鸭梨过氧化物酶基因全长克隆与序列分析

采用RT-PCR和RACE方法,从鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd)果实中获得过氧化物酶(Peroxidase)基因POD的cDNA全长,命名为PbPOD,并将该基因在GenBank上登录,登录号为JQ325052。基因序列分析表明,该基因的cDNA全长为1 487 bp,包含72 bp的5'非翻译区、404 bp的3'非翻译区和长度为1 011 bp且编码336个氨基酸的编码区(CDS)。氨基酸序列分析表明,该基因编码的蛋白具有POD家族保守存在的所有功能活性位点,且与甜瓜、拟南芥、烟草等植物POD相似性达92%以上。

不同采收期鸭梨果皮脂氧合酶同工酶的变化及其与果实褐变关系的研究

以鸭梨为试材,采用非变性PAGE研究了急速降温和缓慢降温处理对不同采收成熟度(早采、中采、晚采)的鸭梨贮藏期间果皮脂氧合酶(LOX)同工酶的变化及其与果实褐变的关系。结果表明,采后鸭梨果皮中的LOX同工酶有9条酶带,其中有三条主酶带B、F和H;不同采收成熟度和不同降温方法处理的鸭梨果皮的LOX同工酶带有所差异,其表达量的顺序为:晚采果>早采果>中采果,急速降温果>缓慢降温果。这一结果与果实褐变指数晚采果>早采果>中采果、急速降温果>缓慢降温果的趋势一致,说明采后鸭梨果皮LOX同工酶的表达量与鸭梨果实的褐变关系密切。鸭梨于9月中旬采收结合缓慢降温贮藏,可减少采后果实的褐变,保持良好的品质,延长贮藏期。

利用表面等离子体共振技术检测猪尿中盐酸克伦特罗

利用表面等离子体共振技术检测猪尿液中的盐酸克伦特罗。将盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白偶联物作为传感芯片特异识别探针结合到生物芯片表面，通过溶液竞争法结合表面等离子体共振技术检测盐酸克伦特罗。标准曲线被建立并且检测盐酸克伦特罗的检测限能够达到1.03 ng/mL，与莱克多巴胺、沙丁胺醇无交叉反应，具有良好的特异性，猪尿的回收率为98.2%～107.0%，变异系数在可接受范围内。所采用的表面等离子体共振方法对于检测猪尿中的盐酸克伦特罗具有灵敏性，准确性，精密性。

鸭梨POD基因的原核表达及成熟度和降温方法对其表达量的影响

利用半定量逆转录多聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术研究缓慢降温和急速降温两种降温方法及早采、中采、晚采3种采收成熟度鸭梨的采后果心和果肉中过氧化物酶(peroxidase,POD)基因的表达与鸭梨褐变的关系。结果发现,缓慢降温处理的鸭梨果心POD基因表达量比相同时期采摘的急速降温处理的基因表达量高,这与其对应的褐变指数相一致,说明POD与鸭梨果实褐变密切相关,缓慢降温能有效抑制鸭梨褐变。同时中采鸭梨的POD基因表达量最高,早采次之,晚采最低,这进一步说明成熟度是影响鸭梨褐变的因素之一。实验进一步构建了POD基因c DNA原核表达载体pET-32a-pbPOD,并成功诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究POD表达量对鸭梨果实褐变的机理提供了参考。

不同采收成熟度和降温方式对鸭梨POD活性及果心褐变的影响

通过对早、中、晚3种不同采收成熟度的鸭梨果实分别采用急速与缓慢降温处理,并对鸭梨贮藏过程中果心褐变指数、果心过氧化物酶(POD)活性及同工酶活性等指标进行测定,结果表明:缓慢降温处理鸭梨果心的POD同工酶活性比同时期采摘的急速降温处理的鸭梨POD活性高,这与鸭梨果心褐变指数的变化趋势相反,说明POD同工酶与鸭梨果心褐变密切相关;缓慢降温贮藏鸭梨能有效抑制褐变。同时,中采鸭梨的POD同工酶活性最高,早采次之,晚采最低,说明成熟度也是影响鸭梨果心褐变的重要因素。缓慢降温结合中采鸭梨可以有效抑制鸭梨果心的褐变。

利用表面等离子体共振生物传感器快速检测牛乳中的三聚氰胺

牛乳中残留的三聚氰胺衣人类健康具有重要危害。利用表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,建立一种快速定量检测牛乳中三聚氰胺的方法。以纳米金为媒介将三聚氰胺(melamine,MEL)连接到SPR传感芯片表面,优化最佳抗体用量和再生条件,测试芯片稳定性和方法的准确性。在无污染的牛乳中添加系列质量浓度的MEL,采用竞争抑制法建立抑制标准曲线,并对实际样品进行检测。结果表明:芯片重现性好,重复检测60次相对标准偏差为5.05%,方法检测限为3.24ng/mL,远低于国际食品法典委员会和国家有关部门规定的残留量。该方法在30min内完成样品的前处理和检测,适合牛乳生产现场快速定量检测。