传染性喉气管炎病毒河南株gB基因的克隆、序列分析及其真核表达载体的构建

【目的】构建传染性喉气管炎病毒（ILTV）的真核表达载体。【方法】从传染性喉气管炎病毒河南株（ILTV-XY）感染的鸡胚绒毛尿囊膜中提取病毒DNA,进行PCR扩增,PCR产物进行T-A克隆与测序,获得了鸡IL-TV-XYgB全基因序列;对ILTV-XY株gB基因与GenBank中读取的5株ILTVgB基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较分析;并将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,对构建的重组质粒pcDNA3.1/gB进行酶切、测序鉴定。【结果】序列测定表明,gB全基因核苷酸长度为2 629 bp,编码873个氨基酸,推导氨基酸序列有8个潜在的N-糖基化位点,有12个与二硫键形成有关的半胱氨酸。与GenBank中读取的澳大利亚SA2疫苗株、辽宁疫苗株、烟台株、美国632强毒株、英国Throne强毒株gB基因进行比较,核苷酸序列同源性为99%以上,与ILTV-SA2株gB基因比较发现,ILTV-XY株gB基因核苷酸序列在第89位均缺失1个碱基G,而在第102位又都插入1个碱基A,从而引起该毒株gB基因推导的氨基酸序列中第28-32位5个氨基酸的移码突变。构建的重组质粒pcD-NA3.1/gB经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。【结论】成功构建了ILTV的真核表达质粒pcDNA3.1/gB,为ILTV核酸疫苗的研究奠定了基础。

抗菌肽的研究概况及应用前景

抗菌肽是动物防御体系中产生的一类抵抗外源性病原体侵害的肽类物质,具有抗细菌、真菌、病毒、原虫、癌细胞等多种生物活性,且不易产生抗药性,其应用前景广阔。概述抗菌肽的分类、结构特征、生物活性、作用机制,指出抗菌肽研究的存在问题及应用前景。

乳酸杆菌对蛋鸡饲料养分消化率及肠道大肠杆菌数量的影响

研究了乳酸杆菌制剂对蛋鸡饲料养分消化率及肠道内大肠杆菌数量的影响,结果表明,乳酸杆菌对饲料中蛋白质、钙、磷等养分的消化率影响不显著;饲喂乳酸杆菌和胆汁的蛋鸡,其盲肠和大肠内的大肠杆菌数量较少,说明乳酸杆菌在一定程度上能提高蛋鸡对日粮中养分的消化率,并对肠道内大肠杆菌具有一定的抑制作用。

两株鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

从河南省长葛、荥阳等地采集的病鸡(临床疑似感染ILTV)喉气管组织中分离得到两株病毒,暂命名为ILTV-CG和ILTV-XY。经人工接种易感鸡,ILTV-CG组于接种后第四天I、LTV-XY组于接种后第三天部分鸡只死亡,并可致死部分鸡胚,绒毛尿囊膜增厚且有大小不等、数量不一的白色痘斑;两株病毒对乙醚、氯仿敏感;在电镜下可观察到六边形、二十面体对称、有囊膜、具空心颗粒的病毒粒子;根据GenBank中收录的ILTV TK基因核苷酸序列,设计一对特异引物,以两病毒株及参考株的DNA为模板进行PCR反应,均扩增出完全一致的特异带,扩增产物用EcoRⅠ酶切后的酶切图谱也完全一致。试验结果表明两分离株均为ILTV。

鸡传染性支气管炎病毒澳大利亚T株S1全基因的克隆与序列分析

【目的】研究鸡传染性支气管炎病毒（IBV）澳大利亚T株S1基因全序列。【方法】采用RT-PCR技术，对IBVT株S1基因进行扩增、克隆和测序。【结果】测序结果表明，IBVT株S1基因大小为1739bp。与Gen—Bank中的29株IBV S1基因进行比较发现，IBVT株与吉林疫苗株（JAAS）S1基因核苷酸同源性为99．8％，有4个核苷酸的差异，其中有3个碱基发生非同义突变，氨基酸同源性为99．4％；与其余28株IBVs1基因核苷酸同源性为73．8％～84．4％，氨基酸同源性为66．8％～85．9％。进化分析发现T株与JAAS株之间的亲缘关系很近，与其他IBV株的亲缘关系均较远。【结论】JAAS株是T株的变异病毒，IBVT株的变异病毒在我国存在。

一养鸡地区传染性法氏囊炎免疫失败的研究

鸡传染性法氏囊病(in fectious bursa l d isease,IBD)是一种严重危害养禽业健康发展的传染病,该病感染后不但造成重大的损失,还引起不同程度的免疫抑制,给禽群免疫带来更大的困扰。作者对发生在河南某地区的IBD免疫失败进行了研究,研究结果发现:鸡群免疫使用的鸡传染性法氏囊炎中等毒力苗每瓶标识含量均为500羽份,发生严重免疫失败的A疫苗抽检的6瓶测得的0.1 m l疫苗稀释液的TC ID50分别是1-0 2.2、1-0 2.7、100、10-2.9、1-0 1.9、100,即每瓶实际分别含有3.17、10.04、0、15.9、1.3和0羽份。而当地市场使用效果较好的B疫苗和C疫苗每瓶疫苗分别平均含有485和453羽份。疫苗有效含量不足是该地区IBD免疫失败的主要原因。

EDSV HN03株纤维蛋白基因的克隆与序列分析

【目的】研究减蛋综合征病毒(EDSV)河南HN03株纤维蛋白基因全序列,为进一步分析EDSV纤维蛋白基因的结构、功能以及EDSV基因工程疫苗的研究奠定基础。【方法】根据GenBank中收录的EDSV纤维蛋白基因序列(Z86065),设计并合成了1对引物,PCR扩增EDSV河南HN03株纤维蛋白基因。将扩增产物克隆入pTG19-T载体并测序。【结果】测序结果表明,HN03株纤维蛋白基因为1935 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码644个氨基酸,推导的氨基酸序列有5个潜在的N-糖基化位点,有5个与二硫键形成有关的半胱氨酸。序列分析表明,EDSV HN03株与EDSV国际标准株AV-127纤维蛋白基因核苷酸同源性为99.3%,氨基酸同源性为99.2%;与鹌鹑腺病毒QU株纤维蛋白基因核苷酸同源性为98.9%,氨基酸同源性为98.4%。【结论】腺病毒纤维蛋白基因相当保守。

Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究

本研究采用兔抗H9亚型禽流感病毒(AIV)IgG包被于硝酸纤维素膜,酶标羊抗兔IgG作二抗,建立检测H9亚型AIV的Dot-ELISA法。经方阵试验确定兔抗AIVIgG工作浓度为1∶400,酶标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶400。作者建立的Dot-ELISA对AIV的最小检测量为3.35×10-9g。Dot-ELISA与HA和HI、AGP及病毒分离法相比,检测63份临床疑似H9亚型AIV病料,Dot-ELISA检出32份(57.14%),HA和HI检出15份(23.81%),AGP检出11份(17.46%),病毒分离检出38份(60.30%)。用抗H9亚型AIV阳性血清可以阻断Dot-ELISA阳性反应,诊断膜片与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒不出现阳性反应,证明Dot-ELISA特异性好。分别置室温(25℃左右)、4℃和-20℃下保存1个月后,膜片诊断效果不变,对照反应均成立,该方法重复性好(重复符合率为93.9%),操作简便(3 h内可完成),不需要特殊检测仪器,结果客观,肉眼易于判断,是微生物和传染病及寄生虫病诊断标准化的新技术之一。

猪链球菌病病原分群鉴定和药敏试验

从新郑、洛阳、中牟、新乡等16个县(市)猪场病料中,检出并分离到16株链球菌,对其进行了系统的生化分群鉴定试验和药敏试验。生化分群鉴定试验结果表明,我省发生的猪链球菌病是由E群链球菌(6/16)、D群猪链球菌(4/16)、C群兽疫链球菌(3/16)、L群链球菌(2/16)和未知群(1/16)链球菌引起的,其分布无明显的区域性。药敏试验结果表明,大多数菌株对利复平、氧氟沙星、青霉素敏感;对头孢唑啉、卡那霉素次之;对杆菌肽、复方新诺明等耐药。

论坚持以公有制为主体与发展非公有制经济

“以公有制为主体,多种经济成分共同发展”是我国社会主义市场经济的一个根本特征。《中共中央关于建立社会主义市场经济体制若干问题的决定》指出:“建立社会主义市场经济体制,就是要使市场在国家宏观调控下对资源配置起基础性作用。为实现这个目标,必须坚持以公有制为主体,多种经济共同发展的方针。”在“十五”大报告中,江泽民对这一方针再次作了强调,坚持这一发展方针,将使我们顺利完成既定的战略目标,顺利跨入21世纪。