%±0.3%对12.7%±0.2%,P<0.01)。结论:hnRNPA1在人胃癌细胞中呈高表达,其可能通过促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,在胃癌侵袭和转移过程中发挥作用。

厦门市乙型肝炎患者病毒基因型的分析

目的:采用多对型特异性引物,通过巢式PCR法检测厦门市乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况.方法:收集250例HBV感染患者血清,提取血清中HBV DNA作为模板,设计HBV前S1基因和S基因中区域内设计出10条内外引物,并将其中8条型特异性内引物分成A,B两组,分别扩增A,B,C和D,E,F型HBV,然后将第2轮PCR产物以用30g/L琼脂糖进行电泳,根据PCR产物电泳显示的产物长度判定HBV基因型,以了解厦门HBV基因型分布情况.结果:共120例确定了HBV基因型.患者群中慢性乙型肝炎90例,占75.0%,急性乙型肝炎、肝炎肝硬化、原发性肝癌分别占5.8%(7/120)、6.7%(8/120)和12.5%(15/120).分型结果:B型58例(48.3%)、C型30例(25.0%),B/C混合型32例(26.7%).HBeAg阳性患者中B基因型占63.8%,B/C型混合感染21.9%;抗-HBe阳性患者中以B/C型混合感染68.8%,B型25.9%,HBeAg阳性组与抗-HBe组之间比较发现B型和B/C混合型之间(P<0.05).结论:厦门乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,B/C混合感染是一个值得重视的问题.

人肠三叶因子酵母双杂交载体的构建及其自激活作用鉴定

目的:构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)酵母双杂交诱饵载体并鉴定其自激活作用.方法:从人结肠黏膜提取总RNA.RT-PCR制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因.TA克隆至pGEMT载体并测序鉴定.经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切,连接到pENTR11质粒构建入门克隆.LR反应获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32一hTFF3,测序正确后与酵母双杂交空猎物载体pDEST22共同转化Mav203酵母细胞,SD/-Leu/- Trp固体培养基上生长.挑取单克隆划线接种到分别含有不同浓度氨基三唑(3AT)的SD/- Leu/-Trp/-His培养基上,观察重组诱饵载体的自激活情况.结果:从人正常结肠黏膜成功克隆了hTFF3基因,构建了pDEST32-hTFF3酵母表达质粒.转化pDEST32-hTFF3和pDEST22的Mav203酵母细胞可在3AT浓度为30 mmol/L以下的SD/- Leu/-Trp/-His培养基上生长,在3AT浓度为30 mmol/L以上的培养基上则未见酵母细胞生长结论:所构建的pDEST32-hTFF3可作为酵母双杂交的诱饵质粒.

Spondin2在结肠炎发生过程中的表达

目的:研究Spondin2的表达调控及其所涉及的信号通路.方法:用含3%葡聚糖硫酸钠饮用水连续喂养C57BL/6小鼠6d,诱导急性结肠炎,然后将小鼠处死,取其结肠组织提取RNA分析.通过定量RT-PCR分析Spondin2 mRNA和核因子-κBp65的表达.应用不同细胞因子和Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)配体分别刺激细胞,RT-PCR分析Spondin2 mRNA的表达.结果:与对照组比较,在葡聚糖硫酸钠诱导小鼠结肠炎模型上,Spondin2的mRNA表达上调4.5±0.5倍.TLR-9配体,CpG-ODN刺激野生型RAW264.7细胞后,Spondin2表达上调4.3±0.4倍.结论:在结肠炎发生过程中Spondin2的mRNA表达上调,并可能通过了TLR-9介导的信号通路.

便秘的诊治思维

便秘是由多种病因引起的常见病症,大多为功能性,病因多为结肠、直肠或肛门病变。患者常有粪便干结、排便困难或不尽感,在不用通便药时,完全排空粪便的次数显著减少。慢性便秘根据动力障碍可分为慢传输型、出口梗阻型和混合型。诊断主要根据罗马Ⅲ诊断标准,必要时可行胃肠传输试验、肛门直肠测压、结肠压力监测、气囊排出试验、排粪造影、盆底肌电图等特殊检查。便秘的治疗除了要改变生活方式、调整心理状态,还可以有针对性地选择泻药,有出口梗阻型便秘者,可试用生物反馈治疗。经严格的非手术治疗后仍收效不大,且各种特殊检查显示有明确的病理解剖和确凿的功能性异常部位,可考虑手术治疗。