基因工程促进脂肪干细胞成骨分化的研究进展

大节段骨缺损是骨科、整形外科的常见疾病,严重影响患者的外形和功能。目前临床上常用自体骨移植修复,但这种方法存在着供区骨组织有限、易坏死等缺点。在过去的几十年中,骨组织再生、干细胞移植等方法为修复大量骨组织缺失提供了新的策略。脂肪干细胞(ASCs)是来自脂肪的多能干细胞,可以通过处理诱导分化为成骨细胞,实现骨再生,具有巨大的临床应用潜力。多年来,随着基因工程技术的不断发展,出现了许多对ASCs进行基因修饰以促进其成骨的方法.

PBL联合CP教学模式在整形外科教学查房中的应用探索

文章研究目的是探讨以问题为导向(Problom Based Learning,PBL)联合临床路径(Clinical Pathway,CP)的教学方法在整形外科教学查房中的应用效果。主要以2019年7月至2021年12月在南方医科大学南方医院整形美容外科进行住院医师规范化培训的96名硕士规培生为研究对象。试验组采用PBL联合CP教学模式,对照组采用传统的教学查房模式。4周后对两组硕士规培生进行理论与临床技能(含病例考核、病例答辩、临床技能操作)考核,学生及教师分别对激发学习兴趣、全面掌握知识、加强分析能力、理论联系实际、增强团队合作、有助医患沟通6方面进行评价,并对结果进行统计分析。结果表明,试验组硕士规培生的理论与临床技能操作成绩均显著提高,学生及教师都更加认可试验组教学方式。结论表明,PBL联合CP教学模式可以充分调动学生的学习积极性,提高临床技能,规范病例管理及操作,提高了教学查房的效果。

西藏主要含煤岩系及其成煤环境初探

西藏煤系分布广泛,本文通过对西藏煤系的初步研究,主要从煤系地层、岩石组成以及煤系沉积特点三个方面对马查拉煤系、妥坝煤系、土门煤系、多尼煤系四个主要的西藏煤系进行初步探讨。认为马查拉煤系的沉积环境属浅海-海陆交互相沉积,妥坝煤系不仅具有海陆过渡相之滨岸三角洲带-碎屑潮坪-潮坪泻湖相沉积,还具有滨岸碳酸盐潮坪-碳酸盐台地的滨海-浅海清水沉积的特征,土门煤系则是下部以浅海相沉积为主,中部以海陆交互相沉积为主,上部以陆相沉积为主,多尼煤系则是滨海与海陆过渡相沉积。

缺氧对成熟脂肪细胞去分化影响的实验研究

目的研究缺氧环境下成熟脂肪细胞体外培养的形态学变化,探讨缺氧环境对成熟脂肪细胞去分化的影响。方法从成人吸脂术后抽吸物提取脂肪组织来源的干细胞,诱导为成熟脂肪细胞,在缺血缺氧的环境下培养,观察各时间段细胞的形态变化。结果由脂肪组织来源的干细胞诱导而成的成熟脂肪细胞,在缺氧环境培养数日后,细胞从圆形变为可持续分裂的成纤维细胞状细胞。结论成熟的脂肪细胞在一定条件下可以去分化为成纤维细胞状细胞。

I型胶原支架材料与人脂肪干细胞体外生物相容性研究

目的观察人脂肪干细胞与I型胶原支架材料的生物相容性,为脂肪组织工程选择适宜的种子细胞载体。方法将人脂肪干细胞与I型胶原支架体外培养复合,采用倒置相差显微镜和扫描电镜,观察细胞在支架上黏附、生长及增殖情况并计算细胞黏附率,XTT比色法检测细胞增殖率。结果脂肪干细胞能良好的在支架上黏附、生长和增殖。结论I型胶原支架材料具有良好的细胞相容性,可作为脂肪组织工程的种子细胞载体。

荧光活性染料DiI标记人脂肪干细胞

目的:观察荧光活性染料DiI标记的人脂肪干细胞生长增殖情况,为脂肪干细胞研究寻找理想的细胞标记方法。方法:实验于2006-06/09在广州市创伤外科研究所完成。取人吸脂术中吸出的脂质部分,知情同意并签署知情同意书,用PBS缓冲液反复冲洗,剪刀剪碎。0.1%胶原酶37℃消化40min,使用等量体积含体积分数为0.1胎牛血清+DMEM+双抗完全培养基中和后,1300r/min离心5min,去上清液,沉淀混悬后150UM尼龙网过滤,按1×104～2×104接种于25cm2培养瓶中,置入37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,2～3d换液。待细胞生长融合达80%即可传代,取第3～4代细胞供实验用。将收集细胞用PBS清洗离心2次,加入无血清DMEM制成细胞悬液,以1×109L-1密度加入5μLDiI应用液,37℃下孵育20min,1500r/min离心5min,PBS清洗离心2次,加入含体积分数为0.1胎牛血清DMEM培养基,应用荧光显微镜观察24,48,72h脂肪干细胞显色情况及形态变化。检测脂肪干细胞上清液乳酸脱氢酶含量及细胞XTT比色值,分析脂肪干细胞受损及增殖情况。结果:①DiI标记脂肪干细胞体外观察:台盼蓝染色见脂肪干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下观察,见全部细胞标记后均显红色荧光,标记的脂肪干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,DiI标记阳性率为100%。DiI标记后早期细胞形态呈荧光环状,48h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光。②培养脂肪干细胞上清液中乳酸脱氢酶含量及XTT法检测脂肪干细胞受损及增殖情况:未标记DiI的脂肪干细胞与标记DiI的脂肪干细胞形态、细胞上清液乳酸脱氢酶含量及XTT值差异不明显(P>0.05)。结论:①DiI能有效标记体外脂肪干细胞,并在细胞内稳定表达。②DiI标记的脂肪干细胞形态良好,对活体细胞无毒性。

脂肪细胞去分化及构建组织工程化脂肪的实验研究

目的探讨成熟脂肪细胞去分化及去分化脂肪细胞作为种子细胞构建组织工程化脂肪组织的可行性。方法取健康女性脂肪抽吸术的抽吸物,使用酶消化法获取成熟脂肪细胞,采用天花板贴壁法培养,取第3代细胞进行实验。体外实验:成脂、成软骨和成骨诱导培养,并分别采用油红"O"染色、阿尔辛蓝染色和茜素红染色法鉴定。体内实验:实验组(n=6):取第3代细胞使用荧光染料DiI标记,与纤维蛋白胶混合后注射于裸鼠背部一侧皮下,8周后,从大体观察、组织学、油红"O"染色及荧光显微镜观察新生物形成情况;对照组(n=6):以空白的纤维蛋白胶注射于同一裸鼠背部另一侧皮下,于同一时间点进行检测。结果成熟脂肪细胞呈单房圆形,经天花板贴壁法培养后变为长梭形成纤维细胞状,即去分化脂肪细胞。去分化脂肪细胞在定向诱导培养下能够分别成脂、成软骨及成骨分化。体内实验中实验组8周后在裸鼠背部皮下有新生组织块形成,经检测后证实其为成熟脂肪块并来源于植入的去分化脂肪细胞,对照组无新生组织形成,纤维蛋白胶被降解吸收。结论成熟脂肪细胞可通过体外培养实现去分化,去分化脂肪细胞具有成脂、成软骨和成骨等多向分化能力,以去分化脂肪细胞为种子细胞可在裸鼠皮下构建出脂肪组织。

不同细胞促进脂肪移植存活的实验研究

目的探讨应用自人脂肪组织来源的不同细胞辅助脂肪移植,寻找促进移植物存活率的最佳种子细胞的有效方法,为干细胞进一步运用于临床提供实验依据。方法从临床抽脂病人获取脂肪组织并提炼细胞,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与以下细胞进行混合处理:(1)低氧脂肪来源间充质干细胞(A组);(2)脂肪来源间充质干细胞(B组);(3)血管基质层细胞(SVFs)(C组);(4)加完全培养基的单纯脂肪颗粒为对照组(D组)脂肪颗粒与相应细胞混合后,注射移植于6只裸鼠背部皮下。术后3个月观察移植物情况,通过组织学、HE染色等方法进行分析。结果 A^D组湿重分别为(61.67±8.165)、(91.67±1.472)、(96.67±5.164)和(40.83±4.916)mg,A、B、C组脂肪存活率均高于D组(P<0.05),B、C两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)且都高于A组。A、B、C组血管密度均高于组D,且C组明显高于其他3组(P<0.05)。A、B、C组存活脂肪细胞计数均高于D组,且B、C组最高(P<0.05),纤维组织计数均低于D组(P<0.05)。结论来源于人自体干细胞复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中血管基质层细胞及脂肪来源间充质干细胞移植脂肪的存活率最高。

浅议西藏区域地层区划及其含煤地层

据西藏自治区大地构造演化特征,从整个青藏高原构造单元分布特点考虑,本文将西藏自治区地层区划结合构造单元和含煤地层一并考虑,将其划分为三个构造-地层大区:羌塘-三江构造-地层大区、班公湖-双湖-怒江构造-地层大区、冈底斯-喜马拉雅构造-地层大区。从区域地层、沉积构造及其古生物化石组合等特点综合分析,得出西藏赋煤区聚煤作用具有时代多、分布广、煤层层数多、厚度薄和稳定性差的总体特点。区内含煤地层包括下石炭统、上二叠统、上三叠统、中侏罗统、下白垩统和古近系等。最主要煤系是下石炭统马查拉煤系、上二叠统妥坝煤系、上三叠统土门煤系、下白垩统多尼煤系。

小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29生物安全性的初步研究

目的探讨小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29的生物安全性,及噬菌体D29在小鼠肺组织中的活性变化规律,旨在为临床治疗肺结核提供一新途径。方法 8只小鼠分成两组,实验组4只超声雾化吸入分枝杆菌噬菌体D29,对照组4只超声雾化吸入空白培养基,观察不同时间肺的组织学改变,并检测不同时间肺组织冲洗液中噬菌体D29的活性。结果小鼠超声雾化吸入噬菌体D29后1、2、3、24h与对照组比较,肺组织结构正常,无任何炎症性改变,肺组织冲洗液中噬菌体D29活性1h后开始急剧下降,24h后无活性。结论小鼠超声雾化吸入噬菌体D29具有较高的生物安全性,噬菌体D29在小鼠肺内的存活具有高度时间依赖性。

西藏雅鲁藏布江变质带基本地质特征研究

西藏雅鲁藏布江地区是古特提斯洋消失形成的一条地缝合带,是揭示青藏高原及其邻区演化的十分重要的窗口。通过对雅鲁藏布江变质带中蛇绿混杂岩带、朗杰学增生楔和仲巴地块三个部分变质特点的研究,归纳了雅鲁藏布江变质带的基本特征。根据特征变质矿物及典型矿物共生组合确定变质相,可以大致计算出变质温度和压力条件。蛇绿岩带作为全球大多数碰撞构造带上,通常是板块缝合带的标志,具有特别重要的大地构造和古地理意义,朗杰学增生楔也有蛇绿岩的分布。仲巴地块古生界地层均已变质,中生界地层发生浅变质。

断裂构造对西藏煤系分布的制约

通过对西藏自治区四个比较主要的煤系的研究分析,解开了部分断裂构造对这些煤系的制约,马查拉煤系的完整性被断裂构造破坏,同时断裂构造还控制了东侧的海陆交互相的沉积分布,并为其东侧沉积盆地提供了成煤的物质条件;妥坝煤系受多个断裂构造影响,总体呈北西-南东向展布;土门煤系的断裂构造形成和发育在晚三叠世之前,控制晚三叠世形成土门煤系的沉积条件;多尼煤系的断裂构造分多种,对其分布制约较为突出,有的断裂构造形成有益于海陆交互沉积的环境,有的则是煤系形成后的改造。西藏自治区多数煤系的后期改造都有构造运动的控制作用。

浅谈横截断面法求资源量的优缺点——以来财湾熔剂灰岩矿为例

为了给贵州省务川氧化铝厂寻找配套原料,务川仡佬族苗族自治县国土资源局委托贵州省地质矿产勘查开发局一〇六地质大队对贵州省遵义市氧化铝项目泥高矿区进行详查工作。作者于2014年8月在贵州省务川县来财湾熔剂灰岩矿区进行详查工作,在工作中以横截断面法求资源量,发现此方法在计算资源量的诸多问题,虽然已提交资料,但心感欠缺,故提出一些见解,望地质专家对此方法提出修正。

浅谈研究生就业教育问题

结合工作实际,分析了研究生走上工作岗位后面临的问题,以及问题出现的原因,说明了就业教育的重要性,探讨了从德育工作、心理引导、道德启发、人际沟通能力培养等方面加强就业前教育的有效举措,旨在对研究生就业指导工作有所裨益。

组织工程化皮瓣的构建

目的应用脂肪组织来源干细胞(ASCs)在体外构建组织工程脂肪并与已构建的复合皮组装培育,试构建出含脂肪层的组织工程化皮瓣。方法(1)构建组织工程脂肪从脂肪组织中分离培养ASCs并进行三系分化诱导鉴定。ASCs与胶原凝胶混合并进行体外成脂诱导,诱导15 d后分别进行倒置显微镜、油红O染色及HE染色观察。(2)构建复合皮从包皮组织中分离培养表皮细胞(Kc)和成纤维细胞(Fb)。Fb与胶原凝胶混合后培养5 d,将Kc接种到含有Fb的凝胶表面,在液面下培养4 d后移至气-液界面继续培养10 d形成复合皮。(3)构建含皮下脂肪组织的3层结构的皮肤复合组织将培养的复合皮与脂肪组织按正常皮肤结构顺序组装后继续培养3 d并行HE染色观察。结果(1)ASCs具有成脂、成软骨和成骨分化能力。ASCs凝胶复合物体外成脂诱导15 d后,可见细胞内充满圆形脂滴,呈单房或多房形,油红O染色及HE染色均显示为成熟脂滴。(2)经过气-液界面培养后,Kc成层分化,形成基底上层。(3)组装培育后的皮肤复合组织分3层,表层Kc成层分化并形成基底上层;中层和底层连接处细胞聚集;成脂分化的ASCs位于底层。结论分别应用Kc、Fb和ASCs三种细胞,在体外构建出组织工程化脂肪和复合皮,且按序组装培育,可构建出组织工程化皮瓣。

自创肌肉卷瓣法加人中沟成形术重建唇裂术后人中嵴及人中

目的探讨唇裂二期修复术中一种可靠易行的人中嵴及人中成形的方法。方法2008年7月至2021年11月,南方医科大学南方医院整形美容外科收治唇裂术后继发鼻唇畸形患者201例,男85例、女116例,年龄14~35岁,平均22.4岁。切除上唇瘢痕掀开上唇皮瓣,以重建人中嵴处为蒂分离患侧皮下异常肌性隆起处的浅层口轮匝肌,由外侧向内掀起舌状肌肉瓣并纵行卷曲,与人中沟处纵行切开外翻的浅层口轮匝肌瓣对应缝合,固定于重建人中嵴位置上,与加深人中沟共同形成隆起的人中嵴和明显的人中沟外观。结果201例患者早期外形改善明显,重建人中嵴外形逼真,人中区结构清晰,无皮瓣坏死、感染等并发症发生。随访1~36个月(平均7.8个月),198例人中嵴和人中沟的明显度有不同程度地减弱,但3个月后仍存在。98例患者随访>3个月,显著改善78例(79.6%)、基本改善12例(12.2%)、改善不明显8例(8.2%)。结论肌肉卷瓣法加人中沟成形术重建人中嵴及人中的方法操作简便,不需填充材料,术后效果较稳定且满意度高,可作为唇裂术后继发畸形的人中嵴及人中的优选矫正方案。

超声辅助旋切刀微创处理自体脂肪移植隆乳术后结节的临床应用

目的 探讨超声辅助旋切刀微创处理自体脂肪移植隆乳术后结节的临床应用效果。方法 回顾性分析自2019年12月至2023年5月,南方医科大学南方医院整形外科收治29例接受自体脂肪移植隆乳术后出现结节并发症患者,结节直径1.7~3.8 cm,在超声辅助下找到脂肪结节,随后在结节附近较隐蔽处,顺皮肤纹理做一3 mm切口,采用乳腺旋切刀完整切除脂肪结节。结果 所有患者术后获随访6个月,术后局部触感及超声检查均显示治愈,1例患者因术后局部出现血肿不满意,其余患者术后效果均满意。结论 超声辅助旋切刀技术是大体积脂肪移植隆乳术后脂肪结节的较好微创治疗选择,值得临床推广应用。

去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞成脂分化能力的比较研究

目的种子细胞是组织工程研究热点,研究具有高成脂分化能力、可应用于脂肪组织工程的种子细胞,以提高组织工程脂肪的构建效率。方法取自愿捐赠的吸脂术脂肪组织采用胶原酶消化后,提取成熟脂肪细胞(mature adipocytes,MA)及脂肪来源干细胞(adipose-derived stromal cells,ADSCs);天花板贴壁培养法诱导MA去分化,获得去分化脂肪细胞(dedifferentiated adipocytes,DA)。取第4代DA和ADSCs行成脂诱导培养,采用倒置相差显微镜观察、油红O染色分光光度计法及细胞计数法比较DA、ADSCs成脂分化能力。结果 MA在体外培养环境下能去分化为成纤维细胞状DA。成脂诱导培养14d内,倒置相差显微镜下观察显示DA脂滴聚集能力显著大于ADSCs。油红O染色分光光度计法显示DA在诱导培养4d后出现显著性脂滴聚集,ADSCs 10d时才出现显著性脂滴聚集;诱导12d后DA的吸光度值大于ADSCs,差异有统计学意义(P<0.05)。油红O染色细胞计数法显示,DA的成脂分化率为65%±6%,ADSCs为35%±5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DA成脂分化能力高于ADSCs,有望成为脂肪组织工程种子细胞。

人脂肪细胞的可塑性

目的 探索体外培养环境下人成熟脂肪细胞的去分化现象,旨在挖掘其作为种子细胞的潜能,为组织工程研究开辟新思路.方法 自成人吸脂术后抽吸物提取成熟脂肪细胞及脂肪组织来源干细胞（adipose-derived stromal cells,ASCs）,天花板贴壁培养法诱导成熟脂肪细胞去分化,观察细胞形态变化,获得去分化脂肪细胞（dedifferentiated adipocytes,DA）.相同的条件下,MTT比色法比较DA、ASCs活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪鉴定DA、ASCs表面分子的表达;油红O染色、茜素红染色、阿尔辛蓝染色分别鉴定DA、ASCs成脂分化、成骨、成软骨分化能力.结果 人成熟脂肪细胞在体外培养环境下能去分化为成纤维细胞状DA;MTT比色法测细胞活性：DA、ASCs均有很强的增殖能力,两者差异无统计学意义;流式细胞仪测定：DA、ASCs中HLA-ABC、CD29、CD44均为阳性,CD45、CD34、CD106均为阴性;成脂分化2周,油红O染色可见DA、ASCs内出现红色脂滴;成骨分化2周,茜素红染色可见DA、ASCs内红色钙盐沉积;成软骨分化2周,阿尔辛蓝染色可见DA、ASCs内软骨基质沉积.结论 成熟的脂肪细胞在体外培养条件下可成为DA,DA具有很强的增殖活性,表达部分干细胞特征性表面蛋白,有成骨、成软骨及强大的成脂分化能力,有望成为组织工程优秀的种子细胞.

人脂肪来源干细胞复合Ⅰ型胶原支架构建工程化脂肪组织的实验研究

目的探讨构建组织工程化脂肪组织的可行性，为临床修复软组织缺损寻找一种新方法。方法以酶消化法从人脂肪抽吸术抽吸物脂质部分获取人脂肪来源干细胞作为种子细胞，并行DiI体外荧光标记，以Ⅰ型胶原支架为载体材料，将细胞成脂诱导后，以1×10^7／ml细胞密度与支架复合后接种于裸鼠左侧背部皮下，未诱导组不对细胞进行任何诱导，以相同方式接种于裸鼠右侧背部皮下，空白对照组将Ⅰ型胶原空白支架接种于裸鼠颈部正中皮下，每组各6只实验鼠；于第12周取材，通过大体和荧光显微镜观察、湿重测定、组织学检测和油红O染色定性判断体内成脂能力。结果原代培养的脂肪来源干细胞，经成脂诱导能演变为成熟脂肪细胞，油红O染色阳性。诱导组裸鼠皮下均发现新生组织块，新生物平均湿重为0．020g，常规病理切片及油红O染色均证实其为成熟脂肪组织，DiI荧光显色阳性证实其为外源性；未诱导组4只裸鼠皮下发现新生组织块，新生物平均湿重为0．014g，常规病理切片及油红O染色证实其含有部分成熟脂肪组织，DiI荧光显色阳性证实其为外源性，两组新生物湿重比较差异有统计学意义（P〈0．01）；空白对照组未见新生组织形成。结论用酶消化法从人脂肪抽吸术抽吸物脂质部分提取的细胞为脂肪组织来源干细胞，该细胞能作为种子细胞经成脂诱导后，与Ⅰ型胶原支架在体内成功构建脂肪组织。