产ESBLs与AmpC大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型分析

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与AmpC酶大肠埃希菌(escherichia coli,ECO)和肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae,KPN)的基因型特征。方法用表型确证试验从临床分离的74株ECO和KPN中筛选出16株产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamases,ESBLs)、4株产AmpC酶及25株产ESBLs+AmpC菌株。应用多重聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),扩增菌株的TEM,SHV和CTX-M-G1型超广谱β-内酰胺酶基因和DHA-1,ACT-1型AmpC酶基因,并对PCR产物经凝胶电泳后进行初步的分析。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带TEM,SHV,CTX-M-G1,DHA-1和ACT-1基因的检出率分别为54.2%,50.0%,62.5%,57.1%,35.7%;29.4%,52.9%,41.2%,66.7%,46.7%。相当一部分菌株同时携带2种或2种以上的基因型。结论产ESBLs与AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为多重耐药菌株,存在多种耐药基因。应采取积极的措施防止产酶菌株的流行。

多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子的检测

目的研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用。方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性,再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应(PCR),分别扩增革兰阴性菌整合子。结果用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子,有21.2%的菌株同时对10种抗生素都耐药,依次为氨苄西林(72.5%)、头孢曲松(62.5%)、头孢唑啉(61.2%)、头孢他啶(56.2%)、哌拉西林(55.0%)、复方磺胺嘧啶(51.2%)、环丙沙星(50%)、庆大霉素(48.8%)、头孢吡肟(48.8%)、头孢西丁(33.8%),显著高于整合子阴性的菌株。用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子,可扩增出1000bp,1450bp,1600bp,1700bp,1850bp,1900bp,大于2000bp等6种不同长度的脱氧核苷酸(DNA)片段,相同菌属可携带有不同长度的耐药基因片段,不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段。结论Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中,在多重耐药机制中起着重要的作用。

PPA制剂对人PBMC分泌细胞因子水平的影响

目的 探讨绿脓杆菌菌毛制剂 (PPA)对正常人外周血单核细胞 (PBMC)分泌细胞因子水平的影响 ,了解该制剂的免疫作用。方法 采用ELISA法 ,测定PPA刺激下 ,体外培养的正常人PBMC分泌IL -2 ,IFN -γ和IL -10的水平变化。结果 培养上清液中刺激组IL -2 ,IFN -γ和IL -10含量分别为 ( 163 74± 2 3 5 1)pg/ml ,( 92 4 12± 2 14 3 2 )pg/ml和 ( 3 3 76± 9 83 )pg/ml,而对照组则分别为 ( 3 0 80± 14 42 )pg/ml ,( 4 6 80± 15 2 9)pg/ml和 ( 4 1 61± 10 75 )pg/ml。刺激组IL -2和IFN -γ含量明显增高 ,而IL -10的含量则下降 ,其差异均有显著性 (P <0 0 1)。结论 PPA能促进Th1细胞因子的产生 ,抑制Th2细胞因子的分泌 ,能有效增强机体的细胞免疫功能。

123株白色念珠菌耐药基因CDR1和CDR2表达研究

目的了解白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性及其耐药基因CDR1、CDR2的表达情况。方法常规方法分离123株临床菌株,科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定,采用Rosco纸片扩散法进行药敏试验,所有耐药株与随机选择的同等数量的敏感株(对照株)用聚合酶链反应(PCR)扩增目标基因CDR1、CDR2,扩增产物经凝胶电泳后进行初步分析。结果123株白色念珠菌分布于呼吸道50.4%(62/123)、泌尿道28.5%(35/123)、生殖道14.6%(18/123)和其它6.5%(8/123)。通过药敏筛选,获得耐药菌株35株,其中有15株出现交叉耐药。受试菌对两性霉素、5-氟胞嘧啶、咪康唑、伊曲康唑和氟康唑的敏感率分别为99.2%、85.4%、87.0%、84.6%、和83.7%。35株耐药株和对照株均出现耐药基因CDR1、CDR2。结论白色念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性呈下降趋势,编码外排蛋白的耐药基因CDR1和CDR2可能同时存在于全部受试菌株内。

插入序列ISEcp1B在革兰阴性杆菌中的分布及基因多态性分析

目的研究插入序列ISEcp1B基因在革兰阴性杆菌中的分布及多态性分析。方法用K-B药敏法分析143株革兰阴性杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC及ISEcp1B基因,并进行DNA测序。结果CTX-M-G1及ISEcp1B基因的总检出率分别为41.26%及16.08%;ISEcp1B插入序列的在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌9株占20.93%、肺炎克雷伯菌6株占11.32%、铜绿假单胞菌5株占13.89%、阴沟肠杆菌2株占25.00%、弗氏柠檬酸杆菌1株占25.00%;插入序列ISEcp1B阳性株对头孢菌素的耐药率显著高于阴性株(P<0.01),在体外对亚胺培南有较好的抗菌活性;对ISEcp1BPCR产物进行测序,发现其下游均连接CTX-M型ESBLs,暂未见其他类型的β-内酰胺酶;ISEcp1B右端均连接一个反向重复序列,为转位酶提供作用位点;提供-35及-10两个启动子,对下游不同的CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用,启动子与CTX-M型ESBLs编码起始距离长短不一,并有不同程度的突变,呈多态性。结论插入序列ISEcp1B较广泛分布于革兰阴性杆菌,增加了CTX-M型ESBLs水平播散的危险性,并对其表达起调控作用。

同型半胱氨酸和MTHFR基因多态性与Alzheimer病的关系

目的 探讨同型半胱氨酸 (Hcy)和 5 ,10亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因多态性与Alzheimer病的关系。方法 运用多聚酶链反应限制性内切酶片段长度多态性技术 (PCRRFLP)和荧光偏振法 (FPIA)检测 6 6例阿尔茨海默病及 14 3例正常人MTHFR基因多态性和血浆总Hcy水平。结果 (1)AD病人甲基四氢叶酸还原酶基因中 ,基因型C/T占 5 6 .0 6 % ,明显高于对照组的 34.97% (P <0 .0 1,RR =0 .35 5 ) ,C/C占 39.39% ,明显低于对照组的 6 2 .94 % (P <0 .0 1) ,T/T占 4 .2 5 % ,与对照组 2 .0 9%无明显差异 (P >0 .0 5 )。AD病人中甲基四氢叶酸还原酶基因等位基因C的频率为 6 7.4 3%、相对危险率 (RR)为0 .5 94 ,T的频率为 32 .5 7%、与对照组的C为 80 .4 2 %、T为 19.5 8%有显著性差异 (P ≤ 0 .0 5 )。 (2 )AD病例组与对照组血浆Hcy分别为 14 .72± 6 .2 μmol/L和 10 .9± 2 .4 μmol/L ,两者差异有显著差异 (P <0 .0 5 )。AD患者血浆总Hcy水平显著高于正常组。结论 MTHFR基因突变及高同型半胱氨酸血症与Alzheimer病发生有一定关系。

复合转座子ISEcp1B与IS903介导CTX-M ESBLs新基因亚型传播机制的研究

目的研究肺炎克雷伯菌Kp49,CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)新亚型的基因环境,并分析其传播的分子机制。方法用K-B药敏法分析肺炎克雷伯菌Kp49的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增CTX-M-G1、TEM、SHV、DHA、ACT、IMP-1、VIM-1、ISEcp1B、IS903及Ⅰ类整合子,PCR扩增ISEcp1B下游的CTX-M型ESBLs全序列并测序。结果肺炎克雷伯菌Kp49只对亚胺培南敏感,对其余21种抗菌剂均耐药。检出TEM、SHV、CTX-M-G1及DHA基因Ⅰ类整合子。检出1种新的CTX-M ESBLs基因亚型,全长876 bp,与blaTX-M-14相比有1个核苷酸不同(GenBank登陆号:EF446126)。blaCTX-M-like的上游是ISEcp1B的遗传元件,下游是插入序列IS903的保守序列组成复合转座子。可能是ISEcp1B序列通过转座子机制俘获β-内酰胺酶,并提供-35及-10位点2个启动子,对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达起重要的调控作用。结论插入序列ISEcp1B与IS903组成的复合转座子可能介导了新的CTX-M ESBLs基因亚型的水平传播,并驱使其高度表达,使Kp49对多种抗菌剂耐药。

血清tPSA和cPSA测定对前列腺疾病诊断的价值

目的探讨血清cPSA测定在前列腺癌诊断中的价值。方法用化学发光法测定良性前列腺增生和前列腺癌患者血清tPSA、cPSA和fPSA,并进行各种PSA的稳定性试验。结果新鲜血清于4℃放置1周后,tPSA和cPSA含量基本无变化,但fPSA下降了11%。在本组181例病例的前列腺癌筛选中,cPSA的敏感性为86.8%,特异性为63.3%,准确性为70.2%,其作用与tPSA相当。早期前列腺癌(A、B期)患者,cPSA优于tPSA(P<0.001),当tPSA浓度为2.5-10ng/ml时,cPSA的敏感性、特异性和准确性均高于tPSA,其差异有显著性(P<0.05)。结论在4℃放置条件下,cPSA的稳定性最好。cPSA在tPSA为2.5-10ng/ml时,对早期前列腺癌的诊断优于tPSA。

利用微波加速EBVCA－IgA的免疫酶检测

利用微波加速ＥＢＶＣＡ－ＩｇＡ的免疫酶检测廖伟娇欧阳立杰高启键黄灿东（广州医学院第一附属医学，广州５１０１２０）关键词微波ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＡ微波在医学检验上的应用日益广泛〔１～４〕。目前用于检测ＥＢ病毒血清抗体的免疫酶法反应时间较长，我们利用微波来...

绿脓杆菌菌毛制剂对人PBMC表达CD2、CD25、CD69抗原的促进作用

目的 :探讨含Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型菌毛的绿脓杆菌制剂 ,在体外对正常人外周血单个核细胞 (PBMC)的活化作用。方法 :以绿脓杆菌菌毛制剂 ,作用于体外培养的人PBMC ,采用生物素 -链霉亲和素 (BSA)免疫细胞化学法 ,检测人PBMC表面CD2、CD2 5、CD6 9的表达。结果 :该制剂在实验最适条件下 ,可使PBMC上CD2表达率增加15 2 % ,CD6 9表达率增加 2 9.1% ,CD2 5的表达率增加 18.7% ,这与对照组比较差异非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :绿脓杆菌菌毛制剂在体外能有效地促进单个核细胞的活化 ,提示该制剂可增强机体的细胞免疫功能。

α_1-抗糜蛋白酶基因多态性与阿尔茨海默病相关性探讨

目的 :探讨阿尔茨海默病 (AlzheimerDisease,AD)患者中α1 抗糜蛋白酶 (AACT)基因的多态性及其与AD的相关性。方法 :利用聚合酶链反应 (PCR) 限制性片段长度多态性 (RFLP)技术 ,对 4 8例AD患者及 86例对照者的AACT信号肽基因进行分型 ,并进行AD与AACT信号肽基因多态性的相关分析。结果 :①AD病人AACT信号肽A/T基因型占 2 7 1% ,明显低于对照组的 5 1 2 % (P <0 0 1,RR =0 35 5 ) ,T/T占 6 0 4 % ,明显高于对照组的 37 2 % (P <0 0 1,RR =2 5 76 ) ,A/A占 12 5 % ,与对照组 11 6 %无显著性差异 (P >0 0 5 ,RR =1 0 86 )。②AD病人中AACT信号肽等位基因A的频率为 2 6 0 % ,T的频率为 74 0 % ,与对照组 (A37 2 %、T 6 2 8% )无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :AD病人的AACT T/T可能与AD存在正相关 ;而AACT

浅论LIS与TLA之间高效的信息互动

目的探讨全实验室自动化(Total laboratory autom ation,TLA)系统中,实验室信息系统(laborato-ry inform ation system,LIS)的样本条码信使的角色功能;LIS与设备间的双向通讯中,采用何种码制模式,使其更加贴近通讯的需求。方法在目前国内首条包含血液细胞检测系统、凝血功能检测系统、生化检测系统和发光免疫分析系统的TLA系统中,构建与之匹配的LIS系统,实施样本条码生成、完成标本信息注册、标本交接、获取标本检测目的、实现与设备间的双向控制、质量管理、科室查询等工作。结果LIS应用于整个TLA系统,规范了工作流程,达到全过程的标准化管理,提高了工作效率。结论LIS是TLA的信息流入口,其与TLA的匹配完善程度是整个流程能否顺利进行的关键,构建完整的LIS系统,才能使TLA成为一个高效、智能化的体系。

SARS患者心肌酶变化及其临床意义

目的分析严重急性呼吸综合征(SARS)患者心肌酶的变化特点。方法用常规方法,检测84例(9例死亡,8例插管,30例无创通气,37例无辅助通气)SARS患者的心肌酶指标。结果SARS患者发病3～6d起,心肌酶开始上升,但上升的幅度差异很大。18例(21.4%)SARS患者,整个病程血清心肌酶均在正常参考范围。α-HBDH、AST、LDH、LD-1、CK和CK-MB的异常率分别为60.7%、53.6%、77.4%、44.0%、38.1%和28.4%。SARS患者心肌酶随病情变化而改变,病情越重,升幅越大,异常率越高,死亡组和插管组患者心肌酶平均峰值和异常率明显高于无创通气组(P<0.001),无创通气组患者又明显高于无辅助通气组(P<0.001)。除死亡组外,多数患者心肌酶在4周内恢复正常。结论大部分SARS患者心肌酶异常,部分出现心肌损害,临床上应予足够的重视。

吸烟者唾液表皮生长因子含量的变化

目的：了解吸烟者唾液表皮生长因子（EGF）含量的变化。方法：应用放射免疫方法，测定32例吸烟者和32例与之相配的正常对照者的唾液EGF浓度。结果：吸烟者唾液EGF浓度为0．41－1．46ng／ml，平均0．96±0．24ng／ml，显著低于正常对照组（1.10－2．18ng／ml，平均1．64±0.28ng／ml，P＜0．01），吸烟超过10年者和日吸烟量超过40支者，下降更明显（58．5％和61．0％）。经相关分析，烟龄和日吸烟量与唾液EGF浓度呈负相关关系（r＝0．52和r＝－0．64，P＜0．05）。结论：吸烟引起唾液EGF含量下降，与烟龄和烟量呈负相关关系。

吸烟对唾液表皮生长因子水平的影响研究

吸烟对唾液表皮生长因子水平的影响研究廖伟娇１吉建新２１．广州医学院第一附属医院检验科（５１０１２０）２．广州医学院第一附属医院口腔科表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）是一种由５３个氨基酸组成的多肽类物质，广泛存在于组织...

利用微波加速EB病毒VCA—lgA的检测反应

近年来,微波在医学上的应用日益广泛。目前用于检测EB病毒血清抗体的免疫酶法反应时间较长,我们利用微波来处理抗原、抗体反应,试图寻找一种快速、灵敏、稳定的检测VCA-lgA的方法。

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用噻唑盐(MTT)法检测bFGF和IGF-1单独或联合应用时对人PDL细胞增殖的影响。结果bFGF和IGF-1单独应用时均可明显促进PDL细胞增殖,在实验的5d范围内,bFGF浓度在1～100ng/ml和IGF-1浓度在1～100ng/ml时呈浓度-时间依赖关系,bFGF最佳效应浓度为10ng/ml(比对照组增加了247.8%),IGF-1最佳效应浓度为100ng/ml(比对照组增加了236.5%),两者的最佳效应时间均为3d。以二者的最佳效应浓度联合应用时,作用更为显著,培养3d时比对照组增加了290.4%(P<0.001)。结论bFGF和IGF-1均能促进人PDL细胞的分化和增殖,二者联合应用有协同效应。

尿液红细胞检测和隐血试验的临床应用及影响因素

目的:对比四种不同方法检测尿液红细胞和血红蛋白的结果,以分析其影响因素和临床价值。方法:采用UF-100尿沉渣分析仪、尿沉渣显微镜检查尿红细胞、干化学法、胶体金单克隆抗体法隐血试验对167份尿液联合检查,对四种检测结果进行对比。结果:以镜检法为标准UF-100尿沉渣分析法红细胞准确度为86.2%,干化学法红细胞准确度为85.0%。尿隐血试验中,干化学敏感性为300μg/L,单克隆抗体隐血为200μg/L,干化学与胶体金单克隆抗体隐血指标(金标准)对比,干化学隐血法的敏感度为80.7%,特异性为84.3%。结论:四种检测方法的联合应用更能提高尿液检查的质量,对疾病的诊断、治疗及病程中动态观察有重要的参考价值。