降解玉米赤霉烯酮菌株的鉴定及其发酵条件优化

从土壤样品中得到一株能降解玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的菌株ZENL09,对该菌株的形态特征、生化理化特性和16r s RNA进行分析鉴定,并通过单因素实验得出ZENL09的较优的发酵条件。结果表明:ZENL09为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其较优的发酵条件为:发酵时间24 h,发酵温度33℃,摇床转速200 r/min,装液量25 mL/250 mL,接种量3%,在此条件下,ZENL09发酵上清液对ZEN的降解率达到了96%。

微生物葡萄糖氧化酶的研究进展

葡萄糖氧化酶是一种能够专一性催化β-D-葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢的需氧脱氢酶,在食品、医药、化工、纺织、生物技术等领域具有重大应用价值。微生物是产葡萄糖氧化酶的主要来源,具有生长繁殖快、产酶效率高、纯化过程简单、适合商业化生产等特点。该文从产葡萄糖氧化酶的微生物来源、产酶菌株的基因工程改造及葡萄糖氧化酶的应用等方面对微生物葡萄糖氧化酶进行综述,为产葡萄糖氧化酶微生物的开发及基因工程技术在菌种选育上的应用提供理论参考。

黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达及产酶条件的优化

从黑曲霉中克隆葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,E.C.1.1.3.4,GOD)基因,使其在毕赤酵母GS115中高效表达,为葡萄糖氧化酶的工业化生产提供理论依据。通过设计简并引物,扩增GOD,将该基因连接到质粒pPICZαA上并在毕赤酵母中表达,依据摇瓶水平优化最佳诱导产酶条件,在30 L发酵罐中进行发酵放大试验,共表达His4,采用DO-STAT的甲醇流加策略进行高密度发酵。结果表明,重组毕赤酵母GS115/pPICZαA-GOD在摇瓶水平经0.5%甲醇诱导96 h,发酵液上清GOD酶活达到32.25 U/mL。经优化得到最佳发酵条件为:在30℃、pH 6.0、250 r/min条件下,发酵液体积1%的甲醇诱导96 h,GOD酶活达到50.1 U/mL,相比初始发酵,酶活提高了55.3%。经30 L发酵罐放大试验,GOD酶活达到307.52 U/mL,提高了5.1倍。共表达His4使细胞湿重提高了72.5%,GOD酶活达到了461 U/mL,相比初始重组酵母提高了50.2%。SDS-PAGE分析发现GOD分子量约90 kD。重组GOD能在毕赤酵母中高效表达,且表达产物纯度高,杂蛋白少,有利于纯化。